微生物检测岗位工作流程

一、标本的采集与种类（含一般检验流程）基本原则（虽然检验人员不用负责标本的采集，但一些基本原则应该掌握)1.尽量病程早期、症状典型以及在使用抗生素以前采集。2.标本应使用无菌容器盛放。常见的微生物检验标本种类1.血液：血液为无菌液体，因此在采集时要避免皮肤的正常菌群污染。多采用血培养瓶运送，随后放入血培养系统自动培养。如有报阳则进行下一步检验：涂片镜检报给临床初步结果；需氧和厌氧瓶分别转种血平板，巧克力平板与厌氧血平板等；随后进行菌种鉴定以及药敏试验。2.脑脊液：脑脊液标本一般需要进行离心，是为了富集。一般检验流程为进行涂片镜检，包括革兰染色，抗酸染色与墨汁染色等。增菌管进行增菌，分离培养转至血平板，巧克力平板，沙保弱平板等。3.痰液：痰液镜检一般包括革兰染色与抗酸染色，分离培养多用巧克力平板和血平板。4.尿液：尿液常做定量检测，取10微升尿液进行连续划线。5.粪便：常用革兰染色做菌群比检测；分离培养多用麦康凯与SS平板。二、标本的接种与染色镜检一般标本完成之后，就可以进行接种与涂片镜检操作。1.常用接种方法：连续划线法：用于分离杂菌不多的标本，例如尿液。分区划线法：最常用的方法，大多数标本的分离方法。棋盘划线法：用于杂菌多的标本分离，例如粪便。涂布接种法：常用于纸片药敏测定中。2.常用接种的培养基

血平板：适合各类细菌的生长，一般细菌检验标本的分离都应接种血平板。同时血平板还有一个非常重要的作用——观察溶血反应。巧克力平板（不加抗生素）：有V、X因子，适于接种疑有嗜血杆菌和奈瑟菌的标本。淋病奈瑟氏菌可形成灰白或粘液样的小菌落。流感嗜血杆菌形成潮湿的珍珠样小菌落（直径约1mm），具有鼠臭。α-溶血的链球菌形成草绿色溶血环。巧克力平板为非选择性培养基，大多数非苛养菌都可生长。巧克力平板（加抗生素）：与普通巧克力不同的是，它加入了杆菌肽。可抑制多数细菌的生长，用于筛选嗜血杆菌。麦康凯平板：其中的胆盐可以抑制革兰阳性细菌的生长,而对伤寒等沙门菌有促进生长的作用。同时也是非发酵菌鉴定的重要依据，沙门菌及志贺菌呈无色菌落,大肠埃希菌呈桃红色菌落。SS平板：SS琼脂为强选择性培养基，用于志贺菌和沙门菌的分离。营养肉汤：用于各类细菌的增菌。血液培养基：一般用于全血的培养，也可用于骨髓以及其他分泌物培养。（采用全自动血培养仪）3.培养方法需氧培养法：用于需氧和兼性厌氧菌，35℃，18-24小时，一般细菌可生长良好。二氧化碳培养法：流感嗜血杆菌，奈瑟菌等需要在5%-10%的二氧化碳培养箱中才能良好生长。厌氧培养法：适用于兼性厌氧和专性厌氧菌。常用的有厌氧罐法，气袋法和厌氧手套箱法。4.常用染色方法革兰染色：是最常用的方法，阴性菌呈现红色，阳性菌为紫色。（原理：革兰氏阳性细菌由于细胞壁较厚、肽聚糖含量较高和其分子交联度较紧密，故在用乙醇洗脱时，肽聚糖网孔会因脱水而明显收缩，加上它基本不含类脂，故乙醇处理不能在壁上溶出缝隙，因此，结晶紫与碘复合物仍牢牢阻留在细胞壁内，使其呈现紫色。而革兰氏阴性细菌因其壁薄、肽聚糖含量低和交联松散，故遇乙醇后，肽聚糖网孔不易收缩，加上它类脂含量高，所以当乙醇把类脂溶解后，在细胞壁上就会出现较大缝隙，复合物容易溶出细胞壁，因此通过乙醇脱色后，细胞又成无色。这时再用红色染料进行复染，革兰氏阴性细菌将获得一层新的颜色--红色，而革兰氏阳性菌则仍呈紫色。）抗酸染色：用于抗酸杆菌的查找，例如结核分枝杆菌。（原理：分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。）特殊染色：包括荚膜染色，芽孢染色等。三、培养接种完成之后，根据不同的检验目的分别放于不同的培养箱，常用的培养方法即以上提到的三种。有一些实验室只有一个细菌培养箱，同样放入即可。四、细菌的生长现象（此处仅指固体平板）培养完成后，应当及时观察细菌的生长现象，为后面的检验打下基础。1.菌落的表面特征：光滑型菌落（S型），粗糙型菌落（R型），黏液型菌落（M型）。2.血平板溶血现象：α溶血（草绿色部分溶血的不完全透明的溶血环）；β溶血（清晰透明的溶血环）；γ溶血（无溶血环）；双环（完全溶血外还有一个部分溶血圈）。3.气味：铜绿（生姜味）；厌氧梭菌（腐败恶臭味）。五、细菌鉴定与药敏目前医院的细菌鉴定主要是两套仪器。1.质谱仪：质谱仪的鉴定原理为细菌蛋白图谱，具有快速，准确等优点，为后续的药敏试验提供更加精确地指