CN114031656B 一种治疗泌尿系统结石症相关疾病的药物及其制备方法 （张弘）

第二活性成分的呫吨酮类化合物和选自下式等典型试验指标的效果明显优于枸橼酸氢钾钠，显示其在治疗泌尿系统结石症及泌尿系统结石2所述药物用于治疗或预防泌尿系统结石症、及泌尿系统结石其中所述瓜子金药用活性提取物是通过包括如取步骤(1)所得的瓜子金原料，以瓜子金原料重量6～15倍的去34.如权利要求1或2所述的用途，其中在步骤(3)中，所述聚酰胺4[0002]泌尿系统结石症(简称尿石症)是人类最早发出凝聚而成。尿结石的发病机制与尿中存在促使形成结石的盐类过饱和的因素(如盐类排制物异常有关。特发性高钙尿症[男性尿钙>300mg/d(>7.5mmol/d)，女性>250mg/d橼酸尿症[尿枸橼酸<350mg/d(<1820μmol/d)]单独存在或伴有其他疾病时，可促使结石形5部位的分离纯化工艺，并公开了瓜子金总黄酮和总皂苷提取物是抗炎有效部位。专利定分子结构的化合物。因此很难将瓜子金全草开发成符合现代药用标准的天然药物，事实上，目前市场上仅有瓜子金复方制剂销售，连作为单一中草药使用的瓜子金都没有上市销售。6提取得到的包含式(I)特定结构的黄酮醇类化合物药用活性[0018]R1为选自-OH,-O-Glc,-O-Gal,-O-Api,-ORha,-O-Glc-Glc,-O-Glc-Gal,-O-Glc-Api,-O-Glc-Rha,-O-Gal-Glc,-O-Gal-Gal,-O-Gal-Api,-O-Gal-Rha,-O-Glc-Glc-Api,-O-Glc-Rha,-O-Gal-Glc,-O-Gal-Gal,-O-Gal-Api,-O-Gal-Rha,-O-Api-Glc,-O-Api-Gal,-O-7[0028]在优选的技术方案中，所述的作为第一活性成分的式(I)结构的黄酮醇类化合物Gal-Glc,-O-Gal-Gal,-O-Gal-Rha,-O-Glc-Glc-Api,-O-Gal-Glc-Api,-O-Glc-Gal-Api，-Rha,-O-Gal-Glc,-O-Gal-Gal,-O-Gal-Api,-O-Gal-Rha,-O-Glc-Glc-Api,-O-Gal-Glc-8[0041]所述的作为第二活性成分的式(II)结构的呫吨酮(Xanthone)优选选自下式(II-9分的式(I)结构的黄酮醇类化合物、以及任选的作为所述第二活性成分的式(II)结构呫吨分含量(％)是根据业界通行的方法使用HPLC积分面积归一法[0056]取步骤(1)所得的瓜子金原料若干，以约瓜子金原料重量6～12倍的、浓度20~[0060]将步骤(2)中的瓜子金总水提物或总醇提物浓缩液用大孔吸附树脂或聚酰胺树脂[0061]在上述提取方法中，优选所述步骤(3)中所述大孔树脂选自D101型、HPD100型、[0063]在上述提取方法中，优选所述步骤(3)中所述大孔树脂选自D101型或AB-8型大孔[0068]在一个优选的技术方案中，所述的药物组合物进一步包含药学上可接受的载体、的研究表明，关键在于本发明选取的作为主要活性成分的式(I)和式(II)化合物在所述的黄酮类化合物和呫吨酮(Xanthone)的羰基的#位具备一个羟基取代基，该羟基与酮羰基共[0076]本发明的瓜子金药物活性提取物还可以采用制剂学的常[0080]图3为本发明的瓜子金地上部分聚酰胺树脂梯度洗脱后所得有效部位的HPLC分析[0089]图12为本发明药物的肾小管扩张病变动物试验HE镜下观察结果(枸橼酸氢钾钠药[0108]使用HPLC对所获得瓜子金全草水提提取浓缩液进行指纹图谱分析(具体参见说明其他种类的几十种化合物。其中HPLC图谱中，呫吨酮(Xanthone)出峰时间在12-25分钟之[0110]全草提取对药用植物的消耗是巨大的，考虑到市售的瓜酮醇类化合物母核的差异又将黄酮醇类化合物进行型(比如是葡萄糖还是半乳糖)、糖苷与糖苷的糖链链接位置(比如是1-2链接，还是1-4链母核为槲皮素的一类黄酮醇苷，结构判断中302-162-132表示黄酮醇苷元母核为槲皮素连接一个葡萄糖(或半乳糖)在这个葡萄糖(或半乳糖)上连接一个芹糖，302为槲皮素母核，[0123]经HPLC和多级串联MS分析，初步确认瓜子金地上部分的醇提物主要包含如下成300的Rhamnocitrin或3,4',5-Trihydroxy-7-methoxyflavone,或7-methoxyl-Rha,-O-Gal-Glc,-O-Gal-Gal,-O-Gal-Rha,-O-Glc-Glc-Api,-O-Gal-Glc-Api,-O-Glc-量316的Rhamnetin或3,3',4',5-Tetrahydroxy-7-methoxyflavone，或7-methoxyl-Api,-O-Glc-Rha,-O-Gal-Glc,-O-Gal-Gal,-O-Gal-Api,-O-Gal-Rha,-O-Glc-Glc-Api,-O-quercetin,所述化合物具有如下[0141]5、化合物类别为F-Q的黄酮醇苷类化合物。其中，苷元结构是分子量为302的[0144]6、化合物类别为F-74K的黄酮醇苷类化合物。其中，苷元结构是分子量为314的[0148]通过二次质谱能够确认所述瓜子金呫吨酮(Xanthone)类化合物选自下式(II-1)、[0155]HPLC和多级串联MS分析，能够确认本申请的瓜子金地上部分醇提物中包括PolygalasaponinVIII,PolygalasaponinXXI,PolygalasaponinX,Polygalasaponin25％-5050％-7575％-95％乙醇梯度洗脱，洗脱流速以每小时0.5-2倍柱床体积的进脂柱，吸附完毕后，先用2-8倍树脂量的水洗脱除杂，再分别用2-5倍柱床体积的0-25％、[0163]使用HPLC对所获得瓜子金地上部分提取浓缩液经聚酰胺树脂柱乙醇梯度洗脱浓[0164]经HPLC分析确定其中0-25％乙醇洗脱部分的橙红色洗脱浓缩液，有效成分(I)、[0166]将瓜子金地上部分的富集有效成分经过HPLC-MS分析，其中的MS分析包括正离子和负离子以及MS-MS,MS-MS-MS分析，并将分析结果与现有文献进行比对确认了如下表2的物)以及具体提取精制的工艺条件的不同，都可能导致所获得活性成分提取物中活性成分结构及含量存在不同程度的差异。本发明优选为新鲜的或者干燥的瓜子金地上部分经水[0175]HPLC-MS-MS在确定黄酮醇类化合物的母核以及在分子内有多个糖环存在的时候[0176]通过半制备的HPLC进行了纯化对实施例5制备的提取物进行进一步分离纯化，分[0193]F-7Q-1的化合物名称为：Rhamnetin3-O-β-D-glucopyranosyl(1→2)-β-D-galactopyranoside，或Rhamnetin-3-O-(2″-O-β-D-glucopyranosyl)-β-D-β-D-galactopyranoside，或ORRhamnocitrin-3-O-(2″-O-β-D-glucopyranosyl)-β-D-[0207]基于上述波谱分析数据，最终确认主要活性成分化合物F-74Q-1确切空间结构式(以芦丁为标准物质做标准曲线)测定的有效物质浓度约130[0219]36只SD大鼠购自上海斯莱克，许可证号：SCXK(沪)2017‑0005，合格证号：组织中枸橼酸氢钾钠药组浓度最高，与模型组及正常组相比均具有极显著性差异(P<[0241]血清中CRE水平从高到低依次为模型组>中剂量治疗组>枸橼酸氢钾钠药组>低剂[0242]血清中BUN水平从高到低依次为模型组>低剂量治疗组组>枸橼酸氢钾钠药组>中物质(水提物经聚酰胺树脂柱0-25％乙醇洗脱后的化合物)在治疗肾结石的三个关键指标系统结石症后的辅助用药具备极为良好的潜