《黄花倒水莲鉴别 超高效液相色谱指纹图谱法》

T/GXAQXXXX—XXXX

黄花倒水莲鉴别超高效液相色谱指纹图谱法

1范围

本文件界定了黄花倒水莲和超高效液相色谱指纹图谱法的定义，规定了超高效液相色谱指纹图谱鉴

定黄花倒水莲的方法。

本文件适用于中药材黄花倒水莲的鉴别。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

黄花倒水莲

远志科植物黄花倒水莲（PolygalafallaxHemsl.）的干燥根。

指纹图谱chromatographicfingerprint

本标准特指黄花倒水莲经过适当处理后，采用超高效液相色谱法分析，得到的能够反映其化学特征

的色谱图。

相似度similarity

表征两张指纹图谱相似程度的参数。

特征色谱峰thecharacteristicchromatographicpeaks

色谱图中具有一定特征性的色谱峰。

4原理

样品粉碎后经甲醇提取，以超高效液相色谱在256nm波长下测定样品溶液的指纹图谱，根据样品溶

液与黄花倒水莲对照标准图谱的相似程度进行比较，使用中药指纹图谱相似度软件计算样品溶液的相似

度，根据相似度判断黄花倒水莲的真伪。

5试剂与材料

除另有规定外，所有试剂均为色谱纯，水符合GB/T6682规定的一级水。

2

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试剂

甲酸

乙腈

甲醇（分析纯）

乙酸乙酯（分析纯）

溶液配制

0.1%甲酸水溶液：取甲酸1mL，加水稀释至1000mL。

材料

0.22μm尼龙滤膜。

移液管：20mL。

标准品

4-β-D葡萄糖基-1,3,7-三羟基呫吨酮、7-O-甲基杧果苷、远志黄酮Ⅲ。

参照物溶液的制备

取上述标准品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含4-β-D葡萄糖基-1,3,7-三羟基呫吨酮40μg、

7-O-甲基杧果苷20μg、远志黄酮Ⅲ各20μg的混合溶液，即得。

6仪器和设备

超高效液相色谱仪配紫外检测器。

电子天平：感量为0.01mg。

超声波仪。

水浴锅。

粉碎机。

7分析步骤

样品前处理

取黄花倒水莲样品经粉碎机粉碎，过4号筛，取粉末约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入

甲醇20mL，称重，超声处理（功率100W，频率40kHz）60min，取出，放至室温，用甲醇补足减失重量，

用0.22μm微孔滤膜滤过，即得。

测定

7.2.1液相色谱条件

a)色谱柱：WatersUPLCT3C18色谱柱(2.1mm×150mm，1.6μm)，或相当者；

b)流动相：A为0.1%甲酸水溶液,B为乙腈，梯度洗脱条件见表1；

c)流速：0.3mL/min；

d)柱温：35℃；

e)进样量：2μL。

3

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表1液相色谱梯度洗脱条件

时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）

0～5955

5～3095→855→15

30～4085→7915→21

40～4579→1021→90

40～4110→9590→5

41～60955

7.2.2测定法

分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各2μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。

7.2.3方法精密度

在重复性条件下对同一样品连续进行两次测定，共有峰保留时间相对偏差≤1.5%。

8结果

供试品指纹图谱中应分别呈现相应的参照物色谱峰保留时间相同的色谱峰。

按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.80。

9对照指纹图谱

对照指纹图谱见附录A。

4

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附录A

（资料性）

黄花倒水莲对照指纹图谱

图A.1黄花倒水莲对照指纹图谱

a峰2：4-β-D葡萄糖基-1,3,7-三羟基呫吨酮

b峰3：7-O-甲基杧果苷

c峰4：远志呫吨酮Ⅲ

5

（征求意见稿）

广西壮族自治区中医药研究院

2025.04

一、项目来源

根据《广西质量协会关于〈黄花倒水莲鉴别超高效液相色谱指纹图谱法〉

等四项团体标准立项的通知》（桂质协字〔2025〕30号）文件精神，由广西壮

族自治区中医药研究院提出，广西中药质量标准研究重点实验室，金秀瑶族自治

县大健康产业发展中心，金秀瑶族自治县瑶医医院，广西壮族自治区药品检验研

究院共同起草的团体标准《黄花倒水莲鉴别超高效液相色谱指纹图谱法》（项

目编号:2025-0202）。

二、项目背景及目的意义

中药黄花倒水莲别名黄花远志、黄花参、鸡仔树、吊吊黄等，是远志科植物

黄花倒水莲（PolygalafallaxHemsl.）的干燥根。味甘、苦，性平，归肝、脾、肾

经，有补益、强壮、祛湿、散淤的作用。黄花倒水莲是一种灌木植物，高1-3米，

根粗壮多分枝，表皮淡黄色，其叶片膜质，披针形至椭圆状披针形，长8-20cm，

叶面深绿色，背面淡绿色，两面均被短柔毛；花序总状，顶生或腋生，花黄色，

下垂成串，故得名“倒水莲”。主要分布于中国南方，如江西、福建、湖南、广

东、广西、云南等地，生长于海拔360-1650米的山谷林下或溪旁荫湿处。黄花

倒水莲的根、茎、叶均可入药，根的应用最为广泛，壮、瑶、苗、侗等少数民族

中均广泛使用，瑶族称其为“杜坑令密”，用于产后虚弱、肝炎、子宫脱垂，壮

族用于补气壮筋骨，侗族用于跌打损伤等，是华南地区著名的民族药，除药用之

外，民间也常用作煮水和煲汤的食材，以达到养生保健的目的。

随着应用价值的不断挖掘，野生资源已渐渐无法满足市场对黄花倒水莲的需

求，广西多地开展黄花倒水莲的栽培和种植，随着种植规模的加大如何有效评价

药材质量成为限制黄花倒水莲产业发展的重要难题。目前《中国药典》还未收载

黄花倒水莲的药材标准，黄花倒水莲的地方标准收载在《广东省中药材标准》、

《湖南省中药材标准》、《广西中药材标准》、《广西壮族自治区瑶药材标准》、

《广西壮族自治区壮药材标准》等地方标准中。但这些标准检测项目仅包含性状、

显微鉴别和薄层鉴别等简单评价方法，缺少专属性强的鉴别方法和含量测定方

法，无法科学，准确评价药材质量。质量标准的不完善极大的限制了黄花倒水莲

的应用及产品开发，同时也为药用资源的评估与优选带来了不便。所以完善和提

高现有黄花倒水莲药材的标准，是黄花倒水莲药用资源开发应用的先决条件，也

是广西黄花倒水莲道地药材产业发展的重要环节。

目前《中国药典》还未收载黄花倒水莲的药材标准，黄花倒水莲的地方标准

收载在《广东省中药材标准》、《湖南省中药材标准》、《广西中药材标准》、

《广西壮族自治区瑶药材标准》、《广西壮族自治区壮药材标准》等地方标准中。

但标准检测项目仅包含性状、显微鉴别和薄层鉴别的简单评价方法，缺少专属性

强的鉴别方法和含量测定方法。质量标准的不完善极大的限制了黄花倒水莲的应

用及产品开发，同时也为药用资源的评估与优选带来了不便。所以完善和提高现

有黄花倒水莲药材的标准，是黄花倒水莲药用资源开发应用的先决条件，也是广

西黄花倒水莲道地药材产业发展的重要环节。

中药指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段，它是以中药化学成分系统

研究为基础，通过特定的分析手段，建立中药材多指标成分特征图谱，可以科学、

有效评价中药材质量的真实性、优良性和稳定性。本项目在对黄花倒水莲化学成

分充分研究的基础上，利用超高效液相色谱技术建立了广西主要产地黄花倒水莲

的中药色谱指纹图谱，确定了5个共有峰并指认了其中4个峰，该方法可有效区

分黄花倒水莲及其相似药材，对于不同产地黄花倒水莲的质量评价也具有重要意

义。

三、项目编制过程

（一）成立标准编制工作组

团体标准《黄花倒水莲鉴别超高效液相色谱指纹图谱法》项目任务下达

后，广西壮族自治区中医药研究院成立了标准编制工作组，制定了标准编写方

案，明确任务职责，确定工作技术路线，开展标准研制工作，具体标准编制工

作广西壮族自治区中医药研究院提出，广西中药质量标准研究重点实验室，金

秀瑶族自治县大健康产业发展中心，金秀瑶族自治县瑶医医院，广西壮族自治

区药品检验研究院等相关人员配合。

标准主要起草人员

研制现从事

姓名职务/职称所在单位

人员专业

项目中药民族药质量标准

袁健童助理研究员广西壮族自治区中医药研究院

负责人研究

主胡仁传副研究员民族植物学广西壮族自治区中医药研究院

要赖克道研究员中医学广西中药质量标准研究重点实验室

参张颖副主任药师中药化学广西壮族自治区中医药研究院

加黄云峰主任药师中药资源学广西壮族自治区中医药研究院

人梁祖兴主任瑶医药大健康产业金秀瑶族自治县大健康产业发展中心

员杨曼生副院长瑶医药产业技术研究金秀瑶族自治县瑶医药产业技术研究院

梁琼平院长瑶医药临床金秀瑶族自治县瑶医医院

柴玲研究员中药学广西中药质量标准研究重点实验室

冯军副主任药师药物分析广西中药质量标准研究重点实验室

李星宇副主任药师药理学广西壮族自治区中医药研究院

罗秋香副院长中医学/瑶医药临床金秀瑶族自治县瑶医医院

屈信成副主任药师中药鉴定广西壮族自治区中医药研究院

赵梓颐研究实习员分子鉴定广西壮族自治区中医药研究院

王倩云研究实习员中药鉴定广西壮族自治区中医药研究院

李春连办公室副主任英语广西壮族自治区中医药研究院

谷立勍副主任药师药物分析广西壮族自治区药品检验研究院

黄涌波副主任瑶医药大健康产业金秀瑶族自治县大健康产业发展中心

谢晓婷品牌建设股股长瑶医药大健康产业金秀瑶族自治县大健康产业发展中心

霍娟娟产业规划股股长瑶医药大健康产业金秀瑶族自治县大健康产业发展中心

覃飞办公室副主任瑶医药产业技术研究金秀瑶族自治县瑶医药产业技术研究院

余凤琴二级主任科员瑶医药产业技术研究金秀瑶族自治县瑶医药产业技术研究院

覃钰凌中药士中药学金秀瑶族自治县瑶医医院

韦壹灵科研部干事中药学金秀瑶族自治县瑶医医院

（二）收集整理文献资料

标准编制工作组收集了国内外有关黄花倒水莲质量标准相关文献资料。主要

有：

《中国药典》四部标准（2020年版）

《广西中药材标准》（第二册）黄花倒水莲

《湖南省中药材标准》黄花倒水莲

《广东省中药材标准》（第二册）黄花倒水莲

《广西壮族自治区瑶药材质量标准》黄花倒水莲、黄花参（结端傍）

《广西壮族自治区壮材质量标准》黄花倒水莲（棵华现）

《地方标准》DB45/T2540-2022黄花倒水莲栽培技术规程

《团体标准》T/GDNB50—2021黄花倒水莲林下生产技术规程

（三）研讨确定标准主体内容

标准编制工作组在对收集的资料进行整理研究之后，2025年召开标准编制

会议，对标准的整体框架结构进行了研究，并对标准的关键性内容进行了初步探

讨。经过研究，标准的主体内容确定为黄花倒水莲和指纹图谱等的术语和定义、

原理、试剂与材料、仪器和设备、分析步骤、结果。

（四）调研及形成征求意见稿、送审稿

2025年4月，在前期工作的基础上，通过理清逻辑脉络，整合已有的参考

资料中有关黄花倒水莲质量标准的内容指标，并结合生产企业实际要求的基础

上，按照简化、统一等原则编制完成了团体标药准《黄花倒水莲鉴别超高效液

相色谱指纹图谱法》（草案）

2025年5月，标准编制工作组在广西壮族自治区中医药研究院会议室组织

涉及的部门专家对团体标准《黄花倒水莲鉴别超高效液相色谱指纹图谱法》（草

案）进行征求意见会。最终讨论形成团体标准《黄花倒水莲鉴别超高效液相色

谱指纹图谱法》（征求意见稿）和编制说明。

四、标准制定原则

（一）实用性原则

本标准是在充分收集相关资料和文献，调研分析黄花倒水莲生产、使用及质

量标准现状，在现有相关标准对黄花倒水莲要求的基础上，结合样品的实际检测

数据基础上起草的。符合当前黄花倒水莲产业发展需求，有利于行业的长期发展，

有利于提高我区黄花倒水莲质量，对推动黄花倒水莲产业的健康发展，具有较强

的实用性和可操作性。

（二）协调性原则

本标准编写过程中注意了与黄花倒水莲相关法律法规的协调问题，在内容上

与现行法律法规、标准协调一致。

（三）规范性原则

本标准严格按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的

结构和起草规则》的要求和规定编写本标准的内容，保证标准的编写质量。

（四）前瞻性原则

本标准在兼顾当前黄花倒水莲现实情况的同时，还考虑到了广西黄花倒水莲

产业快速发展的趋势和需要，在标准中体现了个别前瞻性和先进性条款，作为对

黄花倒水莲发展的指导。

五、主要关键指标及确定依据

标准的主体内容确定为黄花倒水莲鉴别超高效液相色谱指纹图谱法中的黄

花倒水莲、指纹图谱、相似度、特征色谱峰等的术语和定义、实验方法的原理、

试剂与材料、仪器和设备、分析步骤、结果。

（一）术语和定义

主要从方法的检测主体“黄花倒水莲”以及所使用的方法“指纹图谱”和

专业术语“相似度”、“特征色谱峰”，4个方面进行界定的术语和定义。

（二）实验方法的原理

经特定方法提取后的黄花倒水莲样品溶液，以超高效液相色谱在256nm波

长下进行分析，样品色谱图中呈现一系列特征色谱峰，使用中药指纹图谱相似度

软件对广西多个批样品图谱中特征峰进行相似度计算分析，最终形成广西黄花倒

水莲的对照指纹图谱，根据未知样品与黄花倒水莲对照指纹图谱的相似度判断黄

花倒水莲的真伪。

（三）仪器、试剂与样品

仪器：ThermoQ-ExactiveFOCUS型高分辨质谱仪、WaterH-CLASS超高效

液相色谱仪，赛多利斯十万分之一天平、舒美KQ-500MDE型超声波清洗仪45kHz

500W、江苏金怡HH-S6型恒温水浴锅、Milli-Q超纯水机。

试剂：色谱乙腈、色谱级甲酸（fisher）、超纯水、分析甲醇（广东光华科

技股份有限公司）、4-β-O-葡萄糖基-1，3，7三羟基黄酮（上海源叶生物科技

有限公司，批号：JB241853纯度：98.0%）、远志黄酮III（中国食品药品检定

研究院，批号：111850-202207，纯度95.8%）、7-O-甲基杧果苷（普思生物科技

有限公司，批号：L19A0885，纯度98.0%）。

样品：根据调研的黄花倒水莲在广西的生产使用情况，收集了来自广西多个

地区的野生和栽培品种黄花倒水莲样品共16批，收集福建产样品2批、广东产

样品1批、江西产样品2批作比较研究，详见表1样品信息表。

表1黄花倒水莲样品信息

序号批号产地采集日期

1JX001广西来宾市金秀县忠良乡永和村2024年12月

2JX002广西来宾市金秀县六巷乡大岭村2024年12月

3JX003广西来宾市金秀县六巷乡六巷村2024年12月

4JX004广西来宾市金秀县忠良乡二七屯2024年12月

5GP001广西桂平市紫荆镇田心村2024年12月

6GC001广西桂林市恭城县三江乡黄坪村2024年12月

7ZP001广西贺州市昭平县仙回乡马道坪2024年12月

8ZP002广西贺州市昭平县仙回乡茶山村2024年12月

9FJ001福建龙岩市上杭县临江镇2024年12月

10RJ001江西瑞金市象湖镇东升村2024年12月

11RH001广东仁化县鹅公龙村2025年2月

12PG001广西贺州市平桂区马凹村2025年2月

13FS001广西河池市凤山县885县道旁2025年2月

14JA001江西吉安井冈山市茨坪镇白银湖村2025年2月

15FJ002福建龙岩市上杭县临江镇2025年3月

16RS001广西柳州市融水县怀宝镇荣塘村2025年3月

17RJ002江西瑞金市泽覃乡泽覃村2025年3月

18LP001广西桂林市荔浦县新坪镇猪头山2025年3月

19LG001广西桂林市临桂区黄沙乡下瓦江屯2025年3月

20LS001广西桂林市龙胜自治县2025年4月

21JX005广西来宾市金秀县共和村2025年4月

22JX006广西来宾市金秀县忠良乡十八屯2025年4月

（四）实验方法

1.仪器方法

1.1供试品溶液制备取黄花倒水莲药材粉末2g，精密称定，置锥形瓶中，

精密加入甲醇20mL，称重，超声处理1小时，取出放置室温，用甲醇补足减失

重量，用0.22μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

1.2对照品溶液制备取4-β-O-葡萄糖基-1，3，7三羟基黄酮、远志黄酮III、

7-O-甲基杧果苷标准品适量，精密称定，用甲醇配制成每1mL含4-β-O-葡萄糖

基-1，3，7三羟基黄酮40μg、含远志黄酮III、7-O-甲基杧果苷各20μg的混

合对照品溶液。

1.3色谱条件色谱柱WtersCORTECST3柱（2.1mm×150mm，1.6μm），

柱温35℃，进样量2μL；0.1%甲酸溶液A-乙腈B，0～5min（95%A），5～30min

（95%～85%A），30～40min（85%～79%A），40～45min（79%～10%A），

45～46min（10%～95%A），46～60min（10%A），流速0.3mL/min。

2.液相色谱条件考察

2.1洗脱梯度的确定，以甲酸溶液A-乙腈B，0～5min（95%A），5～40min

（95%～10%A），结果如图1所示，发现黄花倒水莲大部分成分在80%A条件

下已经洗脱完全，经过多次调整，最终确定如1.3项所示的流动相洗脱条件。

流动相的选择，分别使用甲醇-水、乙腈-水作为流动相对样品进行分析,色谱

图如图2、3所示，乙腈-水作为流动相，特征峰更多、分离也更好，在流动相中

加入甲酸，色谱图如图4所示，色谱峰信息更多，峰强度更好，最终确定流动相

组成为乙腈-0.1%甲酸。

0.028

0.026

0.024

0.022

0.020

0.018

0.016

0.014

AU0.012

0.010

0.008

0.006

0.004

0.002

0.000

-0.002

2.004.006.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.0022.0024.0026.0028.0030.0032.0034.0036.0038.0040.00

分钟

图1流动相：乙腈-水，流动相比例：乙腈（5%→90%）

0.070

0.060

0.050

AU0.040

0.030

0.020

0.010

0.000

-0.010

2.004.006.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.0022.0024.0026.0028.0030.0032.0034.0036.0038.0040.0042.0044.00

分钟

图2流动相：甲醇-水

0.070

0.060

AU0.050

0.040

0.030

0.020

0.010

0.000

0.002.004.006.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.0022.0024.0026.0028.0030.0032.0034.0036.0038.0040.0042.0044.0046

分钟

图3流动相：乙腈-水

0.070

0.060

0.050

0.040

AU

0.030

0.020

0.010

0.000

2.004.006.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.0022.0024.0026.0028.0030.0032.0034.0036.0038.0040.0042.0044.00

分钟

图4流动相：乙腈-0.1%甲酸

2.2波长的选择，根据文献报道，黄花倒水莲的主要成分为糖苷和黄酮类成

分，紫外最大吸收集中在320nm和250nm两个区间，因糖苷类成分获取对照品

比较困难，故本实验以黄酮类成分作为指标，紫外波长选择256nm。两种波长下

的紫外图谱如图5、6所示，可见256nm下具有多个特征峰，特征峰响应强度理

想。

0.015

0.010

AU

0.005

0.000

-0.005

5.0010.0015.0020.0025.0030.0035.0040.00

分钟

图5波长320nm色谱图

0.030

0.020

AU

0.010

0.000

5.0010.0015.0020.0025.0030.0035.0040.00

分钟

图6波长256nm色谱图

2.3其他色谱条件的确定，流速太低整体分析时间较长，流速太高柱压超过

预警，最终确定流速为0.3ml/min，柱温提高有助于减少分析时间，当柱温超过

35℃后，部分目标峰分离度变差，故确定柱温为35℃。

4.特征峰的确定和指认。经过多批次黄花倒水莲样品的分析，最终确定5个

共有峰（图7），将样品注入高分辨液质联用仪，按照建立的色谱条件进行分析

（图8），根据质谱信息及文献报道，鉴定了21个化合物信息（表2），通过对

照品确认了共有峰中2、3、4号峰分别为4-β-O-葡萄糖基-1，3，7三羟基黄酮、

远志黄酮III、7-O-甲基杧果苷三种黄酮类成分。

图7黄花倒水莲特征图谱

RT:0.00-70.00SM:15B

1.24NL:

1001.60E9

TICMS

95HHDSL-

1119-NEG

90

85

80

75

70

65

601.73

55

50

45

40

35

30

28.14

25

28.36

2027.6131.82

25.89

28.80

2.02

1530.48

3.0920.81

24.3448.18

1032.7235.09

15.1222.62

20.5138.8841.23

4.2610.578.6211.9144.0650.7762.4452.04

547.9554.2157.57

19.19

62.8766.98

0

0510152025303540455055606570

Time(min)

图8黄花倒水莲高分辨质谱总离子流图

表2黄花倒水莲化学成分

保留时间实测值质量偏差

序号名称分子式理论值(m/z)

tR(min)(m/z)Δm(ppm)

4-Β-D-葡萄糖基-1,3,7-三羟基黄

19.86C19H18O10406.09406.091.97

酮

23,6′-二芥子酰基蔗糖15.22C34H42O19754.23754.231.46

37-O-甲基芒果苷10.90C20H20O11436.10436.101.61

43-羟基-1,4-二甲氧基黄酮24.23C15H12O5272.07272.073.31

5水杨酸12.47C7H6O3138.03138.03-12.32

6柠檬酸2.09C6H8O7192.03192.030.52

7远志黄酮III11.27C25H28O15568.14568.141.76

81,7-二羟基-2,3-亚甲二氧基黄酮29.29C14H8O6272.03272.032.94

9黄花远志素A29.60C33H40O18724.22724.22-0.41

10阿魏酸5.76C10H10O4194.06194.06-3.09

11远志糖苷C36.35C35H44O19768.25768.25-1.43

12远志皂苷B59.37C75H112O351572.701572.70-1.40

13远志寡糖C39.43C58H72O331296.401296.39-2.24

14西伯利亚远志糖A617.12C23H32O15548.17548.17-0.73

15西伯利亚远志糖A511.00C22H30O14518.16518.16-1.16

16西伯利亚远志黄酮B20.56C24H26O14538.13538.13-0.56

17常春藤皂苷元48.16C30H48O4472.35472.35-1.48

181,3-二羟基-2-甲氧基黄酮25.82C14H10O5258.05258.05-1.55

7-羟基-1-甲氧基-2,3-亚甲二氧基

1941.17C15H10O6286.05286.050.00

黄酮

201,3,6-三羟基-2,7-二甲氧基黄酮39.05C15H12O7304.06304.06-0.33

213,4-二甲氧基肉桂酸22.34C11H12O4208.07208.07-3.36

5.供试品制备方法的考察

提取溶剂种类：以水、甲醇、乙醇、50%甲醇、50%乙醇、30%甲醇、70%

甲醇作为溶剂，制作供试品溶液，进行分析，结果以甲醇作为溶剂，目标峰信号

最强，杂质较少。

提取方法：以甲醇作为溶剂，分别用超声和回流两种方法制备供试品溶液，

结果超声提取目标峰信号较强。

提取时间：以甲醇作为溶剂，采用超声提取的方法，分别提取30min、60min、

90min、120min，制备供试品溶液进样分析，结果提取90min目标峰响应最强，

但与提取60min相比超出不多，因本方法为定性鉴别方法，从节能环保和操作性

角度考虑，将提取时间定为60min。

6.系统适用性实验

6.1专属性

以甲醇作为空白溶液，将空白溶液、1.1项下的供试品溶液和1.2项下的对

照品溶液分别注入液相色谱仪，按照1.3项下的方法实验，记录色谱图，结果见

图9～11，黄花倒水莲图谱中可见于对照品图谱保留时间一致的色谱峰，阴性无

干扰。

图9空白溶液色谱图

图10供试品溶液色谱图

图11混合对照品色谱图

峰2：4-β-D葡萄糖基-1,3,7-三羟基呫吨酮，峰3：7-O-甲基杧果苷，峰4：远志呫

吨酮Ⅲ

6.2精密度

取同一份黄花倒水莲供试品溶液，按实验方法连续进样6次，记录共有峰保

留时间，结果如表3所示，各共有峰保留时间RSD%小于1.5%，表明仪器精密

度良好。

表3精密度实验结果（min）

峰号12345

16.4222.5225.5827.5635.76

26.4222.5725.6227.6235.69

36.5922.8825.9827.9836.09

46.4922.9826.0828.0736.12

56.5022.9226.0128.0036.04

66.5322.9526.0528.0336.08

平均6.4922.8025.8927.8835.96

RSD（%）1.010.890.870.810.52

6.3稳定性

取同一份黄花倒水莲供试品溶液，按实验方法每隔2小时进样1次，记录

24小时内各共有峰的保留时间，结果如表4所示，各共有峰保留时间RSD%小

于1.5%，表明方法稳定性良好。

表4稳定性实验结果（min）

峰号12345

16.4222.5225.5827.5635.76

26.4222.5725.6227.6235.69

36.5922.8825.9827.9836.09

46.4922.9826.0828.0736.12

56.5022.9226.0128.0036.04

66.5322.9526.0528.0336.08

76.4222.4025.4427.4235.58

86.4622.5525.6027.5735.63

96.5122.5025.5027.4035.47

106.5922.6325.6127.5235.58

116.4322.5325.6027.5635.62

126.4522.5425.6027.5535.54

136.4722.5226.5427.4735.44

平均6.48322.6525.7827.6735.74

RSD（%）0.920.891.230.900.70

6.4重复性

取同一批次份黄花倒水莲样品（JX004）6份，按照实验方法制成供试品溶

液并检测，记录各共有峰的保留时间，结果如表5所示，各共有峰保留时间RSD%

小于1.5%，表明方法重复性良好。

表5重复性实验结果（min）

峰号12345

16.4722.5825.5927.5835.68

26.5322.6925.7127.6635.73

36.5122.4825.4827.3935.46

46.4522.4926.3227.4735.51

56.5222.5626.3927.5435.64

66.5422.8025.9427.9136.01

平均6.5022.6025.9027.5935.67

RSD（%）0.550.551.470.660.55

6.5耐用性

分别使用四种色谱柱，柱1（安捷伦ZORBAXPlusC182.1×100mm1.8μ

m）、柱2（岛津Shim-packGISTC182.1×50mm1.9μm）、柱3（赛默飞Hypersil

GOLDC182.1×100mm1.9μm）、柱4（沃特世CORTECST3C182.1×150mm

1.6μm），按照实验方法对同一批次黄花倒水莲样品进行分析，计算各特征峰对

参照峰（S）峰的相对保留时间。结果见表6，各特征峰相对保留时间的RSD小

于3%，表明方法耐用性较好。

表6不同色谱柱条件下特征峰相对保留时间

峰号峰1峰2（S）峰3峰4峰5

柱10.2431.001.1051.2261.643

柱20.2441.001.1501.2571.638

柱30.2371.001.1051.2281.647

柱40.2401.001.1351.2241.587

RSD%1.31101.9771.2471.918

6.7.指纹图谱的建立

按照实验方法采集表1中22批样品的特征图谱，结果其中JX003、RH001、

ZP002、FJ001、FJ002共5批样品不完全具备5个特征峰，样品中两批产自广西、

两批产自福建、1批产自广东，剩余17批样均具有5个特征峰，剩余样品中4

批产自江西、13批产自广西，说明广西、江西产地黄花倒水莲成分组成比较接

近。将17批具有全部特征峰的样品数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系

统》软件，生成指纹图谱和对照图谱（图12、13）。利用软件计算各批样品与

对照图谱的相似度，结果见表7。结果相似度大于0.90的有12批，大于0.80的

有16批，考虑到药材很多为野生资源，生长环境差异较大，成分组成多样，故

将指标确定为供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.80，广西13

批样品中，有一批相似度低于0.80判定为不合格，不合格率为7.69%。

图12黄花倒水莲指纹图谱

图13黄花倒水莲指纹图谱-对照图谱

表7黄花倒水莲指纹图谱相似度计算结果

产地序号批号相似度计算结果

1PG0010.916

2JX0040.926

3FS0010.928

广西

4LS0010.927

5LG0010.829

6LP0010.894

7JX0050.918

8JX0060.926

9JX0020.753

10JX0010.921

11RS0010.821

12GC0010.928

13GP0010.927

14ZP0010.836