《生物技术 生物样品光度测定法中光学信号测量的最低要求》

13.13.223.33.43.5注1：术语“光学标准器”包括未校准的标准器和已校准的标准器。光学标准器可由内部组织分发或由实验室制备3.6注1：光学信号测量涉及例如生物发光、化学发光、荧光和吸光度3.7注：强度可用于表示光学信号的绝对强弱或相对强弱。可采用3.8），3.93.10注1：精密度通常用不精密程度以数字形式表示，如在规定测注2：规定条件可以是重复性测量条件、期间3.113.123.13注1：确认所需的客观证据可以是试验结果或其他形式的确定结3.14注1：验证所需的客观证据可以是检验结果或其他形式的确定结4注1：仪器的示例包括：发光检测仪、成像分析仪、荧光读板仪、流式细胞仪、微阵列扫描仪、荧光分光光度计、注4：试剂质量及其光物理和化学性质会影响样品的光注5：环境光辐射可能导致生物发光试剂、化学发光试注6：示例包括通过基于细胞的测定法评价细胞活性的方5注：光学标准器的示例包括基于LED的标准光源（采用LED进行发光检测仪确认的示例见附录D）、激光器、荧光注2：表达报告基因（包括生物发光、化学发光、荧光或比色报告基因）的细胞，其报告基因的表达水平在储存和传代过程中可能发生改变。长期传代过程中，报告注3：某些仪器设备、试剂和溶液具有不适宜于光学信号测量的特性，例如因其吸收/荧光/淬灭/磷光/腐蚀特性而产6注5：容器壁的吸附可能导致浓度测定值偏低，尤其是对于低浓度样品。根据仪器设计的不同，因高浓度样品前次5.2.1光学标准器注2：使用发光检测仪对发光生物样品进行比较测量时，标注3：关于适用标准物质的表征与评估方法见IS5.2.2动态范围注1：动态范围的评估通常作为光学信号测量仪注2：动态范围的下限可以用定量限表示，而其上限可以用灵敏5.2.3背景信号注3：光谱重叠可以通过使用单色样品（即采用与测试样品相同的荧光团或发光团进行染色或标记的样品）来确定75.3.1光学信号测量注1：通过调整样品浓度，有时可以使仪器注2：通过调整光源功率，照射到某些光电检测器上的5.3.2校准曲线注2：存在某些无需使用校准曲线法即可进行的定量方法，但前提是具备已校准的光密度测量方法，且摩尔衰减系5.3.3光度测定法），5.3.4人员要求）：）；）；8）；）；）；）；）；）；）；）；）；）；）；）；）；9注1：本文件描述了生物发光、化学发光、荧光及吸光度的测量，因为这些方法在光度测定法中应用广泛。然而，还存在其他可测量的光信号，包括磷光、电致发光和拉曼散射光寿命、荧光偏振和多光子激发。测量浊度的注1：生物发光试剂通常含有荧光素以及用于增强和稳定注1：在ISO9555-4:1992的3.1节中，荧光被描述为：“当原子或分子从激发态衰变至较低能态时，发射出具有特征能量的电磁波。激发可以通过使物质经受比特征发射能量稍高射即刻停止。”注2：在IEC60050-845:2020中，荧光被描述为：“当物质暴露于任何的辐射通常在激发后10纳秒内出现。”注3：使用配备经校准的绝对响应度（包括光电检测器的量子效率）的光学信号测量仪器，可以测量荧光发射的绝注4：使用某些显色化合物，例如在测定过程中改变荧光注1：吸光度是由光穿过样品或显色物质时引起的。透射比考察的注4：显色检测的定性评估有时基于颜色的目视检查，激光器//）：）：）：）：）：F.1概述），注1：可使用纯化或粗制的荧光素酶（例如表达荧光素酶注2：在制备稀释液时，缓冲液的温度和组成可能因注：当对核酸或蛋白质进行荧光染色时，即使使用相同的），注3：在高浓度的荧光测量样品中，由于大部分激发光在表面被吸收而无法到达样品溶液内部，荧光读数值的线性注4：荧光样品的性质，例如由于溶剂条件引起的荧光淬灭和I.1概述I.2动态范围测量）