《微生物的培养技术及应用(第2课时)》课件

第2节微生物的培养技术及应用(第2课时)第1章发酵工程自然界中微生物数量繁多，种类庞杂，要想从中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合的菌群中不是优势种群时，仅通过一般的平板划线法或稀释涂布平板法很难实现。资料1973年，科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出水生栖热菌，进而从这种菌中提取出耐高温的DNA聚合酶。这种酶目前已被广泛用于体外扩增DNA片段的聚合酶链式反应(PCR)。

思考：筛选水生栖热菌的条件是什么？为什么这个条件能让水生栖热菌“脱颖而出”？

70~80℃的高温条件。水生栖热菌能适应高温环境，而绝大多数微生物在此条件下不能生存，因此水生栖热菌被筛选出来。

二、微生物的选择培养和计数1．选择培养基在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。思考·讨论？选择培养基配方的设计

尿素[CO(NH2)2]含氮量高，化学性质相对稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，NH3再转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可作为细菌生长的氮源。

讨论1．如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？

培养基的配方中应含有微生物生长所需的营养要素——碳源、氮源、水、无机盐等。由于绝大多数微生物都能利用葡萄糖，分解尿素的细菌也能利用葡萄糖，可以用葡萄糖作为碳源，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，在培养基中加入尿素提供氮源，使培养基具有了选择作用。该培养基以尿素作为唯一氮源，只允许以尿素作为氮源的微生物生长。

讨论2．该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？

该培养基与普通培养基相比较，共同点是都以有机碳（如葡萄糖）作为碳源，都有水和无机盐；不同点是该培养基以尿素作为唯一氮源，使只有能以尿素作为氮源的微生物生长。

拓展应用1

反刍动物，如牛和羊，具有特殊的器官——瘤胃。在瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物能分解尿素。请你设计一个实验，从瘤胃中分离出能够分解尿素的微生物。

提示：反刍动物的瘤胃中含有大量的微生物，其中也包括分解尿素的微生物。瘤胃中的微生物多为厌氧微生物，接触空气后会死亡，因此分离其中能分解尿素的微生物除了需要准备选择培养基外，还应参照厌氧微生物的培养方法进行实验设计。

拓展应用2

地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中40%~60%能被土壤中某些微生物分解利用，这是因它们能够产生纤维素酶。已知刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈。请回答下列问题。

（1）现在要从土壤中分离纤维素分解菌，请你给出详细的实验方案。

在富含纤维素的环境中进行土壤取样→用梯度稀释法制备一系列稀释液→制备刚果红选择培养基（纤维素为唯一碳源、含有刚果红）→用稀释涂布平板法接种稀释后的菌液→适宜条件下培养→挑选产生透明圈的菌落。

（2）你打算到什么环境中去寻找纤维素分解菌？为什么？

打算到富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌。因为根据生物与环境的相互依存关系，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获得目的微生物的概率要高于普通环境。

（3）有同学说，可以把滤纸埋在土壤中，经过一段时间后，再从已腐烂的滤纸上筛选纤维素分解菌。请你评价这一做法。

这一做法可行，通过人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境，使纤维素分解菌聚集。滤纸富含纤维素，将滤纸埋在土壤中，纤维素分解菌就会在滤纸上聚集分解纤维素，可以从腐烂的滤纸上筛选纤维素分解菌。鉴别培养基思维拓展选择培养基和鉴别培养基选择培养基和鉴别培养基是按培养基用途区分的，两者在很多方面具有不同的特点，两者比较如下表：项目选择培养基鉴别培养基特殊成分添加（或缺少）某种化学成分加入某种指示剂或化学药品（不影响微生物正常生长）机理抵制其他微生物的生长，促进目标微生物的生长微生物的某种代谢物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应，使目标菌落出现特定的特征平板的菌落只出现目标菌落（其他微生物被抑制）出现多种菌落，但目标菌落出现特定的特征用途培养、分离出目标微生物鉴别出目标微生物举例不加氮源，可分离固氮微生物；不加碳源，可分离自养微生物；加青霉素，可分离酵母菌等真菌。用伊红－亚甲蓝琼脂培养基鉴定饮用水或乳制品中是否含有大肠杆菌（若有，则菌落呈深紫色，并有金属光泽）；在以纤维素为唯一碳源的培养基上加入刚果红可鉴别纤维素分解菌（有透明圈的菌落即为纤维素分解菌菌落）如果想知道1g土壤中有多少能分解尿素的细菌，仅有选择培养基是不够的，还需要对土样进行适当的处理以及科学的测定微生物数量的方法。

二、微生物的选择培养和计数

2．微生物的选择培养（分离）——稀释涂布平板法

由于土壤中细菌的数量庞大，要想得到能分解尿素的细菌的纯培养物，必须要对土样进行充分稀释，然后再将菌液涂布到制备好的选择培养基上，也就是要采用稀释涂布平板法。

稀释涂布平板法的操作步骤：土壤取样→梯度稀释→取菌液滴加到培养基表面→涂布器消毒、灭菌→涂布平板。

待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放30~37℃的恒温培养箱中培养1~2d。在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。

二、微生物的选择培养和计数

3．微生物的数量测定——稀释涂布平板法稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。

⑴稀释涂布平板法计数原理

当样品中稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

⑵稀释涂布平板法计数原则

为了保证结果准确，一般选择菌落数为30~300的平板进行计数。样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目。在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。若其中1个平板的计数结果与另外2个相差较大，说明在操作过程中出现了错误，在求平均值时该数据应舍去。？

二、微生物的选择培养和计数

3．微生物的数量测定——稀释涂布平板法思考：稀释涂布平板法统计的菌落数与实际有何偏差？为什么？稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。

⑶微生物的数量测定的其他方法——显微镜直接计数法

显微镜直接计数，是一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。该方法利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量，统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和。此方法计数时包括了死细胞，因此计数的结果比实际值大，通过辅助处理，在计数前用台盼蓝对菌液进行染色，通过统计无色细胞的个数得到活菌数。探究·实践土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、分离原理

绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌，该选择培养基的配方见下表。组分含量KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0gH2O定容至1000mL二、实验设计

1．土壤取样细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大多数分布在距地表3~8cm的土壤层。

2．制备培养基用牛肉膏蛋白胨培养基作为对照组，用以尿素为唯一氮源的培养基作为实验组，用来判断选择培养基是否具有选择作用。探究·实践土壤中分解尿素的细菌的分离与计数二、实验设计3．样品的稀释

在酒精灯火焰旁称取10g土壤，放入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，振荡使土壤与水充分混合，将细菌分散，制成101倍土壤稀释液。用1支1mL无菌吸管从中吸取1mL土壤悬液注入盛有9mL无菌水的试管中，吹吸3次，充分混匀，制成102倍的土壤稀释液，依此类推制成103、104、105、106、107倍的土壤稀释液（如下图）。

4．涂布平板

测定土壤中细菌的数量，一般选用1×104、1×105、1×106倍稀释的稀释液进行平板培养。第一次做该实验时，可以将稀释范围放宽一点。如将1×103~1×107倍稀释的稀释液分别涂布到平板上培养。探究·实践土壤中分解尿素的细菌的分离与计数思考：结合下图分析，为了确认培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落，该如何设计对照实验？二、实验设计

5．培养与观察将平板倒置于30~37℃的培养箱中培养1~2天，每隔24h统计一次菌落数目。

图中的1、2、3平板是选择培养基，4平板为牛肉膏蛋白胨培养基，以判断选择培养基是否具有筛选作用；另外，还要有两个对照，即不涂布稀释的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基，以验证培养基中是否含有杂菌。探究·实践土壤中分解尿素的细菌的分离与计数二、实验设计6．菌落计数当菌落数目稳定时，选取菌落数在30~300的平板进行计数，同一稀释度下至少计数3个平板，求出平均值，并根据所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目（如下表）。7．结果分析与评价

稀释度104105106107123平均值123平均值123平均值123平均值每个平板的菌落数内容现象结论有无杂菌污染的判断空白对照的培养基中无菌落生长未被杂菌污染选择培养基中菌落数偏高被杂菌污染菌落形态多样，菌落数偏高培养基中混入其他氮源选择培养基的筛选作用牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目多于选择培养基上的数目选择培养基具有筛选作用样品的稀释操作得到2个或2个以上菌落数在30~300的平板操作成功练一练1．培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是（）①化学消毒法②灼烧灭菌法③干热灭菌法④紫外线消毒法⑤高压蒸汽灭菌法⑥巴氏消毒法A．⑤③②①④⑥B．①②③④⑤⑥C．⑥②③④①⑤D．③④②①⑥⑤

2．下列培养基配方中，能作为选择培养基、鉴别培养基的依次是（）A．②③B．③①C．②④D．①④A原料蛋白胨乳糖蔗糖K2HPO4伊红亚甲蓝琼脂NaCl蒸馏水①10g5g5g2g0.4g0.065g10g-1000mL②10g5g5g2g--20g-1000mL③10g5g5g2g---20g1000mL④10g5g5g2g----1000mLB练一练3．幽门螺杆菌（Hp）感染是急、慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。请回答下列有关问题：（1）图中4支试管分别代表4种微生物在半固体培养基（琼脂含量为3.5g/L）中的生长状态，其中②号试管代表Hp的生长状态，由图判断，Hp在___________________条件下不能生长。（2）下表所示是某种培养基的配方。将Hp接种到pH适宜的该培养基中，置于37℃下培养一段时间后，该培养基中Hp的数目比刚接种时___，主要原因是_________。成分葡萄糖KH2PO4MgSO4NaClCaSO4CaCO3琼脂蒸馏水含量10g0.2g0.2g0.2g0.2g5g3.5g定容至1L氧气浓度过高或过低少缺少氮源练一练3．幽门螺杆菌（Hp）感染是急、慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。请回答下列有关问题：（3）研究人在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：配制培养基→灭菌、倒平板→X→培养→观察①在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp能合成_____，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现___色环带。②步骤X表示_____。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液_____到培养基表面上。稀释菌液的目的是获得___菌落。③在培养时，需将培养皿倒置并放在___________中。若不倒置培养，将导致_____________________。④临床上用14C标记的_____分解为NH3和14CO2。接种尿酶红单涂布恒温培养箱尿素无法形成单菌落或污染123456789101112131415A级必备知识基础练1.分离土壤中分解尿素的细菌,对培养基的要求是(

)选项尿素琼脂葡萄糖硝酸盐A++++B----C+++-D+--+注:“+”表示加入,“-”表示不加。

C解析

分离土壤中分解尿素的细菌,应在固体培养基中培养,培养基中要有碳源,且尿素作为唯一的氮源,故不能添加硝酸盐,C项正确。1234567891011121314152.[山东菏泽一中高二月考]生物兴趣小组的三名同学吃冰激凌后有两人严重腹泻,他们怀疑冰激凌中大肠杆菌超标。卫生部门规定1000mL自来水37℃培养48h后大肠杆菌菌落数不能超过3个,于是他们设计实验对此冰激凌进行检测。下列实验操作中正确的是(

)A.再去小店买一个同样品牌的同种冰激凌,然后配制伊红—亚甲蓝琼脂培养基(该培养基可用来鉴别大肠杆菌),灭菌、倒平板B.取10mL刚融化的冰激凌作为原液进行梯度稀释,稀释倍数为1×10~1×105C.取各个稀释浓度的冰激凌液各0.1mL,用稀释涂布平板法进行接种,每个浓度至少涂布3个平板,共培养18个平板,在适宜温度下培养48hD.统计菌落数目,以菌落数代表大肠杆菌数会导致统计结果比实际值偏小D123456789101112131415解析

若只对一个冰激凌进行检测,样品太少,不能确定是某个冰激凌的质量问题还是这个品牌冰激凌的质量问题,正确的做法是再去小店随机买多个同样品牌的同种冰激凌进行检测,A项错误;测定细菌的数量,一般选用104、105、106倍的稀释液进行平板培养,应取10

mL刚融化的冰激凌作为原液进行梯度稀释,稀释倍数为1×10~1×106,B项错误;该实验应该设置对照组,取各个稀释浓度的冰激凌液各0.1

mL,用稀释涂布平板法进行接种,每个浓度至少涂布3个平板,再取一个平板接种等量无菌水(作为对照),共培养19个平板,在适宜温度下培养48

h,C项错误;因为当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落,故统计菌落数目时,以菌落数代表大肠杆菌数会导致统计结果比实际值偏小,D项正确。1234567891011121314153.土壤中有些细菌可以利用原油中的多环芳烃。为筛选出能高效降解原油的菌株并投入除污,某研究小组进行了相关实验。下列有关叙述错误的是(

)A.选择被原油污染的土壤取样,使用稀释涂布平板法或平板划线法进行分离B.配制以多环芳烃为唯一碳源的选择培养基进行培养,可提高目的菌的浓度C.将土壤稀释液彻底灭菌后再接种到培养基上,可以有效防止杂菌的污染D.在分离纯化菌种后,需借助生物化学的方法对分离的菌种作进一步的鉴定C123456789101112131415解析

由题干信息可知,该实验的目的是筛选出能高效降解原油的菌株,故应选择被原油污染的土壤取样,使用稀释涂布平板法或平板划线法进行分离,A项正确;配制以多环芳烃为唯一碳源的选择培养基进行培养,可提高目的菌的浓度,B项正确;将土壤稀释液彻底灭菌,目的菌也会被一并杀死,需要灭菌的是用于稀释的无菌水,C项错误;在分离纯化菌种后,需借助生物化学的方法对分离的菌种做进一步的鉴定,D项正确。1234567891011121314154.下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的叙述,错误的是(

)A.该实验需要设置空白对照组,以检验培养基是否受到杂菌污染B.分解尿素的细菌能产生脲酶,脲酶能分解尿素产生氮气C.统计尿素分解菌的数目时,以菌落数为30~300的平板进行计数D.该实验所用培养基应以尿素作唯一氮源B解析

该实验需要设置空白对照组,以检验培养基是否受到杂菌污染,A项正确;分解尿素的细菌能产生脲酶,脲酶可催化尿素分解为NH3,B项错误;统计尿素分解菌的数目时,以菌落数为30~300的平板进行计数,并至少对3个平板进行重复计数,求其平均值,C项正确;利用以尿素为唯一氮源的培养基分离尿素分解菌,D项正确。1234567891011121314155.下列关于分离高产脲酶菌的实验叙述,正确的是(

)A.分离目的菌株时以能产生脲酶的刀豆种子研磨液作为样品B.分离菌种所采用的选择培养基需添加尿素和牛肉膏蛋白胨C.利用稀释涂布平板法纯化菌种时常用菌落数作为统计结果D.实施本实验时所用平板和试管的数目不多而且耗时也不长C123456789101112131415解析

寻找目的菌株时,要根据其对生存环境的要求,到相应的环境中寻找,分离高产脲酶菌应在富含尿素的环境中筛选,不能选用能产生脲酶的刀豆种子研磨液,A项错误;分离高产脲酶菌的培养基中应以尿素为唯一氮源,不能添加牛肉膏蛋白胨,B项错误;稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面,进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落,该培养方法常用菌落数作为统计结果,C项正确;由于本实验需要进行稀释、接种等多个步骤,故需要的平板和试管的数目多,而且耗时长,D项错误。1234567891011121314156.野生型伤寒沙门氏菌(his+)可合成组氨酸,某种突变体丧失了这种能力,必须在添加组氨酸的培养基上才能生长,称为组氨酸营养缺陷型(his),现用两种接种方法接种his菌株,甲为平板划线法,乙为稀释涂布平板法。下列有关叙述错误的是(

)A.两种方法所用培养基均为固体培养基B.甲接种方法可用于对微生物的分离和计数C.乙接种方法可用于对微生物的分离和计数D.his菌株接种在含有组氨酸的培养基上能长出菌落B123456789101112131415解析

甲是平板划线法,乙是稀释涂布平板法,两种方法都是在固体培养基上进行接种的操作,A项正确;平板划线法可用于对微生物的分离纯化,但不能计数,B项错误;稀释涂布平板法可用于对微生物的分离和计数,C项正确;野生型伤寒沙门氏菌(his+)可合成组氨酸,某种突变体丧失了这种能力,必须在添加组氨酸的培养基上才能生长,故his菌株接种在含有组氨酸的培养基上才能长出菌落,D项正确。1234567891011121314157.[辽宁实验中学联考]将马铃薯去皮切块,加水煮沸一定时间,过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂,用水定容后灭菌,得到M培养基。M培养基可用于真菌a的筛选,某同学将获得的真菌a利用下图的方式进行稀释,统计甲、乙、丙三个平板中的菌落数分别是110、140和149。下列分析正确的是(

)123456789101112131415A.若真菌a为酵母菌,通常采用血细胞计数板对活菌进行计数B.若在培养真菌a的培养基中添加一定量的青霉素,可抑制细菌的繁殖C.选取甲、乙、丙三个培养基的目的是排除无关变量对实验的干扰D.根据三个平板中的菌落数可推算培养液中真菌a的密度为1.33×107个/mL答案

B解析

酵母菌相对较大,可采用血细胞计数板进行计数,但该方法统计的是活菌数和死菌数的总和,A项错误;青霉素可抑制细菌的繁殖,避免细菌对真菌a的干扰,B项正确;选取甲、乙、丙三个培养基的目的是减小实验误差,C项错误;根据三个平板中的菌落数可推算培养液中真菌a的密度为(110+140+149)÷3÷0.1×105=1.33×108(个/mL),D项错误。1234567891011121314158.某种物质X(一种含有C、H、O、N的有机物)难以降解,会对环境造成污染,只有某些细菌能降解X。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解X的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基,甲的组分为无机盐、水和X,乙的组分为无机盐、水、X和Y。下列相关叙述错误的是(

)123456789101112131415A.甲、乙培养基均属于选择培养基,配制前都需要灭菌B.若要筛选高效降解X的细菌菌株,甲、乙培养基中X是唯一的碳源C.步骤⑤的筛选过程中,各培养瓶中的X溶液要有一定的浓度梯度D.步骤⑤的筛选过程中,若培养基中的X浓度过高,某菌株对X的降解量可能下降答案

C123456789101112131415解析

甲、乙培养基均只含有机物X,属于选择培养基,微生物的培养应保持无菌操作,故配制前都要灭菌,A项正确;若要筛选高效降解X的细菌菌株,需要甲、乙培养基中的X是唯一提供碳源的有机物,不能利用物质X的微生物不能在该培养基上生长,从而筛选出能高效降解X的细菌菌株,B项正确;步骤⑤中自变量是挑取的不同的单菌落,各培养瓶中的X溶液的浓度应该是一致的,因为X溶液的浓度属于无关变量,需要保持相同,C项错误;步骤⑤的筛选过程中,若培养基中的X浓度过高,可能会导致菌体失水影响菌体的正常生长,因此某菌株对X的降解量可能会下降,D项正确。1234567891011121314159.[河北保定高二月考]GA3是一种由C、H、O三种元素构成的与赤霉素作用类似的植物生长调节剂,能促进茎伸长和种子萌发。GA3的广泛施用会导致其在土壤中残留,研究小组从长期施用GA3农田的土壤中筛选出了能降解GA3的菌株。请据图回答下列问题。123456789101112131415(1)过程②是将稀释的含有降解GA3的菌株接种到甲瓶培养液中,这样做的目的是

。

(2)乙培养基中含有的唯一的碳源应该是

,所以从培养基的功能看,乙培养基属于

。

(3)过程③将菌种接种到乙培养基上通常采用的方法是

。接种时需要将涂布器_____________________________________________________,目的是

。

(4)图中获得纯培养物的过程⑤称为

。

富集培养GA3降解菌GA3选择培养基稀释涂布平板法浸在酒精中,然后放在酒精灯火焰上灼烧,冷却后再使用保证涂布器无菌纯培养123456789101112131415解析

(1)将稀释的含有降解GA3的菌株接种到甲瓶培养液中,甲培养瓶能富集培养GA3降解菌。(2)GA3是一种由C、H、O三种元素构成的植物生长调节剂,选择培养基乙是为了获得GA3的降解菌,故培养基应以GA3为唯一的碳源,所以乙培养基属于选择培养基。(3)分离微生物时可采用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法,图乙培养基中的菌落分布均匀,故过程③采用的接种方法是稀释涂布平板法。为保证涂布器无菌,在接种前需将涂布器浸在酒精中,然后放在酒精灯火焰上灼烧,冷却后再使用。(4)获得含有GA3降解菌的纯培养物的过程称为纯培养。123456789101112131415B级能力素养提升练10.[江苏南通高二期末]MIC是指药敏试验中某种抗生素对测试菌的最低抑制浓度。某研究小组将含有相同浓度抗生素Ⅰ~Ⅳ的四个大小相同的纸片分别贴在长满测试菌的琼脂平板上进行药敏试验,以了解病原微生物对四种抗生素的敏感程度,下图所示为实验结果。下列相关叙述正确的是(

)A.培养基中的琼脂可以为测试菌提供碳源B.抗生素Ⅰ的MIC小于抗生素Ⅱ的MICC.抑菌圈中离纸片越近的菌落对抗生素Ⅳ的抗性越强D.抑菌圈中出现菌落的原因可能是抗生素使病原菌产生耐药性基因突变B123456789101112131415解析

培养基中的琼脂是凝固剂,不能为测试菌提供碳源,A项错误;由题图信息可知,抗生素Ⅰ的抑菌圈比抗生素Ⅱ的大,这说明抗生素Ⅰ的MIC小于抗生素Ⅱ的MIC,B项正确;在抑菌圈中出现的菌落均是对该种抗生素具有抗性的菌株,但无法通过题图信息来判断它们之间抗性的强弱,若要判断它们之间抗性的强弱还需进一步实验才能确定,C项错误;抗生素对病原菌具有选择作用,不能诱导病原菌产生耐药性基因突变,D项错误。12345678910111213141511.[广东深圳高二月考]金黄色葡萄球菌是一种耐高盐的食源性致病微生物。哥伦比亚血平板是含无菌脱纤维羊血等成分的固体培养基,生长在该培养基上的金黄色葡萄球菌菌落能破坏其周围的红细胞,产生透明的溶血圈。下图为检测某种饮料是否被金黄色葡萄球菌污染的操作流程,据此分析不正确的是(

)123456789101112131415A.7.5%的NaCl肉汤培养基从功能角度划分属于选择培养基B.振荡培养后培养基变浑浊是耐高盐的微生物数量增多所致C.若最终长出的菌落周围出现透明的溶血圈,则说明该种饮料被金黄色葡萄球菌污染D.若取菌种后的接种方法为稀释涂布平板法,则可对待测饮料中的金黄色葡萄球菌计数答案

D123456789101112131415解析

金黄色葡萄球菌是一种耐高盐的食源性致病微生物,因此7.5%的NaCl肉汤培养基从功能角度划分属于选择培养基,A项正确;7.5%的NaCl肉汤培养基振荡培养后,培养基变浑浊是由耐高盐的微生物数量增多所致,B项正确;金黄色葡萄球菌会破坏菌落周围的红细胞,产生透明的溶血圈,若最终长出的菌落周围出现透明的溶血圈,则说明该种饮料被金黄色葡萄球菌污染,C项正确;因为接种的菌种是经7.5%的NaCl肉汤培养基培养过的,因此用稀释涂布平板法不能对待测饮料中的金黄色葡萄球菌计数,D项错误。12345678910111213141512.[多选][辽宁名校联盟高二联考]黄曲霉毒素是由黄曲霉产生的代谢产物,具有极强的毒性和致癌性。科研人员用黄曲霉毒素B1(AFB1)的结构类似物——香豆素(C9H6O2)筛选出能高效降解AFB1的菌株,实验过程如下图中的①~④。已知菌体对有机物的降解途径有胞外分泌物降解和菌体吸附降解两种。对降解菌的培养液进行离心,发现上清液中AFB1的残留率明显低于菌悬液中的残留率。检测发现上清液中含有蛋白质K,为验证蛋白质K是降解AFB1的有效成分,进行实验⑤:在A中加入水解蛋白质K的酶、B中加入等量的蒸馏水,充分反应后在两试管中均加入等量的香豆素。下列相关叙述正确的是(

)123456789101112131415A.1号培养基属于选择培养基,需要提前在160~170℃下进行湿热灭菌B.步骤③使用稀释涂布平板法,目的是筛选出能降解黄曲霉毒素B1的单菌落C.蛋白质K属于降解菌产生的胞外分泌物,可以分解培养液中的蛋白质D.实验⑤的结果是A试管中香豆素含量基本不变,B试管中香豆素含量减少答案

BD123456789101112131415解析

1号培养基属于选择培养基,筛选出能降解香豆素的菌株,需要提前在121

℃下进行湿热灭菌,A项错误。步骤③使用稀释涂布平板法,目的是筛选出能降解黄曲霉毒素B1(AFB1)的单菌落,B项正确。上清液中AFB1的残留率明显低于菌悬液中的残留率,上清液中含有蛋白质K,因此蛋白质K属于降解菌产生的胞外分泌物,其分解的是AFB1,C项错误。A试管中加入水解蛋白质K的酶,因此A试管中蛋白质K被水解,不能分解香豆素,香豆素含量基本不变,B试管中有蛋白质K,香豆素被分解,含量减少,D项正确。12345678910111213141513.[多选]下图为以苹果皮为材料分离纯化用于果醋制作的菌种的实验流程,已知所用培养基为“米曲汁乙醇碳酸钙培养基”,组成成分为1000mL米曲汁、10gCaCO3、30mL体积分数为95%的乙醇溶液。下列说法正确的是(

)A.图中器具可用干热灭菌法灭菌,培养基用湿热灭菌法灭菌B.②中的纯培养物来自苹果皮上的野生型酵母菌C.分离、计数的培养基需要用平板划线法至少制备3个D.①扩大培养基中的菌种浓度约为8.1×109个/mLAD123456789101112131415解析

干热灭菌法适合用于器具灭菌,培养基可用湿热灭菌法,如高压蒸汽灭菌法,A项正确;图示过程是以苹果皮为材料分离纯化用于果醋制作的菌种,②中的纯培养物来自苹果皮上的野生型醋酸菌,B项错误;分离、计数的培养基需要用稀释涂布平板法至少制备3个,平板划线法只能分离微生物,不能计数,C项错误;根据最后三个培养皿的菌落数为75、80、88,可求出①扩大培养基中的菌种浓度为(75+80+88)÷3÷0.1×107=8.1×109(个/mL),D项正确。12345678910111213141514.[云南曲靖高二月考]利用农作物秸秆通过纤维素分解菌发酵来获取生产酒精的原料,是获取清洁再生能源的有效途径。研究者从牛的瘤胃中筛选出纤维素分解菌,其筛选过程如下图所示。刚果红能与纤维素形成红色复合物,当纤维素被纤维素分解菌分解后,复合物无法形成,培养基中会出现以这些菌落为中心的透明圈。据图回答下列问题。123456789101112131415(1)从牛的瘤胃中筛选纤维素分解菌的原因是

。

(2)培养基的配方中一般都含有

等,培养基通常采用

灭菌。图中所示培养基是以

为唯一碳源的培养基,这种培养基称为

。Ⅰ号培养基中加入刚果红的目的是

。

(3)Ⅱ号培养基划线过程中接种针至少灼烧

次。

牛常以农作物秸秆为食,牛的瘤胃中含有较多的纤维素分解菌水、无机盐、碳源、氮源湿热(高压蒸汽)纤维素选择培养基鉴别是否有纤维素分解菌的存在6123456789101112131415解析

(1)从牛的瘤胃中筛选纤维素分解菌的原因是牛常以农作物的秸秆为食,它的瘤胃中含有较多的纤维素分解菌。(2)培养基的配方中一般都含有水、无机盐、碳源、氮源等,同时还需要满足微生物生长对特殊营养物质、酸碱度以及氧气的要求;获得纯培养物的关键是防止外来杂菌的污