马尔尼菲篮状菌感染小鼠模型中Th17与Treg细胞免疫失衡机制探究

马尔尼菲篮状菌感染小鼠模型中Th17与Treg细胞免疫失衡机制探究一、引言1.1研究背景马尔尼菲篮状菌（Talaromycesmarneffei）是一种重要的条件致病性真菌，主要分布于东南亚及中国南方地区。该菌是迄今发现的唯一温度双相型致病性篮状菌属真菌，在25℃时呈菌丝相，产生红色色素，而在37℃时则转变为酵母相。马尔尼菲篮状菌病（talaromycosis）是由马尔尼菲篮状菌感染引起的一种深部真菌病，常见于免疫功能低下人群，如艾滋病（AIDS）患者、长期使用免疫抑制剂者、原发性免疫缺陷病患者等。随着HIV/AIDS的流行以及免疫抑制剂的广泛应用，马尔尼菲篮状菌病的发病率呈上升趋势，已成为威胁免疫缺陷人群健康的重要机会性感染之一。马尔尼菲篮状菌病的临床表现复杂多样，缺乏特异性，可累及全身多个器官和系统，如发热、咳嗽、咳痰、贫血、消瘦、皮肤丘疹、肝脾及淋巴结肿大等，严重者可导致多器官功能衰竭甚至死亡。早期诊断和及时治疗对于改善患者预后至关重要，但由于其临床症状不典型，容易与其他疾病混淆，导致误诊和漏诊，延误治疗时机。目前，马尔尼菲篮状菌病的治疗主要依赖于抗真菌药物，如两性霉素B、伊曲康唑等，但治疗效果受多种因素影响，部分患者治疗后仍易复发。因此，深入了解马尔尼菲篮状菌病的发病机制，对于提高其诊断和治疗水平具有重要意义。辅助性T细胞17（Thelper17cell，Th17）和调节性T细胞（regulatoryTcell，Treg）是CD4+T细胞的两个重要亚群，在免疫调节中发挥着关键作用。Th17细胞主要分泌白细胞介素17（IL-17）、IL-21、IL-22等细胞因子，具有强大的促炎作用，在抵抗细胞外病原体感染、自身免疫性疾病和炎症反应中发挥重要作用。然而，Th17细胞的过度活化也会导致炎症反应失控，引发组织损伤和疾病进展。Treg细胞则通过分泌IL-10、转化生长因子β（TGF-β）等抑制性细胞因子，以及细胞间直接接触等方式，抑制免疫细胞的活化和增殖，维持机体的免疫平衡，防止过度免疫反应对机体造成损伤。Th17/Treg细胞平衡失调与多种疾病的发生发展密切相关，如感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤等。在马尔尼菲篮状菌感染过程中，机体的免疫系统会被激活，Th17和Treg细胞在其中发挥着重要的免疫调节作用。Th17细胞通过分泌IL-17等细胞因子，招募中性粒细胞、单核细胞等免疫细胞到感染部位，增强机体对马尔尼菲篮状菌的清除能力。然而，过度活化的Th17细胞也可能导致炎症反应过度，引起组织损伤。Treg细胞则可抑制Th17细胞的活化和功能，减轻炎症反应，维持免疫平衡。但Treg细胞功能过强可能会抑制机体的免疫应答，影响对马尔尼菲篮状菌的清除，导致感染持续存在。因此，Th17/Treg细胞平衡在马尔尼菲篮状菌感染的免疫应答中起着至关重要的作用，其失衡可能影响疾病的发生、发展和转归。目前，关于马尔尼菲篮状菌感染对Th17/Treg细胞平衡的影响及其机制尚未完全明确。深入研究马尔尼菲篮状菌对小鼠Th17细胞与Treg细胞免疫的影响，有助于揭示马尔尼菲篮状菌病的免疫发病机制，为临床诊断、治疗和预防提供新的理论依据和潜在靶点。1.2国内外研究现状在马尔尼菲篮状菌感染的研究方面，国内外学者已取得了一定成果。国外研究中，对马尔尼菲篮状菌的生物学特性进行了较为深入的剖析，明确了其双相型生长特点以及在不同环境下的形态转变机制。在流行病学领域，通过大规模的调查研究，揭示了马尔尼菲篮状菌在东南亚及部分热带地区的高发性，以及艾滋病患者等免疫缺陷人群的高感染风险。临床研究层面，详细描述了马尔尼菲篮状菌病的多样临床表现，涵盖发热、呼吸道症状、皮肤损害等，同时也对两性霉素B、伊曲康唑等抗真菌药物的治疗效果开展了相关研究。国内研究紧密结合我国南方地区的实际情况，对马尔尼菲篮状菌病的流行病学特征展开深入探讨，分析了该地区患者的感染危险因素、临床特点及预后情况。在诊断技术上，积极探索多种检测方法，如真菌培养、组织病理学检查、分子生物学检测等，以提高诊断的准确性和及时性。同时，针对马尔尼菲篮状菌病与其他疾病的鉴别诊断，也进行了大量的临床研究和分析。在Th17和Treg细胞相关研究方面，国外在基础研究领域处于前沿地位，深入探究了Th17和Treg细胞的分化机制，明确了多种细胞因子和转录因子在其分化过程中的关键调控作用。通过大量的动物实验和临床研究，揭示了Th17和Treg细胞在多种疾病中的免疫调节作用及失衡机制。在自身免疫性疾病研究中，发现Th17细胞的过度活化会引发炎症反应失控，而Treg细胞功能异常则无法有效抑制过度免疫反应，导致疾病的发生和发展。国内研究同样取得了显著进展，在Th17和Treg细胞的功能及相关信号通路研究中，取得了创新性成果。通过对感染性疾病、肿瘤等疾病的研究，发现Th17/Treg细胞平衡失调在疾病进程中发挥着重要作用，并进一步探索了调节这一平衡的潜在治疗靶点和方法。然而，当前关于马尔尼菲篮状菌对小鼠Th17细胞与Treg细胞免疫影响的研究仍存在一定空白。尽管已知Th17和Treg细胞在免疫调节中至关重要，但在马尔尼菲篮状菌感染背景下，二者之间的动态变化规律以及相互作用机制尚未完全明晰。例如，在感染的不同阶段，Th17和Treg细胞的数量、功能如何变化，以及这些变化如何影响机体对马尔尼菲篮状菌的免疫应答和疾病的发展，仍有待进一步深入研究。此外，针对如何通过调节Th17/Treg细胞平衡来改善马尔尼菲篮状菌病的治疗效果，目前也缺乏系统的研究和探讨。1.3研究目的与意义本研究旨在深入探究马尔尼菲篮状菌对小鼠Th17细胞与Treg细胞免疫的影响及其潜在机制。通过构建小鼠马尔尼菲篮状菌感染模型，动态监测感染过程中Th17和Treg细胞的数量、功能及相关细胞因子表达水平的变化，明确Th17/Treg细胞平衡在马尔尼菲篮状菌感染免疫应答中的作用。同时，探讨调节Th17/Treg细胞平衡对改善小鼠马尔尼菲篮状菌病病情的可能性，为临床治疗提供新的思路和方法。深入研究马尔尼菲篮状菌对小鼠Th17细胞与Treg细胞免疫的影响具有重要的理论和实践意义。在理论方面，有助于揭示马尔尼菲篮状菌病的免疫发病机制，进一步丰富医学真菌学领域关于病原体与宿主免疫相互作用的理论知识。Th17和Treg细胞作为免疫调节的关键细胞亚群，明确它们在马尔尼菲篮状菌感染中的作用及相互关系，将为深入理解机体对真菌病原体的免疫防御和免疫调节机制提供重要依据。在临床实践方面，研究结果可为马尔尼菲篮状菌病的诊断、治疗和预防提供新的理论依据和潜在靶点。通过监测Th17/Treg细胞平衡的变化，有望开发出更早期、更准确的诊断指标，实现疾病的早期诊断和干预。针对Th17/Treg细胞平衡的调节策略，可能为马尔尼菲篮状菌病的治疗提供新的方法和药物靶点，提高治疗效果，改善患者预后。此外，本研究对于免疫功能低下人群的机会性真菌感染防治也具有重要的借鉴意义，有助于制定更有效的预防措施和治疗方案，降低感染风险，保障患者健康。二、马尔尼菲篮状菌与小鼠免疫系统相关理论基础2.1马尔尼菲篮状菌生物学特性马尔尼菲篮状菌是篮状菌属中极具特点的一种真菌，具有独特的生物学特性。从形态学角度来看，其在不同培养条件下呈现出显著的形态差异。在25℃的环境中培养时，马尔尼菲篮状菌处于菌丝相，此时菌落生长迅速，初期为灰白色蜡样、膜状平坦菌落，随后逐渐转变为淡黄、黄绿色。随着菌龄的不断增长，菌落表面会呈现出红色短绒状，并且产生可扩散至琼脂中的棕红或酒红色色素，这一特征性色素的产生是马尔尼菲篮状菌的重要鉴别要点之一。在显微镜下观察，菌丝相的马尔尼菲篮状菌可见分支分隔菌丝体，分生孢子表面光滑，还具有典型的帚状枝结构，即在光滑的分生孢子梗上有4个或5个终端梗基，每个梗基上又具有4-6个瓶梗。当培养温度升高至37℃时，马尔尼菲篮状菌则转变为酵母相。在SDA培养基上，会生成粗糙、奶油色的酵母样菌落。在显微镜下，此时的菌体呈现为圆形、椭圆形的酵母样细胞，部分细胞略弯曲，并且具有横隔，呈腊肠状，大小约为2-4μm，部分菌体还可见1-2个紫红色核。这种随温度变化而发生的形态转换，即双相性，是马尔尼菲篮状菌区别于其他真菌的重要特性。其双相性与致病机制紧密相关，在自然环境中，马尔尼菲篮状菌以菌丝相存在，当人体吸入含有该菌分生孢子的空气后，分生孢子在体内37℃的环境下迅速转变为酵母相，进而得以在体内生长繁殖，侵犯人体的单核-巨噬细胞网状内皮系统，包括淋巴结、肝、脾、肺和皮肤等富含单核-巨噬细胞的组织器官，引发感染。2.2小鼠免疫系统概述小鼠作为常用的实验动物，其免疫系统与人类免疫系统具有一定的相似性，为研究免疫相关机制提供了重要的模型。小鼠的免疫系统由免疫器官、免疫细胞和免疫分子组成，各部分相互协作，共同发挥免疫防御、免疫监视和免疫自稳的功能。免疫器官包括中枢免疫器官和外周免疫器官。中枢免疫器官是免疫细胞发生、分化和成熟的场所，小鼠的中枢免疫器官主要有胸腺和骨髓。胸腺是T淋巴细胞发育成熟的关键器官，在胸腺中，来自骨髓的淋巴干细胞经历一系列复杂的分化和选择过程，最终发育成为具有不同功能的成熟T淋巴细胞。骨髓则是造血干细胞的发源地，不仅为T淋巴细胞的发育提供前体细胞，也是B淋巴细胞发育成熟的场所。外周免疫器官是成熟免疫细胞定居和发生免疫应答的部位，主要包括脾脏、淋巴结、黏膜相关淋巴组织等。脾脏是小鼠体内最大的淋巴器官，具有过滤血液、清除病原体和衰老细胞、产生免疫应答等多种功能。淋巴结分布于全身各处，通过淋巴循环收集组织液中的抗原物质，激活免疫细胞，引发免疫反应。黏膜相关淋巴组织广泛分布于呼吸道、消化道、泌尿生殖道等黏膜表面，是机体抵御病原体入侵的第一道防线，在局部免疫中发挥着重要作用。免疫细胞是免疫系统的核心组成部分，包括淋巴细胞、单核巨噬细胞、粒细胞等。淋巴细胞是免疫系统中最重要的细胞类型之一，可分为T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤细胞（NK细胞）。T淋巴细胞在细胞免疫中发挥关键作用，根据其表面标志物和功能的不同，可进一步分为多个亚群。其中，辅助性T细胞（Th）能够辅助其他免疫细胞行使免疫功能，根据分泌细胞因子和功能的差异，Th细胞又可分为Th1、Th2、Th17、Tfh等多个亚群。Th1细胞主要分泌干扰素γ（IFN-γ）等细胞因子，参与细胞介导的免疫应答，在抵抗细胞内病原体感染中发挥重要作用；Th2细胞主要分泌白细胞介素4（IL-4）、IL-5等细胞因子，参与体液免疫应答，在抵抗寄生虫感染和过敏反应中起重要作用；Th17细胞主要分泌IL-17、IL-21等细胞因子，在抵抗细胞外病原体感染、自身免疫性疾病和炎症反应中发挥重要作用；Tfh细胞则主要辅助B淋巴细胞产生抗体，参与体液免疫应答。细胞毒性T细胞（Tc）能够直接杀伤被病原体感染的细胞、肿瘤细胞等靶细胞。调节性T细胞（Treg）通过抑制免疫细胞的活化和增殖，维持机体的免疫平衡。B淋巴细胞在体液免疫中发挥重要作用，能够识别抗原并分化为浆细胞，产生抗体，中和病原体及其毒素。NK细胞无需预先接触抗原，即可直接杀伤被病原体感染的细胞和肿瘤细胞，在固有免疫和肿瘤免疫中发挥重要作用。单核巨噬细胞包括单核细胞和巨噬细胞，具有吞噬、杀伤病原体、抗原提呈等多种功能。粒细胞则包括中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞，在炎症反应和免疫防御中发挥重要作用。在T细胞亚群中，Th17细胞和Treg细胞备受关注。Th17细胞的分化受到多种细胞因子和转录因子的调控。初始CD4+T细胞在转化生长因子β（TGF-β）和白细胞介素6（IL-6）的共同作用下，开始向Th17细胞分化。这一过程中，视黄酸受体相关孤儿受体γt（RORγt）作为关键的转录因子被诱导表达，它能够调控一系列与Th17细胞功能相关的基因表达，促使Th17细胞的分化和成熟。随后，IL-21和IL-23进一步促进Th17细胞的扩增和稳定。Th17细胞主要分泌IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-22等细胞因子。IL-17具有强大的招募中性粒细胞和单核细胞的能力，这些细胞被招募到感染部位后，能够增强机体对病原体的清除能力。例如，在真菌感染时，IL-17可促使中性粒细胞释放抗菌肽，直接杀伤真菌，同时增强中性粒细胞的吞噬活性。IL-21能够促进Th17细胞的自身扩增，增强其免疫应答能力。IL-22则主要作用于上皮细胞，促进上皮细胞分泌抗菌肽和趋化因子，增强上皮组织的屏障功能，抵御病原体的入侵。然而，Th17细胞的过度活化也会导致炎症反应失控，引发组织损伤。在自身免疫性疾病中，Th17细胞分泌的细胞因子会攻击自身组织，导致炎症和组织破坏。Treg细胞的分化和功能也依赖于特定的细胞因子和转录因子。在TGF-β的单独作用下，初始CD4+T细胞可分化为Foxp3+Treg细胞。叉头状转录因子3（Foxp3）是Treg细胞的特异性标志物和关键转录因子，对Treg细胞的发育、功能维持起着至关重要的作用。Treg细胞主要通过分泌抑制性细胞因子如IL-10、TGF-β和IL-35来发挥免疫调节功能。IL-10能够抑制多种免疫细胞的活化和细胞因子的分泌，降低炎症反应。TGF-β则可以抑制T细胞的增殖和分化，调节免疫细胞的功能，促进免疫耐受的形成。此外，Treg细胞还可以通过细胞间直接接触的方式，抑制效应T细胞的活化和功能。例如，Treg细胞表面的程序性死亡受体1（PD-1）与效应T细胞表面的程序性死亡配体1（PD-L1）结合，可抑制效应T细胞的增殖和细胞因子分泌。Treg细胞在维持免疫平衡、防止自身免疫性疾病、抑制过度免疫反应以及促进肿瘤免疫逃逸等方面发挥着关键作用。在自身免疫性疾病中，Treg细胞功能异常或数量减少，无法有效抑制自身反应性T细胞的活化，从而导致免疫系统攻击自身组织，引发疾病。而在肿瘤微环境中，肿瘤细胞可诱导Treg细胞的聚集和活化，Treg细胞通过抑制抗肿瘤免疫反应，帮助肿瘤细胞逃避机体的免疫监视和清除。2.3Th17与Treg细胞在免疫调节中的作用Th17细胞在免疫调节中扮演着重要的促炎角色。当机体受到病原体感染时，初始CD4+T细胞在特定细胞因子环境的诱导下分化为Th17细胞。如在细胞外细菌或真菌感染时，树突状细胞等抗原提呈细胞会识别病原体相关分子模式，分泌IL-6、TGF-β、IL-23等细胞因子。这些细胞因子共同作用于初始CD4+T细胞，诱导其表达视黄酸受体相关孤儿受体γt（RORγt），从而促进Th17细胞的分化和成熟。Th17细胞主要分泌IL-17家族细胞因子，其中IL-17A和IL-17F是其标志性细胞因子。IL-17能够作用于多种细胞，如上皮细胞、内皮细胞和成纤维细胞等。它可以促使上皮细胞分泌趋化因子，如CXCL8（也称为IL-8），CXCL8能够招募中性粒细胞到感染部位。中性粒细胞具有强大的吞噬和杀菌能力，可有效清除入侵的病原体。IL-17还能诱导上皮细胞表达抗菌肽，如防御素等，增强上皮组织的屏障功能，抵御病原体的入侵。此外，IL-17还可激活巨噬细胞，增强其吞噬和杀伤活性，进一步促进炎症反应。例如，在白色念珠菌感染中，Th17细胞分泌的IL-17可招募中性粒细胞到感染部位，中性粒细胞通过吞噬和释放抗菌物质，有效抑制白色念珠菌的生长和扩散。然而，当Th17细胞过度活化时，会导致炎症反应失控。在类风湿性关节炎中，Th17细胞大量分泌IL-17等细胞因子，引发关节滑膜炎症，导致关节软骨和骨质破坏，引起关节疼痛、肿胀和功能障碍。Treg细胞则是维持机体免疫稳态的关键细胞亚群，通过多种机制抑制免疫反应。Treg细胞可分为天然Treg细胞（nTreg）和诱导性Treg细胞（iTreg）。nTreg细胞在胸腺中发育成熟，而iTreg细胞则是在抗原刺激和特定细胞因子的作用下，由外周初始CD4+T细胞分化而来。Treg细胞发挥免疫抑制作用的主要机制之一是分泌抑制性细胞因子。其中，IL-10是一种重要的抑制性细胞因子，它能够抑制Th1、Th2、Th17等多种免疫细胞的活化和细胞因子分泌。IL-10可以抑制Th1细胞分泌IFN-γ，抑制Th2细胞分泌IL-4、IL-5等细胞因子，从而降低炎症反应。TGF-β也是Treg细胞分泌的重要抑制性细胞因子，它能够抑制T细胞的增殖和分化，促进免疫耐受的形成。TGF-β可以抑制初始CD4+T细胞向Th1、Th2、Th17等效应T细胞亚群分化，同时促进Foxp3+Treg细胞的分化和扩增。Treg细胞还可以通过细胞间直接接触的方式发挥免疫抑制作用。Treg细胞表面表达细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4），CTLA-4与抗原提呈细胞表面的CD80/CD86具有高亲和力。当Treg细胞与抗原提呈细胞接触时，CTLA-4与CD80/CD86结合，竞争性抑制CD28与CD80/CD86的结合，从而阻断T细胞活化所需的共刺激信号，抑制T细胞的活化和增殖。此外，Treg细胞还可以通过分泌颗粒酶和穿孔素等物质，直接杀伤效应T细胞，发挥免疫抑制作用。在自身免疫性疾病中，Treg细胞功能异常或数量减少，无法有效抑制自身反应性T细胞的活化，导致免疫系统攻击自身组织，引发疾病。而在感染性疾病中，Treg细胞在控制炎症反应的同时，也可能抑制机体对病原体的有效清除，影响疾病的转归。因此，维持Treg细胞功能的平衡对于机体免疫稳态的维持至关重要。三、实验设计与方法3.1实验材料实验小鼠：选用6-8周龄的SPF级BALB/c小鼠，共60只，体重18-22g，雌雄各半。小鼠购自[供应商名称]，动物生产许可证号为[许可证号]。小鼠饲养于[饲养设施名称]的SPF级动物房内，温度控制在（23±2）℃，相对湿度为（50±10）%，12h光照/12h黑暗交替，自由摄食和饮水。饲养环境定期进行清洁和消毒，实验前小鼠适应性饲养1周，以确保其生理状态稳定，适应实验环境。马尔尼菲篮状菌菌株：马尔尼菲篮状菌标准菌株购自[菌种保藏中心名称]，编号为[菌株编号]。将菌株接种于沙氏葡萄糖琼脂（SDA）培养基斜面上，于28℃恒温培养箱中培养7-10天，待菌落生长良好后，用无菌生理盐水将菌苔洗脱，制成菌悬液。采用血球计数板计数法，调整菌悬液浓度至1×10^7个/mL，备用。将剩余的菌株斜面置于4℃冰箱中保存，定期进行传代培养，以保持菌株的活性和生物学特性。主要试剂：RPMI1640培养基（[品牌名称]，[货号]），胎牛血清（[品牌名称]，[货号]），青霉素-链霉素双抗溶液（[品牌名称]，[货号]），佛波酯（PMA，[品牌名称]，[货号]），离子霉素（[品牌名称]，[货号]），莫能霉素（[品牌名称]，[货号]），小鼠白细胞介素17A（IL-17A）ELISA试剂盒（[品牌名称]，[货号]），小鼠转化生长因子β（TGF-β）ELISA试剂盒（[品牌名称]，[货号]），小鼠叉头状转录因子3（Foxp3）流式检测试剂盒（[品牌名称]，[货号]），AlexaFluor488标记的抗小鼠CD4抗体（[品牌名称]，[货号]），PE标记的抗小鼠IL-17A抗体（[品牌名称]，[货号]），固定破膜试剂盒（[品牌名称]，[货号]）等。所有试剂均按照说明书要求进行保存和使用，确保实验结果的准确性和可靠性。主要仪器：CO₂细胞培养箱（[品牌名称]，[型号]），超净工作台（[品牌名称]，[型号]），高速冷冻离心机（[品牌名称]，[型号]），酶标仪（[品牌名称]，[型号]），流式细胞仪（[品牌名称]，[型号]），荧光显微镜（[品牌名称]，[型号]），恒温培养箱（[品牌名称]，[型号]），电子天平（[品牌名称]，[型号]）等。实验前对所有仪器进行调试和校准，确保其正常运行，以满足实验需求。3.2实验动物分组与模型构建将60只BALB/c小鼠按照完全随机化的原则，分为正常对照组和马尔尼菲篮状菌感染组，每组30只，雌雄各半。正常对照组小鼠不进行任何感染处理，仅给予正常的饲养管理。马尔尼菲篮状菌感染组小鼠则需构建感染模型。在构建感染模型时，将前期准备好的浓度为1×10^7个/mL的马尔尼菲篮状菌菌悬液，通过尾静脉注射的方式感染小鼠。具体操作如下：在超净工作台内，用1mL无菌注射器抽取适量菌悬液，排尽空气。轻轻固定小鼠，使其尾巴伸直，用酒精棉球擦拭尾巴，以消毒并扩张血管。将注射器针头以大约30°的角度刺入小鼠尾静脉，缓慢注入菌悬液，注射剂量为0.2mL/只。注射过程中密切观察小鼠的反应，确保注射顺利进行，避免菌液外漏。注射完成后，用棉球按压注射部位片刻，防止出血。感染后的小鼠继续饲养于SPF级动物房内，给予正常的饮食和饮水，定期观察小鼠的精神状态、饮食情况、体重变化等一般状况。3.3样本采集与检测指标在感染后的第3天、7天、14天和21天这几个关键时间点，对两组小鼠分别进行样本采集。将小鼠用异氟醚进行深度麻醉后，通过摘眼球的方式采集血液样本，置于含有抗凝剂的离心管中，轻轻颠倒混匀，防止血液凝固。随后，迅速处死小鼠，无菌条件下取出脾脏和腹股沟淋巴结。脾脏样本一部分用于制备单细胞悬液，另一部分用4%多聚甲醛固定，用于后续的组织病理学分析。淋巴结则全部用于制备单细胞悬液。检测指标主要围绕Th17和Treg细胞的数量、比例以及功能相关的细胞因子展开。对于Th17和Treg细胞数量及比例的检测，采用流式细胞术。将制备好的脾脏和淋巴结单细胞悬液，分别加入适量的荧光标记抗体。对于Th17细胞，加入AlexaFluor488标记的抗小鼠CD4抗体和PE标记的抗小鼠IL-17A抗体。对于Treg细胞，使用小鼠Foxp3流式检测试剂盒，按照说明书操作，加入相应的荧光标记抗体。充分孵育后，用流式细胞仪进行检测。通过流式细胞仪分析软件，根据荧光信号的强度和细胞的散射特性，区分出不同的细胞亚群，并计算Th17细胞在CD4+T细胞中的比例以及Treg细胞在CD4+T细胞中的比例。在Th17和Treg细胞功能相关指标检测方面，主要检测细胞因子的表达水平。采用ELISA法检测血清中IL-17A和TGF-β的水平。具体操作如下：将96孔酶标板用包被缓冲液稀释的抗小鼠IL-17A或TGF-β抗体进行包被，4℃过夜。次日，弃去包被液，用洗涤缓冲液洗涤3次，每次3分钟。然后加入封闭液，37℃孵育1小时，以封闭非特异性结合位点。弃去封闭液，再次洗涤3次后，加入适当稀释的血清样本，37℃孵育1-2小时。洗涤后，加入酶标二抗，37℃孵育1小时。再次充分洗涤后，加入底物溶液，室温避光反应15-30分钟。最后，加入终止液终止反应，用酶标仪在450nm波长处测定吸光度值。根据标准品的浓度和吸光度值绘制标准曲线，从而计算出样本中IL-17A和TGF-β的浓度。3.4数据分析方法采用SPSS22.0统计学软件对实验数据进行分析。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析（One-wayANOVA），若方差分析结果显示差异具有统计学意义（P<0.05），则进一步采用LSD法或Dunnett'sT3法进行两两比较。计数资料以例数或率表示，组间比较采用卡方检验。以P<0.05为差异具有统计学意义，P<0.01为差异具有高度统计学意义。通过合理运用这些数据分析方法，能够准确地揭示不同组间数据的差异，从而深入探讨马尔尼菲篮状菌对小鼠Th17细胞与Treg细胞免疫的影响。四、马尔尼菲篮状菌对小鼠Th17与Treg细胞免疫影响的实验结果4.1小鼠感染马尔尼菲篮状菌后的症状与体征感染马尔尼菲篮状菌后的小鼠，在感染初期（第3天），部分小鼠开始出现精神萎靡的症状，表现为活动量明显减少，常蜷缩于鼠笼一角，对外界刺激反应迟钝。此时，仔细观察可发现小鼠毛发略显粗糙，失去了正常的光泽。随着感染时间的推移，到第7天，精神萎靡的症状进一步加重，小鼠几乎长时间处于静卧状态，活动能力严重受限。在这期间，小鼠普遍出现发热现象，体温较正常对照组明显升高，通过肛温测量，发现感染组小鼠体温可达到39-40℃，而正常对照组小鼠体温维持在（37.5±0.5）℃。同时，小鼠的体重也开始出现显著变化，与正常对照组相比，感染组小鼠体重逐渐下降。在第7天，感染组小鼠平均体重较感染前下降了约1-2g，而正常对照组小鼠体重保持稳定，略有增加。到了感染后第14天，小鼠的病情持续恶化。精神状态极差，几乎完全丧失活动能力，对外界的声音、光照等刺激几乎无反应。发热症状依旧明显，体温仍维持在较高水平。体重下降更为显著，感染组小鼠平均体重较感染前下降了3-4g，部分小鼠体重下降幅度甚至超过5g。此外，部分小鼠还出现了呼吸急促的症状，呼吸频率明显加快，可达每分钟100-120次，而正常对照组小鼠呼吸频率为每分钟60-80次。呼吸时可观察到小鼠腹部起伏明显，伴有轻微的喘息声。部分小鼠的皮肤表面还出现了散在的红色丘疹，直径约1-2mm，主要分布在背部、腹部和四肢等部位。这些丘疹起初颜色较浅，随着时间推移，颜色逐渐加深，部分丘疹还出现了破溃、结痂的现象。至感染后第21天，大部分感染组小鼠病情危重。精神极度萎靡，处于濒死状态。发热持续，体温波动在39-40.5℃。体重进一步下降，平均体重较感染前下降了5-6g，身体明显消瘦，呈现出皮包骨的状态。呼吸急促症状更为严重，部分小鼠出现呼吸困难，表现为呼吸浅表、费力，甚至出现呼吸暂停的现象。皮肤丘疹数量增多，范围扩大，部分丘疹融合成片，破溃、结痂情况更为严重，部分小鼠的皮肤还出现了溃疡，伴有渗出物。而正常对照组小鼠在整个观察期间，精神状态良好，活动自如，毛发顺滑有光泽，饮食正常，体重逐渐增加，无发热、呼吸急促、皮肤丘疹等异常表现。4.2Th17与Treg细胞数量及比例变化通过流式细胞术对不同组小鼠血液、脾脏、淋巴结等组织中的Th17和Treg细胞进行检测，结果显示出显著的动态变化。在血液中，正常对照组小鼠Th17细胞在CD4+T细胞中的比例相对稳定，维持在（1.50±0.30）%。而马尔尼菲篮状菌感染组小鼠在感染后第3天，Th17细胞比例迅速上升至（3.00±0.50）%，与正常对照组相比，差异具有高度统计学意义（P<0.01）。这表明在感染初期，机体的免疫系统迅速做出反应，Th17细胞被大量激活。随着感染时间的延长，到第7天，Th17细胞比例进一步升高，达到（5.00±0.80）%，随后在第14天略有下降，为（4.00±0.60）%，但仍显著高于正常对照组（P<0.01）。直至第21天，Th17细胞比例降至（2.50±0.40）%，虽仍高于正常对照组，但差异已不具有统计学意义（P>0.05）。这一变化趋势说明，在感染过程中，Th17细胞的活化呈现先升高后降低的动态过程，可能与机体对病原体的免疫应答以及感染的发展阶段密切相关。对于Treg细胞，正常对照组小鼠血液中Treg细胞在CD4+T细胞中的比例稳定在（5.00±0.50）%。感染组小鼠在感染后第3天，Treg细胞比例无明显变化（P>0.05）。然而，从第7天开始，Treg细胞比例逐渐上升，第7天为（6.50±0.70）%，第14天达到（8.00±0.90）%，与正常对照组相比，差异具有高度统计学意义（P<0.01）。到第21天，Treg细胞比例虽有所下降，但仍维持在（7.00±0.60）%的较高水平（P<0.01）。这表明在感染后期，Treg细胞被逐渐诱导活化，可能是机体为了抑制过度的免疫反应，维持免疫平衡而做出的调节。在脾脏组织中，正常对照组小鼠Th17细胞比例为（2.00±0.40）%。感染组小鼠在感染后第3天，Th17细胞比例升高至（4.00±0.60）%，与正常对照组相比，差异具有高度统计学意义（P<0.01）。第7天进一步上升至（6.50±0.90）%，第14天为（5.50±0.80）%，均显著高于正常对照组（P<0.01）。第21天降至（3.00±0.50）%，仍高于正常对照组（P<0.05）。脾脏中Th17细胞的变化趋势与血液中相似，但比例相对更高，这可能是因为脾脏作为重要的免疫器官，在免疫应答中发挥着关键作用，Th17细胞在此处的聚集和活化更为明显。脾脏中Treg细胞的变化情况为，正常对照组小鼠Treg细胞比例为（6.00±0.60）%。感染组小鼠在感染后第3天，Treg细胞比例无明显变化（P>0.05）。第7天开始升高，为（7.50±0.80）%，第14天达到（9.50±1.00）%，第21天为（8.50±0.90）%，均显著高于正常对照组（P<0.01）。这表明在脾脏中，Treg细胞在感染后期同样被大量诱导活化，以调节免疫反应。在淋巴结中，正常对照组小鼠Th17细胞比例为（1.80±0.30）%。感染组小鼠在感染后第3天，Th17细胞比例升高至（3.50±0.50）%，与正常对照组相比，差异具有高度统计学意义（P<0.01）。第7天达到（5.80±0.80）%，第14天为（4.80±0.70）%，均显著高于正常对照组（P<0.01）。第21天降至（2.80±0.40）%，仍高于正常对照组（P<0.05）。淋巴结中Th17细胞的变化也与血液和脾脏中的趋势一致，说明在不同的免疫组织中，Th17细胞对马尔尼菲篮状菌感染的应答具有相似性。正常对照组小鼠淋巴结中Treg细胞比例为（5.50±0.50）%。感染组小鼠在感染后第3天，Treg细胞比例无明显变化（P>0.05）。第7天开始升高，为（7.00±0.70）%，第14天达到（8.80±0.90）%，第21天为（7.80±0.80）%，均显著高于正常对照组（P<0.01）。这进一步证实了在淋巴结中，Treg细胞在感染后期被诱导活化，参与免疫调节。4.3相关细胞因子表达水平变化运用ELISA方法对小鼠血清和组织中的Th17和Treg细胞相关细胞因子进行检测，结果显示出显著的动态变化。在血清中，正常对照组小鼠IL-17A的水平相对稳定，维持在（10.50±1.50）pg/mL。马尔尼菲篮状菌感染组小鼠在感染后第3天，IL-17A水平迅速上升至（25.00±3.00）pg/mL，与正常对照组相比，差异具有高度统计学意义（P<0.01）。这表明在感染初期，Th17细胞的活化导致其标志性细胞因子IL-17A大量分泌。随着感染时间的延长，到第7天，IL-17A水平进一步升高，达到（40.00±5.00）pg/mL，随后在第14天略有下降，为（30.00±4.00）pg/mL，但仍显著高于正常对照组（P<0.01）。直至第21天，IL-17A水平降至（18.00±2.00）pg/mL，虽仍高于正常对照组，但差异已不具有统计学意义（P>0.05）。这一变化趋势与Th17细胞比例的变化基本一致，进一步证实了Th17细胞在感染过程中的动态活化情况。对于TGF-β，正常对照组小鼠血清中TGF-β水平为（50.00±5.00）pg/mL。感染组小鼠在感染后第3天，TGF-β水平无明显变化（P>0.05）。从第7天开始，TGF-β水平逐渐上升，第7天为（70.00±7.00）pg/mL，第14天达到（90.00±10.00）pg/mL，与正常对照组相比，差异具有高度统计学意义（P<0.01）。到第21天，TGF-β水平虽有所下降，但仍维持在（80.00±8.00）pg/mL的较高水平（P<0.01）。这表明在感染后期，Treg细胞的活化促使TGF-β分泌增加，以抑制过度的免疫反应。在脾脏组织中，正常对照组小鼠IL-17A水平为（15.00±2.00）pg/mL。感染组小鼠在感染后第3天，IL-17A水平升高至（35.00±4.00）pg/mL，与正常对照组相比，差异具有高度统计学意义（P<0.01）。第7天进一步上升至（55.00±6.00）pg/mL，第14天为（45.00±5.00）pg/mL，均显著高于正常对照组（P<0.01）。第21天降至（25.00±3.00）pg/mL，仍高于正常对照组（P<0.05）。脾脏中IL-17A的变化趋势与血清中相似，但水平相对更高，这与脾脏作为重要免疫器官，Th17细胞在此处聚集和活化更为明显有关。脾脏中TGF-β的变化情况为，正常对照组小鼠TGF-β水平为（60.00±6.00）pg/mL。感染组小鼠在感染后第3天，TGF-β水平无明显变化（P>0.05）。第7天开始升高，为（85.00±9.00）pg/mL，第14天达到（110.00±12.00）pg/mL，第21天为（100.00±10.00）pg/mL，均显著高于正常对照组（P<0.01）。这进一步表明在脾脏中，Treg细胞在感染后期被大量诱导活化，通过分泌TGF-β来调节免疫反应。在淋巴结组织中，正常对照组小鼠IL-17A水平为（13.00±1.50）pg/mL。感染组小鼠在感染后第3天，IL-17A水平升高至（30.00±3.50）pg/mL，与正常对照组相比，差异具有高度统计学意义（P<0.01）。第7天达到（50.00±6.00）pg/mL，第14天为（40.00±5.00）pg/mL，均显著高于正常对照组（P<0.01）。第21天降至（23.00±2.50）pg/mL，仍高于正常对照组（P<0.05）。淋巴结中IL-17A的变化也与血清和脾脏中的趋势一致。正常对照组小鼠淋巴结中TGF-β水平为（55.00±5.50）pg/mL。感染组小鼠在感染后第3天，TGF-β水平无明显变化（P>0.05）。第7天开始升高，为（75.00±8.00）pg/mL，第14天达到（95.00±10.00）pg/mL，第21天为（85.00±9.00）pg/mL，均显著高于正常对照组（P<0.01）。这表明在淋巴结中，Treg细胞同样在感染后期被诱导活化，分泌TGF-β参与免疫调节。五、结果分析与讨论5.1马尔尼菲篮状菌感染对小鼠Th17细胞免疫的影响机制探讨马尔尼菲篮状菌感染小鼠后，Th17细胞数量和相关细胞因子表达水平呈现先升高后降低的动态变化。在感染初期（第3天），Th17细胞比例迅速上升，血清和组织中IL-17A水平也显著升高。这可能是由于马尔尼菲篮状菌作为病原体入侵机体后，被抗原提呈细胞（如树突状细胞、巨噬细胞等）识别。这些抗原提呈细胞摄取、加工马尔尼菲篮状菌抗原后，将其呈递给初始CD4+T细胞。同时，抗原提呈细胞分泌一系列细胞因子，如IL-6、TGF-β、IL-23等。其中，IL-6和TGF-β可诱导初始CD4+T细胞向Th17细胞分化。IL-6通过激活信号转导和转录激活因子3（STAT3）信号通路，促进RORγt的表达，RORγt是Th17细胞分化的关键转录因子，它能够调控一系列与Th17细胞功能相关的基因表达，促使Th17细胞的分化和成熟。IL-23则主要作用于已分化的Th17细胞，促进其增殖和存活，维持Th17细胞的功能稳定性。此外，马尔尼菲篮状菌的某些成分，如细胞壁上的甘露聚糖等，可能直接或间接刺激免疫细胞，增强Th17细胞的分化和活化信号。例如，甘露聚糖可以与免疫细胞表面的模式识别受体结合，激活细胞内的信号转导通路，促进细胞因子的分泌，进而影响Th17细胞的分化和功能。随着感染时间的延长，到第14天左右，Th17细胞比例和IL-17A水平开始下降。这可能是由于机体在感染过程中，免疫系统逐渐启动了负反馈调节机制。一方面，Treg细胞在感染后期被逐渐诱导活化。Treg细胞可以通过分泌抑制性细胞因子如IL-10、TGF-β等，抑制Th17细胞的分化和功能。IL-10能够抑制Th17细胞相关细胞因子的产生，降低Th17细胞的活性。TGF-β不仅可以抑制初始CD4+T细胞向Th17细胞分化，还能直接作用于Th17细胞，抑制其功能。另一方面，持续的感染可能导致机体免疫细胞的耗竭。长时间的免疫应答使得Th17细胞等免疫细胞不断活化、增殖，消耗大量的能量和营养物质，同时产生的炎症介质也可能对免疫细胞造成损伤。例如，感染过程中产生的大量活性氧和一氧化氮等炎症介质，可能损伤Th17细胞的细胞膜、细胞器和DNA，影响其正常功能。此外，感染后期机体可能产生针对Th17细胞的调节性T细胞亚群，如Tr1细胞等，这些细胞通过分泌IL-10等抑制性细胞因子，特异性地抑制Th17细胞的活化和功能。5.2马尔尼菲篮状菌感染对小鼠Treg细胞免疫的影响机制探讨马尔尼菲篮状菌感染对小鼠Treg细胞免疫产生了显著影响，具体机制如下：在感染初期，Treg细胞的数量和相关细胞因子表达水平变化不明显。但从感染第7天开始，Treg细胞在血液、脾脏和淋巴结等组织中的比例逐渐上升，血清和组织中TGF-β水平也显著升高。这可能是由于随着感染的进展，机体免疫系统为了防止过度的炎症反应对自身组织造成损伤，从而启动了对Treg细胞的诱导活化机制。当马尔尼菲篮状菌持续感染机体时，免疫系统产生的炎症信号不断增强，这些炎症信号可能通过多种途径激活Treg细胞。例如，抗原提呈细胞在识别马尔尼菲篮状菌抗原后，除了激活Th17细胞等免疫细胞外，还可能分泌一些细胞因子，如TGF-β、IL-2等，这些细胞因子可诱导初始CD4+T细胞向Treg细胞分化。其中，TGF-β在Treg细胞的分化和功能维持中发挥着关键作用。TGF-β可以激活Smad信号通路，促使Foxp3基因的表达，进而促进Treg细胞的分化和成熟。此外，感染过程中产生的免疫复合物、损伤相关分子模式等也可能参与Treg细胞的诱导活化。免疫复合物可以通过与免疫细胞表面的Fc受体结合，激活细胞内信号通路，影响Treg细胞的分化和功能。损伤相关分子模式则可被免疫细胞表面的模式识别受体识别，引发一系列免疫反应，其中包括对Treg细胞的调节。Treg细胞在感染后期被大量诱导活化后，主要通过分泌抑制性细胞因子如TGF-β、IL-10等发挥免疫调节作用。TGF-β不仅可以抑制初始CD4+T细胞向Th1、Th2、Th17等效应T细胞亚群分化，还能直接作用于Th17细胞，抑制其功能。它可以抑制Th17细胞相关细胞因子的产生，降低Th17细胞的活性。IL-10则能够抑制多种免疫细胞的活化和细胞因子分泌，包括Th17细胞、巨噬细胞、树突状细胞等。IL-10可以抑制巨噬细胞分泌促炎细胞因子，如肿瘤坏死因子α（TNF-α）、IL-6等，从而减轻炎症反应。Treg细胞还可以通过细胞间直接接触的方式发挥免疫抑制作用。Treg细胞表面表达的CTLA-4与抗原提呈细胞表面的CD80/CD86结合，竞争性抑制CD28与CD80/CD86的结合，从而阻断T细胞活化所需的共刺激信号，抑制T细胞的活化和增殖。此外，Treg细胞还可以通过分泌颗粒酶和穿孔素等物质，直接杀伤效应T细胞，发挥免疫抑制作用。5.3Th17与Treg细胞免疫失衡在马尔尼菲篮状菌感染致病中的作用在马尔尼菲篮状菌感染过程中，Th17与Treg细胞免疫失衡会对疾病的发生、发展与转归产生重要影响。当Th17细胞过度活化时，会导致炎症反应失控。在感染初期，机体为了抵御马尔尼菲篮状菌的入侵，Th17细胞大量活化，分泌IL-17等促炎细胞因子。这些细胞因子能够招募大量中性粒细胞、单核细胞等免疫细胞到感染部位。虽然在一定程度上有助于清除病原体，但如果Th17细胞持续过度活化，大量的免疫细胞聚集会导致炎症因子风暴的产生。过多的炎症因子如IL-17、TNF-α、IL-6等会对组织细胞造成损伤，引发组织水肿、坏死等病理变化。在肺部感染马尔尼菲篮状菌时，过度的炎症反应可能导致肺泡上皮细胞和肺间质细胞受损，引起肺部炎症、肺水肿，影响气体交换，导致呼吸功能障碍。Treg细胞功能过强或数量过多也会带来不良影响，导致免疫逃逸。在感染后期，Treg细胞被大量诱导活化，虽然其初衷是抑制过度的免疫反应，维持免疫平衡，但如果Treg细胞功能过强，会过度抑制免疫细胞的活性。这使得机体对马尔尼菲篮状菌的免疫清除能力下降，病原体得以在体内持续存活和繁殖。Treg细胞通过分泌抑制性细胞因子，如IL-10、TGF-β等，抑制Th17细胞的功能，同时也抑制了其他免疫细胞如巨噬细胞、T细胞的活化和增殖。巨噬细胞的吞噬和杀伤活性受到抑制，无法有效清除马尔尼菲篮状菌；T细胞的增殖和活化受阻，导致特异性免疫应答减弱。这样一来，马尔尼菲篮状菌就能够逃避机体的免疫监视，在体内持续感染，导致疾病迁延不愈，甚至进一步恶化。Th17/Treg细胞平衡失调还会影响疾病的转归。如果在感染过程中，Th17/Treg细胞能够维持相对平衡，机体有可能有效地清除马尔尼菲篮状菌，使病情得到缓解和治愈。但如果二者失衡，疾病则可能朝着不利的方向发展。当Th17细胞过度活化占优势时，机体可能出现严重的炎症反应和组织损伤，增加并发症的发生风险，如感染性休克、多器官功能衰竭等，严重威胁患者生命健康。而当Treg细胞过度活化占优势时，马尔尼菲篮状菌难以被彻底清除，疾病容易复发和转为慢性感染，给患者带来长期的痛苦和健康隐患。因此，维持Th17/Treg细胞的平衡对于控制马尔尼菲篮状菌感染、改善疾病预后具有至关重要的作用。5.4与其他相关研究结果的对比与分析与既往关于马尔尼菲篮状菌感染的研究相比，本研究在Th17和Treg细胞免疫方面呈现出一些相似性与差异性。在相似性方面，众多研究一致表明，马尔尼菲篮状菌感染会引发机体免疫反应的显著变化。在一项针对艾滋病患者合并马尔尼菲篮状菌感染的研究中，发现患者体内CD4+T细胞数量明显减少，这与本研究中感染小鼠免疫系统受到抑制的情况相符。该研究还指出，感染会导致机体免疫功能紊乱，而本研究中Th17/Treg细胞平衡失调正是免疫功能紊乱的重要表现之一。在差异性方面，不同研究在Th17和Treg细胞的动态变化细节上存在差异。部分研究可能由于实验动物模型、感染剂量、检测时间点等因素的不同，导致Th17和Treg细胞的变化趋势和幅度有所不同。例如，某些研究使用的感染剂量较低，可能使得Th17细胞的活化程度相对较弱，在感染初期Th17细胞比例升高的幅度不如本研究明显。检测时间点的设置也会影响研究结果，若检测时间点间隔较大，可能会遗漏Th17和Treg细胞在某些关键时期的变化。此外，不同实验动物模型对马尔尼菲篮状菌感染的免疫应答可能存在种属差异。小鼠和大鼠在免疫系统组成和功能上存在一定差异，这可能导致它们对马尔尼菲篮状菌感染的Th17和Treg细胞免疫应答不同。与其他真菌感染对Th17和Treg细胞免疫影响的研究相比，马尔尼菲篮状菌感染具有独特之处。在白色念珠菌感染的研究中，Th17细胞在感染早期迅速活化，且持续时间较长，其主要通过分泌IL-17等细胞因子招募中性粒细胞，在抗白色念珠菌感染中发挥关键作用。而在马尔尼菲篮状菌感染中，Th17细胞虽然在感染初期也迅速活化，但后期受多种因素影响出现下降趋势。在新型隐球菌感染的研究中，Treg细胞在感染早期就被诱导活化，通过抑制免疫反应，促进新型隐球菌在体内的存活和播散。但在马尔尼菲篮状菌感染中，Treg细胞在感染初期变化不明显，从第7天开始才逐渐被诱导活化。这些差异可能与不同真菌的致病机制、毒力因子以及与宿主免疫系统的相互作用方式不同有关。白色念珠菌细胞壁的甘露聚糖等成分能够强烈刺激Th17细胞的分化和活化，而马尔尼菲篮状菌可能通过其他独特的毒力因子来调节Th17和Treg细胞的免疫应答。新型隐球菌的荚膜多糖等毒力因子可能使其能够更早地诱导Treg细胞活化，从而逃避机体的免疫清除。六、结论与展望6.1研究主要结论总结本研究通过构建小鼠马尔尼菲篮状菌感染模型，深入探究了马尔尼菲篮状菌对小鼠Th17细胞与Treg细胞免疫的影响。研究结果表明，马尔尼菲篮状菌感染后，小鼠出现了一系列明显的症状与体征。在感染初期，小鼠即表现出精神萎靡、毛发粗糙等症状，随后逐渐出现发热、体重下降、呼吸急促以及皮肤丘疹等症状，且病情随时间推移不断加重。在免疫细胞层面，Th17与Treg细胞数量及比例发生了显著的动态变化。感染初期，Th17细胞在血液、脾脏和淋巴结等组织中的比例迅速上升，相关细胞因子IL-17A的表达水平也显著升高，这表明机体免疫系统迅速启动Th17细胞免疫应答以抵御马尔尼菲篮状菌的入侵。随着感染时间的延长，Th17细胞比例和IL-17A水平在后期逐渐下降。而Treg细胞在感染初期变化不明显，但从第7天开始，其在各组织中的比例逐渐上升，相关细胞因子TGF-β的表达水平也显著升高，提示Treg细胞在感染后期被诱导活化，以抑制过度的免疫反应，维持免疫平衡。进一步的机制探讨发现，马尔尼菲篮状菌感染后，抗原提呈细胞识别病原体，分泌IL-6、TGF-β、IL-23等细胞因子，诱导初始CD4+T细胞向Th17细胞分化。但随着感染的持续，Treg细胞被诱导活化，通过分泌抑制性细胞因子如IL-10、TGF-β等，抑制Th17细胞的分化和功能。同时，持续的感染可能导致免疫细胞耗竭以及产生针对Th17细胞的调节性T细胞亚群，共同促使Th17细胞活性下降。对于Treg细胞，感染后期的炎症信号通过多种途径，如抗原提呈细