CN114739976B 一种sers探针生物传感器及其制备方法和使用方法 （海南医学院）

nanoparticleassembledSERSdetection.Chem.Commun..2015,第51卷第KaiZhang等.Afluorometricapmagnetitenanoparticles.Microch一种SERS探针生物传感器及其制备方法和本发明公开了一种SERS探针生物传感器及适配体，所述DNA探针1和DNA探针2上至少有5个基与所述适配体上的碱基互补配对，且DNA探针探针1还共价连接拉曼报告分子修饰的金纳米颗21.一种非诊断目的的SERS探针生物传感器检测急性肾损伤中蛋白质生物标志物的方上清液中是否含有SERS信号；所述蛋白质生物标志物为中性粒细胞明胶酶脂质运载蛋白S1金纳米颗粒的制备：将柠檬酸钠溶液与氯金酸溶液S2拉曼报告分子标记的金纳米的制备：将拉曼报告分S3DNA功能化的SERS探针的制备：将DNA探针1与三(S4DNA功能化的表面修饰链霉亲和素的磁珠的制备：将S5SERS探针生物传感器的制备：将步骤S3制备得到的DN2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于分子修饰的金纳米颗粒共价连接，所述DNA探针2通过SA-Biotin反应与所述表面修饰链霉3DNA适配体与目标分析物的强结合构建基于SERS的适配体生物传感器，以实现对复杂混合用于诊断AKI的血清肌酐升高之前就能被特定的生物标志物检测到，尤其是能在老年人和需的半胱氨酸蛋白酶抑制剂，已被提议作为用于AKI检测的肾小球滤过率的迷人生物标志4DNA探针2上至少有5个碱基互补配对，DNA探针1和DNA探针2上的剩余碱基与所述适配体上连接拉曼报告分子修饰的金纳米颗粒，所述DNA探针2共价连接表面修饰链霉亲和素的磁混合物1，然后将步骤S2制备得到的拉曼报告分子标记的金纳米加入混合物1中孵育过夜，温并储存在4℃以供进一步使用。5[0022]本发明还提供了一种使用上述SERS探针生物传感器检测急性肾损伤中蛋白质生测，然后使用拉曼光谱仪对上清液进行SERS扫描可以对双生物标志物进行灵敏的定量检[0028]4、SERS探针生物传感器针对特异性生物标志物识别不受其他非靶标生物标志物[0030]6、SERS探针生物传感器可对双生物标志物进行分析，实现急性肾损伤的精准诊6[0042]将75mL的2.2mM柠檬酸钠添加到三颈圆底[0046]将DNA探针1、DNA探针2和适配体分散在TE缓冲液(1MTris-HCl5mL,pH＝8.00[0047]其中，用于检测NGAL的Y型适配体SERS探针序列和用于检测CysC的Y型适配体7能化的SERS探针并储存在4℃的PBS中以供进一步使用。[0054]金纳米颗粒易于合成，金纳米颗粒的等离子体吸收与入射激光(633nm)之间的重[0055]为了将带负电荷的DNA探针1附着到带负电荷的MGITC标记的金纳米上，使用了盐老化方法。在硫醇(SH)-DNA探针1和MGITC标记的金纳米的混合物2中逐渐加入盐以减少电[0057]生物素化的DNA探针2通过SA-Biotin反应在DNA探针2的3'端与表面修饰链霉亲和素的磁珠结合。首先，将100μL的10μMDNA探针2与200μL表面修饰链霉亲和素的磁珠[0059]将制备得到的DNA功能化的SERS探针分散到制备得到的DNA功能化的表面修饰链8[0064]为了比较，申请人引入了与DNA探针1和适配体碱基均无互补配对能力的DNA链S2几秒钟，然后表面修饰链霉亲和素磁珠会在磁力作用下聚集。样品1中的红色表明游离的MGITC修饰的金纳米分散在上清液中，说明在链霉亲和素磁球表面上的DNA探针2是形成稳与其互补序列(DNA探针1和DNA探针2)之间的高亲和力，它们分别固定在金纳米和磁珠表[0066]为了提高检测灵敏度，MGITC标记的金纳米颗粒被用作蛋白质生物标志物适配体的SERS信号来实现AKI生物标志物的定[0068]在该生物传感器中，AKI生物标志物的确定是基于相应适配体的特异性识别来实9归因于Y型设计的有利结构，它赋予适配体传感器选择性结合能力和对NGAL生物标志物的[0070]为了评估适配体传感器的检测性能，对AKI生物标志物进行了定量分析。选择MGITC(1618cm-1)的特征拉曼峰用于监测NGAL和CysC水平。图7a显示了使用建议的测定法[0072]验证双链测定的性能及其在大鼠血浆基质中的应用。我们首先构建了大鼠AKI模型，并通过观察肾组织切片的H&E染色和药物治疗后不同时间点的SERS测定对其进行了研2＝0.9942＝SERS能够比大鼠体内荧光成像更早地检测到靶蛋白浓度水平的变化。这也提示Y型适配体[0074]为评估在临床场景中用于双重检测NGAL和CysC的性能。在标准曲线的线性动态浓度的增加，SERS信号强度按预期增加。通过监测相应测试线在1618cm-1处的SERS信号强用于根据SERS信号强度计算加标样品中生物标志物的[0075]然后，每个样品的NGAL和CysC的近似浓度可以通过所提出的生物传感器基于已为28.93至44.01ng/mL和904至1201ng/mL。通过分析两种不同测定法测定的浓度之间的一检测具有更大的动态范围(10-2-105ng/mL)以及更少的血样需求(仅5μL)。基于SERS探针的生物传感器的这些令人兴奋的性能表明，该方法具有成为临床实践中NGAL和CysC检测的[0012]agcagcacaga[0079]cctaaccgat