《微生物检验技术培训课程》课件-项目7：肠杆菌科（革兰阴性杆菌）检验

沙门菌属检验SALMONELLATEST概念寄生于人与动物肠道生化反应和抗原结构相似G-杆菌菌种少，但血清型超过2500个对人类致病的占少数致病菌株具有种系特异性伤寒沙门菌型副伤寒沙门菌乙型副伤寒沙门菌丙型副伤寒沙门菌只对人致病概念某些动物沙门菌也可对人致病鼠伤寒沙门菌猪霍乱沙门菌肠炎沙门菌人兽共患病病原体（一）形态与染色一、生物学性状G-细长杆菌多数有周身鞭毛（除鸡、雏沙门菌）有菌毛，无荚膜、无芽胞（二）培养特性一、生物学性状需氧或兼性厌氧，最适温度35~37℃，最适pH值7.4。营养需求不高，普通培养基上生长良好。不分解乳糖，在肠道选择性培养基上（如MAC\SS），形成透明或半透明的菌落。产H2S菌株在SS琼脂平板上可形成中心为黑色菌落。（三）生化反应一、生物学性状表5-1沙门菌属的主要生化反应特征KIA试验MIU试验甲基红试验VP试验枸橼酸盐利用试验斜面底层产气H2S动力吲哚脲酶KA+/-+/-+--+--/+（四）抗原构造及分类一、生物学性状成分稳定性相应抗体类型作用O抗原LPS耐热IgM，与相应抗原反应成颗粒状凝集分群依据：引起人类沙门菌病的多属A-F群H抗原蛋白质不耐热IgG，与相应抗原反应成絮状凝集分型依据，有两种：第1相为特异相，第2相非特异相Vi抗原不耐热阻碍O抗原与相应抗体的凝集反应，影响分群鉴定（五）抵抗力一、生物学性状不强，加热60℃经1h或65℃15~20min即死亡水中能存活2-3W粪便中可活1-2个月冰冻土壤中可过冬耐受胆盐、煌绿及其他染料（一）致病物质二、临床意义侵袭力：菌毛黏附、鞭毛运动、O和Vi抗原抗吞噬。内毒素：引起体温升高、白细胞数改变。大剂量可导致中毒和休克。肠毒素：某些沙门菌如鼠伤寒沙门菌。（二）所致疾病-----沙门菌病二、临床意义胃肠炎（食物中毒，最常见）鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、猪霍乱沙门菌。败血症猪霍乱沙门菌、鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、希氏沙门菌。肠热症伤寒、副伤寒。伤寒、甲型副伤寒、肖氏、希氏沙门菌引起。肠热症的致病过程（二次菌血症）第一次菌血症第1w第二次菌血症第2-3W伤寒沙门和甲型副伤寒杆菌、肖氏、希氏沙门菌小肠上部粘膜细胞固有层淋巴结肠系膜淋巴结进入血液再次进入血液胆囊-----肠道-------粪排菌皮肤----血栓出血--玫瑰疹肾-----尿肝脾-----肿大骨髓伤寒典型表现持续高热相对缓脉肝脾肿大皮肤玫瑰疹外周血白细胞减少（一）标本采集三、微生物学检验肠热症在病程不同阶段采取不同标本第一周采集外周血第二周起采集粪便和尿液骨髓中的细菌可全程采集胃肠炎取粪便、呕吐物或可疑食物。败血症取血液。胆道带菌者可取十二指肠引流液。（二）检验程序三、微生物学检验中段尿、脓液、痰液、分泌物等血液等粪便、呕吐物、剩余食物涂片革兰染色镜检分离培养（BAP/EMB/MAC）增菌培养(血液)分离培养（EMB/MAC）可疑菌落初步鉴定（KIA\MIU试验）最终鉴定药敏试验肠道外感染：全面生化反应肠道内感染：生化、血清学鉴定、补充实验三、微生物学检验表5-1沙门菌属的主要生化反应特征KIA试验MIU试验甲基红试验VP试验枸橼酸盐利用试验斜面底层产气H2S动力吲哚脲酶KA+/-+/-+--+--/+（三）检验方法——生化鉴定（三）检验方法——血清学分型三、微生物学检验血清学鉴定：O（A-F）多价血清（定大群）O因子血清（定群）H因子血清（定型）沙门菌属主要鉴定依据定科：形态为G-短杆菌、有周鞭毛或无、O/F试验为发酵型、氧化酶-，触酶+，硝酸盐还原试验+；定属：KIA:AK+/-+/-；MIU:+--；IMViC:-+-+；定血清型：O（A-F）多价血清定大群→O因子血清定群→H因子血清定型。感谢观看THANKYOUFORWATCHING志贺菌属检验SHIGELLATEST概念人类细菌性痢疾的病原菌统称痢疾杆菌（一）形态与染色一、生物学性状G-杆菌无鞭毛、无荚膜、无芽胞多数有菌毛（二）培养特性一、生物学性状营养需求不高，普通培养基上生长良好；需氧或兼性厌氧，最适温度35~37℃，最适pH值7.2-7.4；除宋内志贺菌个别菌株外，均不分解乳糖，在肠道选择性培养基上（如MAC），形成透明或半透明的菌落。一、生物学性状（三）生化反应氧化酶-触酶+硝酸盐还原+O/F发酵型脲酶-硫化氢-符合肠杆菌科定科试验此外（三）生化反应一、生物学性状表5-1志贺菌属的主要生化反应特征KIA试验MIU试验甲基红试验VP试验枸橼酸盐利用试验斜面底层产气H2S动力吲哚脲酶KA-/+---/+-+--（四）抗原构造及分类一、生物学性状菌体抗原（O）：群、型特异性抗原表面抗原（K)无鞭毛抗原（四）抗原构造及分类一、生物学性状根据生化反应和O抗原不同菌群菌种型亚型A痢疾志贺菌1~158a、8b、8cB福氏志贺菌1~6，x、y1a、1b、2a、2b、3a、3b、3c、4a、4bC鲍氏志贺菌1~19——D宋内志贺菌1——（五）抵抗力一、生物学性状弱，加热60℃10min即死亡对酸和一般消毒剂敏感粪便标本中，其他肠道菌产酸使本菌在数小时内死亡，因此运送标本时应使用含有缓冲液的培养基。Cary-Blair运送培养基（卡-布运送培养基，PH8.4±0.1）病原菌口结肠粘膜上皮细胞内生长繁殖菌毛，粘附外毒素细胞毒素神经毒素肠毒素内毒素：全身发热、中毒、休克、DIC毒素腹痛、腹泻、里急后重、脓血粘液便二、临床意义二、临床意义人对志贺菌较易感，经消化道感染200个细菌，即可引起典型的菌痢感染。急性菌痢慢性菌痢：病程超过2个月以上带菌者免疫性：主要依靠肠粘膜表面的SIgA，因该菌不入血，故免疫力不持久。（一）标本采集三、微生物学检验发病早期和在抗生素使用前采集；采集新鲜粪便中脓、血、黏液部分；床边接种或立即送检，不能及时接种者可用30%甘油缓冲盐水或卡-布运送培养基送检；昏迷或留取粪便困病人可用肛拭取样。（二）检验程序三、微生物学检验粪便、肛拭子增菌培养(GN肉汤)分离培养（EMB/MAC）可疑菌落初步鉴定（KIA\MIU试验）最终鉴定药敏试验全面生化反应血清学鉴定37℃4~6h（三）检验方法——生化鉴定三、微生物学检验表5-1志贺菌属的主要生化反应特征KIA试验MIU试验甲基红试验VP试验枸橼酸盐利用试验斜面底层产气H2S动力吲哚脲酶KA-/+---/+-+--（三）检验方法——血清学分型鉴定三、微生物学检验O（A-D）多价血清（确认定属）O因子血清（定群、型）共同生化特性：动力-，葡萄糖+，乳糖-/+（迟）与EIEC的鉴别志贺菌EIEC醋酸利用试验-+葡萄糖胺利用试验-+粘质酸盐产酸试验-+感谢观看THANKYOUFORWATCHING耶尔森菌属检验YERSINIATEST耶尔森菌属包括11个菌种，对人致病的有：鼠疫耶尔森菌小肠结肠炎耶尔森菌假结核耶尔森菌一、鼠疫耶尔森菌公元542年查士丁尼瘟疫断送了罗马帝国复兴的希望公元1347年第二次流行推动了文艺复兴的发展公元1894年第三次流行推动了现代医学的发展一、鼠疫耶尔森菌（一）生物学性状——形态与染色G-短杆菌，卵圆形，两端浓染。有荚膜，无芽胞、无鞭毛，在陈旧培养物和3%氯化钠呈现多形性或仅见菌影。鼠疫耶尔森菌镜下形态（Wayson染色）一、鼠疫耶尔森菌（一）生物学性状——培养特性条件：兼性厌氧，营养要求不高温度27℃—30℃PH6.9-7.2。生长情况：血平：柔软、粘稠粗糙型菌落；液体：浑浊、沉淀、菌膜。稍摇菌膜下沉呈现“钟乳石”状；半固体：纵树状生长。一、鼠疫耶尔森菌（一）生物学性状——生化反应动力-葡萄糖+甘露醇+脲酶-硫化氢-MIU---IMViC-+--一、鼠疫耶尔森菌（二）临床意义一、鼠疫耶尔森菌（二）临床意义一、鼠疫耶尔森菌（二）临床意义一旦疑为本菌感染，应立即向本地区CDC等部门报告，并将菌种送检验中心或专业实验室作进一步鉴定。诊断确立后除对患者进行隔离治疗外，对疫区及有关人员须采取有效的预防隔离措施，防止疫情扩散。二、小肠结肠炎耶尔森菌（一）生物学性状——形态与染色G-球杆菌。无荚膜，无芽胞。在25℃培养时有周鞭毛，呈翻滚旋转运动；37℃时无动力。二、小肠结肠炎耶尔森菌（一）生物学性状——培养特性条件：兼性厌氧，营养要求不高耐低温，温度20℃—28℃最适生长情况：MAC和NYE：呈乳糖不发酵型菌落液体：浑浊、菌膜、沉淀。二、小肠结肠炎耶尔森菌（一）生物学性状——生化反应葡萄糖+乳糖-硫化氢-脲酶+鸟氨酸脱羧酶+动力、V-P试验25℃+、37℃