CN114875141B 用于肺癌诊断的试剂盒、装置及方法 （中国医学科学院肿瘤医院）

202010391310.62020.05.11号US2012108462A1,2012.05.03US2019247418A1,2019.08.15本发明公开包括外泌体miR_106b_3p、miR_450b_5p等在肺癌诊断中的应用，其中试剂盒包括检测外泌体miRNA标志物的引物和探针，所述外泌体miRNA标志物包括let_7a_3pmiR_106b_3p、miR_10a_3p、miR_10a_5p、miR_125a_5p、miR_1294、miR_19a_3p、mmiR_29a_3p、miR_30e_5p、miR_3158_3p、miR_21.一种检测血浆外泌体miRNA标志物的引物和探针在制备肺癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于，所述外泌体miRNA标志物为miR_106b_3p、miR_10a_5p、miR_125a_5p、miR_3.一种检测血浆外泌体miRNA标志物的引物和探针在制备肺癌诊断的装置中的应用，其特征在于，所述外泌体miRNA标志物为miR_106b_3p、miR_10a_5p、miR_125a_5p、miR_3[0005]本发明一方面提供一种用于肺癌诊断的试剂盒，包括检测外泌体miRNA标志物的[0009]优选，所述外泌体miRNA标志物为miR_106b_3p、miR_125a_5p、miR_3615、miR_45[0038]本发明另一方面提供一种用于肺癌诊断的装置，包括检测外泌体miRNA标志物的6[0039]本发明另一方面提供一种用于肺癌诊断的方法，包括检测外泌体miRNA标志物的[0049]图9是miR_106b_3p+miR_125a_5p+miR_3615+miR_450b_5p+miR_885_5组合检测肺[0050]图10是miR_106b_3p+miR_10a_3p+miR_125a_5p+miR_3615+miR_450b_5p组合检测[0051]图11是miR_106b_3P+miR_10a_5p+miR_125a_5p+miR_3615+miR_450b_5p组合检测囊泡主要由微囊泡(MicroVesicles,MVs)和外泌体(exosomes)组成，微囊泡是细胞激活或[0053]外泌体是一种由细胞内多泡体与细胞膜融合后分泌到细胞外环境中粒径介于307外泌体中呈现显著差异表达的miRNA中的一种或多种作为诊断早期肺[0057]另外，本发明的用于肺癌诊断的试剂盒包括检测上述外泌体miRNA标志物的引物89[0092]为了筛选到与结肺癌诊断相关的外泌体标志物，早期肺癌患者50例和对照各72例，取血液不少于10ml并分离血浆，用于经典超速离心方法分离血浆中的外泌体并提取模型的输出值及判定阈值对待测个体是否为肺[0095]包括选用外参Cel_miR_39或者内参U6进行目标RNA的定量。其中选用参照时目标RNA的定量根据检测Ct值使用定量公式2ΔΔCt计算标志物的表达水平。得到目标RNA表达[0116]采用超速离心或Echobiotech(北京恩泽康泰)的Exosupur进行血浆外泌体分离[0118]采用实施例1中基于PCR平台miRNA的两步法检测体系，对早期肺癌病人30例和30[0121]如图2所示，对早期肺癌病人30例和30例对照样本(健康人和良性病变)的血浆外[0123]如图3所示，对早期肺癌病人30例和30例对照样本(健康人和良性病变)的血浆外早期肺癌显著相关。miR_502_3p单独诊断早期肺癌的AUC为0.756，其阴性预测值为[0125]如图4所示，对早期肺癌病人30例和30例对照样本(健康人和良性病变)的血浆外与早期肺癌显著相关。miR_450b_5p单独诊断早期肺癌的AUC为0.744，其阴性预测值为[0127]如图5所示，对早期肺癌病人30例和30例对照样本(健康人和良性病变)的血浆外与早期肺癌显著相关。miR_4746_5p单独诊断早期肺癌的AUC为0.743，其阴性预测值为[0129]如图6所示，对早期肺癌病人30例和30例对照样本(健康人和良性病变)的血浆外五个标志物组合进行训练，得到的五标志物组合AUC在85以上的组合如下表8所示。其中mmiR_106b_3P+miR_10a_5p+miR_125a_5p+miR_3615+miR_450b_5p组合性能最优，AUC为