奶山羊胚胎移植技术规程

2奶山羊胚胎移植技术规程本文件规定了奶山羊胚胎移植技术中供体羊与受体羊的选择与饲养管理、供体母羊超数排卵和人工授精、供体母羊胚胎采集、受体母羊胚胎移植和档案记录等技术要求和方法。本文件适用于奶山羊养殖场（户）的胚胎移植。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB20557山羊冷冻精液NY/T1571羊胚胎移植技术规程NY/T2835奶山羊饲养管理技术规范DB15/T3332.1奶山羊繁育技术规范第1部分：体况评分3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4供体羊与受体羊的选择与饲养管理4.1供体羊与受体羊体况评分按照DB15/T3332.1的规定执行。4.2供体母羊的选择4.2.1品种优良，生产性能良好，系谱清晰完整，无遗传缺陷。4.2.2体况评分在2.5～3.0之间，繁殖机能正常，无遗传性疾病、传染性疾病及生殖系统疾病。4.2.3经产2～4胎，产后90d以上，有2个以上正常发情周期。4.3种公羊的选择按照GB20557的规定执行。4.4受体母羊的选择4.4.1繁殖机能良好，发情周期正常，体况评分在2.5～3.0之间，无繁殖机能疾病及传染性疾病，营养状况良好。4.4.22～4胎经产奶山羊，产后90d以上，发情正常。34.5供体羊与受体羊的饲养管理按照NY/T2835的规定执行。5供体母羊超数排卵和人工授精5.1超数排卵在供体母羊发情期任意一天放入CIDR阴道栓，记为第0d；第11d开始超数排卵处理，按递减法分4天8次肌肉注射FSH，每次注射间隔12h；第12d上午注射FSH的同时，肌肉注射PGF2α；第14d最后一次注射FSH时撤除阴道栓。（具体方案见附录A中表A.1。）5.2发情判断发情鉴定按照NY/T1571相关要求执行。对发情的供体母羊注射GnRH促进排卵。5.3人工授精5.3.1输精时间和次数母羊一个发情周期内应进行两次输精。发情后12h进行第一次输精，间隔8h～12h第二次输精。5.3.2输精方法输精前将母羊外阴部用生理盐水冲洗干净；颈夹保定母羊，将后肢抬起，或搭于输精架上，对开膣器外部进行消毒，涂抹少量凡士林，将开膣器缓慢插入阴道内，旋转90°打开阴道与光源，伴随母羊呼吸将输精枪插入子宫颈口内0.8cm～1.5cm，注入精液0.2mL。开膣器使用后需及时清理方可给下一只使用。6供体母羊胚胎采集6.1术前准备供体母羊手术前禁食24h，可适量饮水。按照说明书剂量肌肉注标准中不得出现指定商品射赛拉嗪等兽用麻醉剂，将供体母羊麻醉后，仰卧保定于手术架上。选择乳房前腹中线部或后肢股内侧鼠蹊部为手术部位，剪去手术部位的毛并刮掉毛茬（10cm×20cm）。标准中不得出现指定商品6.2胚胎采集6.2.1常规消毒后，用手术刀在供体母羊手术部位纵向切开皮肤（切口长约5cm将皮下结缔组织、肌肉组织和腹膜进行分离，在骨盆腔触摸子宫角，并将子宫、卵巢引出刀口外，观察并记录卵巢排卵情况，对供体母羊进行采胚。6.2.2用止血钳尖端在子宫角上扎一小孔，将冲卵管插入子宫腔内，用注射器充气使冲卵管的气囊封闭一侧子宫角，冲卵管的另一端连接平皿。将冲卵针从子宫角末端向子宫角方向刺入，使冲卵针、子宫角和冲卵管形成通路。用注射器吸30mL～50mL冲胚液注入冲卵针冲洗子宫角，将液体经过冲卵管回收至培养皿中。6.2.3冲胚结束后，用30℃~35℃生理盐水将子宫、卵巢洗干净，归回盆腔，便于子宫卵巢复位。术后对刀口进行消毒缝合。46.3检胚与胚胎质量鉴定将盛有胚胎回收液的培养皿立即送往胚胎操作室，在体视显微镜下，用吸胚管迅速捡出胚胎，用冲胚液冲洗2～3次，移入盛有胚胎保存液的培养皿中。根据胚龄、胚胎形态学及胚胎发育情况对胚胎进行分级鉴定，鉴定方法按照NY/T1571执行。7受体母羊胚胎移植7.1同期发情在受体母羊发情期任意一天放入CIDR阴道栓，记为第0d；第14d撤栓同时肌肉注射PMSG330IU，PGF2α0.1mg。（具体方案见附录A中表A.1。）7.2发情判断参照5.2执行。7.3胚胎移植7.3.1移植时间在受体母羊发情后的第5d进行胚胎移植。7.3.2术前准备受体母羊手术前禁食24h、禁水12h后麻醉，仰卧保定于手术架上。选择乳房前腹中线部或后肢股内侧鼠蹊部为手术部位，剪去手术部位的毛并刮掉毛茬（12cm×12cm）。用套管针在腹中线两侧分别刺入腹腔开孔，将子宫角、卵巢轻轻拉出腹腔，观察卵巢、黄体发育情况。全程注意无菌操作。7.3.3移植方法用移胚器先吸少许洁净空气，再吸少量保存液和1～2枚C级以上的胚胎，最后吸少许洁净空气。在受体母羊离宫管结合处2.0cm～2.5cm的子宫壁上扎一小孔，从此孔将移胚器针管插入子宫腔内，轻推移胚器将胚胎推入子宫。全程注意无菌操作。7.3.4术后管理受体母羊移植胚胎后按照妊娠母羊进行统一管理。注意检查手术创口愈合情况，若发生感染，应及时请兽医处理。8档案记录参照附录A中表A.2对胚胎移植情况进行记录，准确、真实、完整。记录应长期保存。5（资料性）奶山羊胚胎移植流程及情况记录表A.1奶山羊胚胎移植流程见表A.1。表A.1奶