CN115109142B 一种从犬血浆中同时分离犬纤维蛋白原和犬凝血酶原复合物的方法 （长春西诺生物科技有限公司）

一种从犬血浆中同时分离犬纤维蛋白原和本发明公开了一种从犬血浆中同时分离犬蛋白原和犬凝血酶原复合物的纯度均可达95%21.一种从犬血浆中同时分离犬纤维蛋白原和犬凝血酶原复合物的方法，其特征在于，S3、向步骤S2中的滤液加入已平衡好的DEAE_SephadexS9B、将S8B的洗脱液用10KD超滤膜超滤浓缩，使凝血因子Ⅸ、聂、X的效价不低于所述平衡液1为含有50_100mM氯化钠的10_20mM枸橼酸_枸橼酸钠缓冲液，pH为6.5_所述洗脱液1为含有400_600mM氯化钠的10_20mM枸橼酸_枸橼酸钠缓冲液，pH为6.5_32.根据权利要求1所述的从犬血浆中同时分离犬纤维蛋白原和犬凝血酶原复合物的方3.根据权利要求1所述的从犬血浆中同时分离犬纤维蛋白原和犬凝血酶原复合物的方4.根据权利要求1所述的从犬血浆中同时分离犬纤维蛋白原和犬凝血酶原复合物的方5.根据权利要求1所述的从犬血浆中同时分离犬纤维蛋白原和犬凝血酶原复合物的方6.根据权利要求1所述的从犬血浆中同时分离犬纤维蛋白原和犬凝血酶原复合物的方4一种有限的珍贵资源，我国对犬血浆的利用水平还很低，一般只提取1种产品，如CN10_20mM枸橼酸_枸橼酸钠缓冲液，pH为6.5_7.5；洗脱液1为含有400_600mM氯化钠的10_5S7A～S10A步骤操作；平衡液2为含有0.01M_0.02MTRIS、10_20mM的枸橼酸_枸橼酸钠、[0016]S9A、将S8A的混合液用30KD超滤膜超滤浓缩至蛋白质含量为53mg/ml，加入甘氨6先通过凝胶柱层析、阴离子柱层析两种方法进行粗分离和细分离，然后分别经DEAE[0037]将新鲜的冰冻血浆融化，在0℃~5℃条件下16000r/min离心，收集上清液并升温向滤液中加入已平衡好的DEAE‑Sephadex‑A50凝胶进行吸附，凝胶的加入量设定为0.25g/[0039]各凝血因子吸附率＝(吸附前各凝血因子含量‑吸附后各凝血因子含量)/吸附前7[0045]将新鲜的冰冻血浆融化，在0℃~5℃条件下16000r/min离心，收集上清液并升温8[0050]将新鲜的冰冻血浆融化，在0℃~5℃条件下16000r/min离心，收集上清液并升温[0053]第1次洗脱的回收率＝第1次洗脱液中的凝血因子含量/血浆中相应的凝血因子含9[0064]将新鲜的冰冻血浆融化，在0℃~5℃条件下16000r/min离心，收集上清液并升温[0072]将新鲜的冰冻血浆融化，在0℃~5℃条件下16000r/min离心，收集上清液并升温集流穿液与洗涤液混合均匀。将流穿液与洗涤液用30KD超滤膜超滤浓缩至蛋白质含量为A3B3C2D3组合对纤维蛋白原具有良好的溶解性，即甘氨酸的含量为12％、蔗糖含量为[0083](2)凝血酶原复合物冻干保护剂的筛选另取阴离子交换柱B1C33B3C2组合对凝血酶[0094](1)在0℃~5℃条件下16000r/min离心，收集上清液并升温至4℃~8℃,用0.22μm[0095](2)灭活：步骤(1)的上清液用S/D灭活，步骤(1)上清液中加入Tween80至1.0%,[0096](3)向步骤(2)中的上清液中加入已平衡好的DEAE_Sephadex_A50凝胶进行吸附，[0100](7)步骤(6)收集滤液分别用凝胶介质为DEAE_Sephadex_A50进行吸附。凝胶上柱[0114]S9A、将S8A的混合液