CN115494235B 一种定量检测磺酰脲类药物的方法、探针及其制备方法 （华南农业大学）

zirconiummetal-organ 本发明公开了一种定量检测磺酰脲类药物使用的探针包括结合的锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物和抗体，其中所述锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物中多巴胺壳层免疫层析方法对磺酰脲类药物的检测限为0.22_2(a)锆配位卟啉金属有机骨架的合成：称取150mg八水氧氯化锆与1.4g苯甲酸于30mLDMF中，混匀10min，制成混合液；接着称取45mg内消旋_四(4_羧基苯基)卟啉溶解于锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物的合成：称取24mg干燥的锆配位卟啉金属有机后用去离子水复溶12mL放入4℃冰箱备用。2.一种用于检测磺酰脲类药物的免疫层析用探针步骤：(1)锆配位卟啉金属有机骨架的合成：称取150mg八水氧氯化锆与1.4g苯甲酸于30mLDMF中，混匀10min，制成混合液；接着称取45mg内消旋_四(4_羧基苯基)卟啉溶解于属有机骨架分散于24mL75％乙醇溶液中，超声30min，每超声5min混匀30s，然后加入34.一种用于检测磺酰脲类药物的免疫层析用探针，其特征在45位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物中多巴胺壳层巴胺复合物和抗体，所述锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物中多巴胺壳层厚度为[0014](2)锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物的合成：称取步骤(1)的锆配位卟有机骨架@聚多巴胺复合物充分结合；接着加入牛血清白蛋白溶液，用作封闭未结合的位[0019]进一步地，在所述步骤(1)中，所述将配体液滴加进混合液中是指将配体液以[0022](b)锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物的合成：称取步骤(a)的锆配位卟6[0023]进一步地，锆配位卟啉金属有机骨架与盐酸多巴胺的质量比为2：(0.5～2.0)、[0025]进一步地，一种锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物的制备方法具体包括[0026](a)锆配位卟啉金属有机骨架的合成：称取150mg八水氧氯化锆与1.4g苯甲酸于醇分别洗涤3次，最后把固体置于真空干燥箱80℃真空干燥5h，得锆配位卟啉金属有机骨本发明以锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺为信号放大标签建立的免疫层析方法，具体醌基无需通过活化实现与抗体氨基共价偶联，无需使用EDC/NHS等交联剂简化标记过程提体的损失，使得本材料与抗体的偶联率＞90而传统的胶体金与抗体的偶联率却＜90%;7[0033]图2A_K是本发明实施例1制备锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物及探针224和PCN_224@PDA的粒径分布图；图2C、2F是通过透射电镜分别表征PCN_224和PCN_224@PDA的材料形态及透射电镜中能谱(EDS)分析材料中的元素分布；图2G通过X射线衍射测定[0034]图3a_e是本发明制备免疫层析试纸条的检测磺酰脲类药物格列吡嗪、格列美脲、[0035]图4是本发明改变Tris_HCl缓冲液pH条件下(试验1_4)制备的复合物制成探针后[0036]图5是本发明改变Tris_HCl缓冲液pH条件下(试验1_4)制备的复合物Zeta电位的[0037]图6是本发明改变盐酸多巴胺用量条件下(试验5_8)制备的复合物制成探针后进[0038]图7是本发明改变盐酸多巴胺用量条件下(试验5_8)制备的复合物Zeta电位的对[0042]如无特殊说明，本说明书中的术语的含义与本领域技术人员一般理解的含义相其组成和基本上由本文描述的必要元素和限制项以及本文描述的任一的附加的或任选的8位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物中多巴胺壳层[0050]本发明以锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺为信号方法标签建立的免疫层析方[0051]本发明实施例还提供了一种锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物的探针，其包括结合的锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物和抗体，其中所述锆配位卟啉金[0053](2)锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物的合成：称取步骤(1)的锆配位卟9控线C时会与羊抗鼠IgG抗体结合而使C线变为棕色。当反应溶液中的磺酰脲类药物浓度逐[0057]下面结合实施例对本发明进行详细的说明，实施例仅是[0059]本实施例提供了一种锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物的制备方法，具[0060](a)锆配位卟啉金属有机骨架(PCN_224[0061](b)锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物(PCN_224@PDA)的合成：称取24mg[0069]本实施例提供了一种锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物的探针的制备方法，其包括以下步骤：将1mL实施例1获得的锆配位卟啉金属有机骨架@聚多巴胺复合物于硝酸纤维素膜CN140上形成检测线T和质控线C，检测线T和质控线C两者之间的距离为37℃烘箱中干燥8h。所述的溶剂为磷酸盐缓冲溶液，由81mL0.2mol/LNa2HPO4与19mL号)分别读取T、C线信号灰度值，添加浓度为0μg/kg时对应的T线与C线的灰度值之比为B0降糖保健品(茶叶)中磺酰脲类药物的总含量(以格列吡嗪换算)，实现样品的快速定量检应用到实施例4(检测格列吡嗪)进行免疫层析测试，其中不同Tris_HCl缓冲液的pH制备得到的多巴胺壳层的厚度和复合物多分散系数(Polymerdispersityindex，PDI)以及影响应用到实施例4(检测格列吡嗪)进行免疫层析测试，其中不同盐酸多巴胺添加量制备得到[0094]表3不同锆配位卟啉金属有机骨架(PCN_224)的合成方法下复合物粒径、PDI和产[0097]水热法*具体为：称取150mg八水氧氯化锆、45mg内消旋_四(4_羧基苯基)卟啉与[0098]两种不同方式合成的PCN_224进行多巴胺包覆结合抗体形成探针，探针检测磷酸体浓度计算偶联率如图9。偶联率计算公式为(已知加入抗体浓度_未结合抗体浓度)/已知加入抗体浓度，从图中可以看出PCN_224@PDA探针的偶联率始终大于胶体金探针，归因于