ISOTS 7552-12024 分子体外诊断检查 静脉全血中循环肿瘤细胞的预检查方法规范 第1部分分离的RNA标准立项发展报告

分子体外诊断检查静脉全血中循环肿瘤细胞的预检查方法规范第1部分:分离的RNA标准立项发展报告英文标题：StandardizationDevelopmentReport:Molecularinvitrodiagnosticexaminations—Specificationsforpre-examinationprocessesforcirculatingtumourcells(CTCs)invenouswholeblood—Part1:IsolatedRNA摘要关键词：循环肿瘤细胞(CTCs)；体外诊断；预检查过程；RNA分离；ISO标准；液体活检；分子诊断；精准医疗Keywords:CirculatingTumorCells(CTCs);InVitroDiagnostics;Pre-examinationProcess;RNAIsolation;ISOStandard;LiquidBiopsy;MolecularDiagnostics;PrecisionMedicine正文1.引言：精准医疗时代下的标准化诉求随着“精准医疗”理念的深化，液体活检技术因其无创或微创、可重复性高、能实时反映肿瘤异质性等优势，迅速成为肿瘤早期筛查、疗效评估、复发监测及耐药机制研究的核心工具。循环肿瘤细胞（CirculatingTumorCells,CTCs）作为液体活检的关键靶标之一，是实体瘤原发灶或转移灶脱落至外周血中的肿瘤细胞，携带了肿瘤发生、发展及转移的完整分子信息。然而，CTCs的检测流程异常复杂，包括血液采集、稳定、CTCs富集、细胞裂解、核酸提取及下游分析等多个步骤。其中，分析前的“预检查过程”（Pre-examinationProcess）被认为是整个检测链条中变异性的最大来源。不同机构、不同操作人员甚至同一操作人员在不同时间点的非标准化操作，都可能导致CTCs数量、完整性及RNA质量的巨大差异，从而直接影响分子检测结果的准确性与可靠性。例如，采样管类型的选择、样本放置时间与温度、离心力参数、富集方法（磁珠分选、微流控芯片等）的差异，都会对最终的RNA产量和质量产生显著影响。在此背景下，制定统一的国际标准，规范CTCs在静脉全血中预检查过程的每一个环节，特别是针对RNA分离这一关键步骤，成为全球分子诊断领域的迫切需求。2.标准背景与制定必要性2.1技术发展的迫切性欧美及亚太地区的主要临床检测实验室、诊断试剂公司及医院在研究开发和临床实践中，迫切需要一个参照系。ISO/TS7552系列标准正是应此需求而生。ISO/TS7552-1:2024作为该系列的第一部分，专门针对“分离的RNA”这一核心产物，详细规定了从静脉全血中分离CTCsRNA的预检查过程。该技术规范（TechnicalSpecification）的发布，并非一个“建议”，而是一个经过全球专家论证、科学严谨的“标准”，旨在为全球用户提供一个可执行、可评估、可追溯的实践框架。2.3弥补国际标准空白在此之前，国际标准化组织（ISO）已经发布了关于分子体外诊断预检查过程的一般要求（ISO20184系列），以及针对DNA（ISO20185）、RNA（ISO20186）等不同类型核酸的通用预检查标准。然而，这些标准通常是面向所有样品的“通用指南”，未能充分考虑到CTCs这一特定对象的极端特殊性（稀有性、脆弱性、混合在大量血细胞中）。ISO/TS7552-1:2024首次针对CTCs这一特定靶标，在RNA预检查层面制定了专门的规范，填补了这一细分领域的国际标准空白，是标准化工作从“通用”走向“精准”的典型范例。3.标准主要内容解析ISO/TS7552-1:2024共包含若干关键条款，涵盖从样本采集到RNA纯化后质量评估的完整流程。其核心内容可归纳为以下几个方面：*样本采集与处理：标准对采集静脉全血所用的试管类型、抗凝剂（如EDTA）的推荐使用、采血后的混匀要求、以及样本在采集后至处理前的运输和存储条件（时间、温度）做出了明确规定。特别强调了减少溶血和避免RNase污染的措施，因为溶血后释放的血红蛋白及其他细胞内成分会严重抑制下游的PCR反应，而RNase则直接破坏RNA。标准建议，样本应在采集后尽快处理，例如在4小时内完成CTCs富集，或在专用保存管中于特定温度下稳定保存。*CTCs富集过程：这是整个流程中最具技术挑战性的部分。标准并未强制指定某一种特定的富集技术（如基于EpCAM抗体的免疫磁珠法、基于密度梯度离心的物理分选法、或者基于微流控芯片的尺寸筛选法），而是对富集过程的关键性能指标提出了要求。*它要求使用者需要明确描述所采用的富集方法、试剂、设备型号及其操作参数（如磁珠与样本的比例、洗涤液的种类与体积、离心时间与速度等）。*更重要的是，标准引入了“性能验证”的概念，要求实验室在采用某一CTCs富集方案时，必须对其回收率、纯度、重复性和细胞活力进行评估。例如，通过向正常血样中掺入已知数量的肿瘤细胞系（如MCF-7、HeLa等）进行“掺入实验”，来验证实际回收率是否满足预期。*RNA提取与纯化：标准对RNA提取的多个环节提出了详细规范。*细胞裂解：推荐使用含有强变性剂（如胍盐）的裂解液，以立即抑制内源性RNase，保护RNA不被降解。*提取方法：无论是基于柱式纯化（如过硅胶膜离心柱），还是基于磁珠法纯化，标准均要求公布所用试剂的品牌、型号、操作步骤（包括是否使用DNaseI处理以去除gDNA污染）。*质量控制：这是本标准的亮点之一。标准明确要求对提取后的RNA进行定量（如通过Qubit、Nanodrop或紫外分光光度法）和定性（如通过AgilentBioanalyzer或TapeStation评估完整性，即RIN值或DV200值）。并且，针对CTCs这种极度有限的起始量，标准特别推荐使用“微量核酸分析仪”进行检测，并提出了针对低浓度RNA样品的“微体积分光光度法”策略。*文档记录：强调了对整个预检查过程的全面、详细记录，包括但不限于样本信息、操作人员、环境条件、设备校准状态、所有试剂批号、每个步骤的开始与结束时间、以及最终RNA的产量与质量数据等。良好的文档记录是实现结果可追溯、可复现的基础，也是实验室质量管理体系（如ISO15189）的必然要求。4.主导制定机构：国际标准化组织（ISO）本标准的发布机构为国际标准化组织（InternationalOrganizationforStandardization,ISO）。ISO成立于1947年，是全球最大、最权威的非政府性国际标准化专门机构，总部设在瑞士日内瓦。其宗旨是在全球范围内促进标准化及其相关活动的发展，以利于国际间的商品和服务交换，并发展在知识、科学、技术和经济活动中的合作。ISO的成员包括全球160多个国家的国家标准化机构。中国作为IC的常任理事国，积极参与ISO各项标准的制定工作。ISO/TS7552-1:2024是由ISO下设的“临床实验室检测和体外诊断系统技术委员会”（ISO/TC212）制定的。ISO/TC212的秘书处由美国国家标准学会（ANSI）承担，其工作范畴涵盖了临床实验室质量、能力验证、参考测量体系及体外诊断产品的标准制定。在本标准的制定过程中，ISO/TC212的专家们，包括来自中国、美国、德国、法国、日本、韩国等国家的临床检验专家、病理学家、分子生物学家以及体外诊断产业界的代表，进行了多轮次、深入的讨论与协商。经过工作组草案（WD）、委员会草案（CD）、国际标准草案（DIS）和最终国际标准草案（FDIS）等多个阶段，最终达成共识并发布。这一严谨的流程确保了标准的技术先进性、科学严谨性和全球适用性。ISO/TS7552-1:2024的发布，标志着国际社会在攻克液体活检标准化难题方面取得了里程碑式的进步。5.结论与展望ISO/TS7552-1:2024《分子体外诊断检查静脉全血中循环肿瘤细胞的预检查方法规范第1部分:分离的RNA》标准的正式实施，无疑是全球分子诊断领域，特别是液体活检和精准医疗发展进程中的一件大事。它不仅为全球的临床实验室、研究机构提供了统一、规范、可操作的技术指导，极大提升了CTCsRNA检测结果的可重复性与可比性，更从源头上为解决肿瘤液体活检中的“分析前误差”这一关键瓶颈提供了国际共识。展望未来，该标准的价值将体现在以下几个方面：1.推动临床转化与应用：随着标准的广泛应用，基于CTCsRNA的伴随诊断（如PD-L1表达、HER2扩增、EGFR突变状态监测等）将具备更高的临床可靠性和决策价值，从而加速液体活检技术真正进入肿瘤诊疗的常规流程。3.系列标准的完善与深化：ISO/TS7552作为系列标准，本部分仅为第1部分。未来，后续部分可能会针对CTCs中分离的DNA（第2部分）、蛋白质（第3部分）以及更复杂的应用场景（如单细胞水平分析、功能学检测等）发布相应规范。系列标准的完善将进一步夯实液体活检的标准化大厦。4.赋能多层次诊疗体系：标准化的预检查过程，使得基层医疗机构也能通过规范操作将样本集中送至有能力的中心实验室进行检测，从而实现肿瘤精准诊疗的下沉和普惠。总而言