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两系水稻不育基因鉴定功能标记法2016-10-27实施2016-10-27实施I两系水稻不育基因鉴定功能标记法工25.5低温冰箱：最低温度-20℃6.2.4浓盐酸6.2.6氯化钠37操作程序7.1.3用于两系杂交水稻不育株率鉴定的送验样品，应随机抽取至少100粒种子(或100个单株)分仿/异戊醇混合液，轻缓混匀，室温静置15min;12,000g离心10min,吸取上清液至另一支1.5mL离心管中，再加入等体积异丙醇混匀，置于-20℃30min,4℃、12,4则记录为0。带型记录判定结果不含有pms3和tms5的水稻tms5型杂交水稻tms5纯合型水稻根据两系不育基因功能标记检测结果，两系杂交水稻具有父母本互补带型454/369或(和)172/146,而两系不育株仅具有母本带型0/369或(和)0/146,判定两系杂交水稻中混入的不育株。5Nr——供检种子粒数(幼苗数、株数);No——具有0/369(pms3-M)或0/146(tms5-M)带型的种子粒数(幼苗数、株数)。6功能标记名称基因大小内切酶稻标准样品形成454bp、369bp和85bp的3个片段。样品会出现172bp和146bp的2个片段。78(资料性附录)原浓度终浓度dNTPs(每种)下游引物一原浓度终浓度dNTPs(每种)下游引物一一955℃~60℃,加入0.01%凝胶体积的溴化乙锭，混匀，倒入已封好的胶槽中，插上样品梳。pms3-M标记电泳约40min,tms5-M标记电泳约1h～1.5h,可以分出多态。[1]DingJ,LuaQ,OuyangY,MaoH,ZhangP,YaononcodingRNAregulatesphotoperiod-sensitivemalesterility,anessentialcomponentofhybridrice[J].PNAS,2012,10MJ,QinP,HuXC,SongCL,ShiJF,SongXW,NiED,WuXJ,DengQY,LiuZL,ChenMS,L

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