CN116179571B 通过改造林可链霉菌slcg-2185基因提高林可霉素产量的方法及应用 （安徽大学）

页.通过改造林可链霉菌SLCG_2185基因提高林本发明提供了一种通过改造林可链霉菌SLCG_2185基因提高林可霉素产量的方法，通过基因工程途径使林可链霉菌中过表达FadR家族转录调控基因SLCG_2185，获得林可霉素高产工程菌株，用所得菌株发酵生产林可霉素；所述SLCG_2185基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。本发明还提供了一种通过改造林可链霉菌SLCG_2185基因提高林可霉素产量的方法的应SLCG_2185，通过基因工程途径过表达林可链霉菌染色体上SLCG_2185基因拷贝，能够获得林可21.一种通过改造林可链霉菌SLCG_2185基因提高林可霉素产量的方法，其特征在于，通过基因工程途径使林可链霉菌LA219X中过表达FadR家族转录调控基因SLCG_2185，获得2.根据权利要求1所述的通过改造林可链霉菌SLCG_2185基因提高林可霉素产量的方3.根据权利要求1所述的通过改造林可链霉菌SLCG_2185基因提高林可霉素产量的方4.一种SLCG_2185基因改造型林可链霉菌的应用，其特征在于，一所述方法中构建得到的SLCG_2185基因改造型林可链霉菌用于林3通过改造林可链霉菌SLCG_2185基因[0001]本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种通过改造林可链霉菌SLCG_2185基林霉素具有极大的药用价值，是少数几个在临床上用于治疗革兰阴性厌氧菌的药物之一。中FadR家族调控因子WhiH可以调控气生菌丝的分离和孢子形成；SCO1678可以调控放线紫红素的生物合成。这暗示着FadR家族可能对其他链霉菌抗生素的生物合成也有重要作用，4[0006]本发明所要解决的技术问题在于提供一种通过改造林可链霉菌SLCG_2185基因提[0008]一种通过改造林可链霉菌SLCG_2185基因提高林可霉素产量的方法，通过基因工程途径使林可链霉菌中过表达FadR家族转录调控基因SLCG_2185，获得林可霉素高产工程[0009]作为本发明的优选方式之一，所述SLCG_2185基因编码的氨基酸序列如SEQID[0010]作为本发明的优选方式之一，所述SLCG_2185基因产物正向调控林可霉素生物合[0011]一种上述通过改造林可链霉菌SLCG_2185基因提高林可霉素产量的方法的应用：在林可链霉菌工业高产菌株LA219X中过表达FadR家族调控基因SLCG_2185，获得高产突变[0013]本发明研究中筛选到了林可霉素生物合成正调控子SLCG_2185，通过基因工程途[0014]林可链霉菌LCGL中过表达SLCG_2185基因时林可霉素产量提高了14.6而ΔSLCG_2185缺失突变株林可霉素产量降低20.2表明SLCG_2185是一个参与林可霉素生物表达SLCG_2185基因，使林可霉素产量提高了17.8说明过表达SLCG_2185基因提高林可5[0022]图8是SLCG_2185基因对菌株形态分化的影响及ΔSLCGL_2185突变株生物量的测[0024]图10是林可霉素工业高产菌株LA219X、LA219X/pIB139_2185中林可霉素产量分株_林可链霉菌LCGL为林可链霉菌LC_G(GenBank:CP022744.1)基础上改进获得的菌株，具[0027]下述实施例中使用到的大肠杆菌在37℃的液体LB培养基或在添加1.25％琼脂的在含有1.8％琼脂的改良高氏一号(MGM物的合成和DNA测序由生工生物工程(上海)股份有限公司6789[0040]根据LCGL基因组信息可知，SLCG__2185基因长度为942bp，蛋白单体大小为HindIII酶切上下游同源臂，将酶切后片段进行胶回收并用紫外分光光度计进行DNA的定上培养20h左右长出单克隆。最后挑单克隆至液体培养基进行扩大培养并提质粒进行双酶[0044]将获得的pKC1139_Δ2185质粒经PEG3350介导转化至LCGL的原生质体中，利用同约5000_8000ng与LCGL原生质体混合后加入PEG3350，将混合物涂布在R5平板30℃培养20h盖培养基后培养至长出转化子。挑取转化子涂布于带Apr抗性的工业平板上，待其长出抗[0051]将pIB139_2185质粒经PEG3350介导转化至LA219X的原生质体中，构建LA219X/℃摇床培养48小时后，取等量的LCGL和ΔSLCGL_2185新鲜菌液于YMG培养基中，30℃,[0060]收集24h的ΔSLCG_2185和野生菌株LCGL菌液，采用全式金RNA提取试剂盒获得所[0064]ΔSLCGL_2185在发酵培养基中发酵168h后，经HPLC检测林可霉素产量，发现Δ[0066]为了确定SLCG_2185基因是否调控菌体的孢子形成，将突变株ΔSLCGL_2185和对[0068]为了进一步验证突变体ΔSLCGL_2185中林可霉素产量的下降是由于SLCGL_2185LCGL下降20.2回复菌株ΔSLCGL_2185/pIB139_2185中林可霉素的产量恢复到LCGL中林高了17.8％(图10)，这说明高产菌株LA219中SLCG_2185基因同样参与调节林可霉素的产