CN117343978B 一种水牛初乳乳源活性肽的制备方法及其应用 （广西壮族自治区水牛研究所）

一种水牛初乳乳源活性肽的制备方法及其及一种水牛初乳乳源活性肽的制备方法及其应2所述肠溶包衣由乙基纤维素水分散体、滑石粉、柠檬酸三乙酯和聚乙二醇以10:2:1:3[0002]乳源活性肽是来源于乳蛋白的由2_50个氨基酸序列组成并且具有不同生理功能乳动物的乳相比，蛋白含量高达4.3水牛初乳甚至达到10乳清蛋白是乳品工业的主[0010](2)将步骤(1)的得到的酶解液水牛初乳乳清蛋白溶液调节pH值后，预热8～10分4[0017]本发明还包括应用所述制备方法制备的水牛初乳乳源活性肽在制备提高细胞增[0028]图2为pH、酶添加量交互作用下乳源活性肽ABTS自由基清除率的影响的响应曲面[0029]图3为时间、酶添加量交互作用下乳源活性肽ABTS自由基清除率的影响的响应曲[0032]图6为时间、酶添加量交互作用下乳源活性肽ABTS自由基清除率的影响的等高线5[0042]图16为模拟胃肠消化不同酶添加量的酶解产物对巨噬细胞RAW264.7的细胞增殖[0043]图17为模拟胃肠消化不同酶添加量的酶解产物对巨噬细胞RAW264.7的细胞吞噬[0044]图18为模拟胃肠消化不同酶添加量的酶解产物对巨噬细胞RAW264.7的NO释放量[0054](1)调节水牛初乳乳清蛋白溶液pH值，(40±2)℃预热8～10分钟后加入中性蛋白[0059]在本发明中，中性蛋白酶可购于上海麦克林生化科技股份有限公司，酶活力为6[0069]本实施例中，中性蛋白酶可购于上海麦克林生化科技股份有限公司，酶活力为孔板中加入50ul酶解基料稀释液和200ulABTS工作液，以水代替酶解基料稀释液当作空白%;63.6682.9484.0070.7686.167896299U/g，此条件下预测ABTS自由基的清除率为90.55实际ABTS自由基清除率为每孔加入100ul培养基和10μlCCK_8Solution；加上3个空白组(100ul培养基)，也加10μlAA100%;[0121]经中性蛋白酶在响应面优化中得到的最佳酶解条件下酶解后得到的水牛初乳乳源活性肽处理巨噬细胞RAW264.7经过24h后的增殖活性如图3所示，图中BWD为水牛[0122]经中性蛋白酶在响应面优化中得到的最佳酶解条件下酶解后得到的水牛初乳乳源活性肽处理巨噬细胞RAW264.7经过24h后的吞噬活性如图4所示，图中BWD为水牛初乳乳[0130]按照表配制人工模拟胃液(SimulatedGastricFluid，SGF)和人工模拟肠液[0134]经中性蛋白酶在响应面优化中得到的最佳酶解条件下酶解后得到的水牛初乳乳源活性肽及其模拟胃肠消化产物处理巨噬细胞RAW264.7经过24h后的增殖活性如图9所示，[0135]经中性蛋白酶在响应面优化中得到的最佳酶解条件下酶解后得到的水牛初乳乳源活性肽及其模拟胃肠消化产物处理巨噬细胞RAW264.7经过24h后的吞噬活性如10所示，[0136]经中性蛋白酶在响应面优化中得到的最佳酶解条件下酶解后得到的水牛初乳乳源活性肽及其模拟胃肠消化产物处理巨噬细胞RAW264.7经过24h后的NO释放量如图11所[0140]经中性蛋白酶在响应面优化中得到的最佳酶解条件下酶解后得到的水牛初乳乳源活性肽及其模拟胃肠消化产物的ABTS自由基清除率如图12所示，图中BWD为水牛初乳乳[0141]经中性蛋白酶在响应面优化中得到的最佳酶解条件下酶解后得到的水牛初乳乳[0142]以ABTS自由基清除率和还原能力测定来评估水牛初乳乳源活性肽的抗氧化调节产生的抗氧化肽经胃蛋白酶处理后会分解而失去免疫活性，但是再经模拟肠液消化后，[0144]根据实施例8的实验我们得出：水牛初乳乳源活性肽在胃液中ABTS自由基清除率照组1和对照组2，由此说明，肠溶包衣处理后能显著提升水牛初乳乳源活性肽的稳定性，胞吞噬率的影响结果如图15所示。在不同的酶添加量条件下，用酶解产物处理巨噬细胞[0156]酶解后得到的产物及其模拟胃肠消化产物处理巨噬细胞RAW264.7经过24h后的吞[0157]酶解后得到的产物及其模拟胃肠消化产物处理巨噬细胞RAW264.7经过24h后的NO[0160]酶解后得到的水牛初乳乳源活性肽及其模拟胃肠消化产物的ABTS自由基清除率[0161]酶解后得到的水牛初乳乳源活性肽及其模拟胃肠消化产物还[0162]以ABTS自由基清除率和还原能力测定来评估水牛初乳乳源活性肽的抗氧化作