CN117363761B 基于mira-lfd快速鉴定柑橘黄龙病菌的引物探针组合及检测方法 （华中农业大学）_第1页
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RecombinasePolymeraseAmplifiCoupledwithLateralFlowAss基于MIRA-LFD快速鉴定柑橘黄龙病菌的引本发明供了基于MIRA_LFD快速鉴定柑橘黄结合LFD技术提供了一种柑橘黄龙病菌的快速检23基于MIRA_LFD快速鉴定柑橘黄龙病菌的引物[0002]柑橘黄龙病(Huanglongbing,HLB)是世界范围内柑橘生产上最具毁灭性的病害，康发展。柑橘黄龙病是一种由韧皮部杆菌(CandidatusLiberibacter)引起的细菌性病害，[0005]针对现有技术中的问题，本发明利用MIRA(Multienzymeisothermalrapid[0007]本发明第一方面提供了一种基于MIRA_LFD快速鉴定柑橘黄龙病菌的引物探针组[0012]5’_6_FAM_CGCACCATGCTCCATGAAGCTACCCTCCTCGA(THF)ATCGCCTATGCACATG_C3_[0014]5’6_FAM_ATGCTCCCTCATGTGAACAATATATGCAGT(THF)TCATCGCCAATCGTC_C3_4端则用阻断聚合酶扩增的C3_Spacer试纸条含有检测线和质控线，所述检测线上含有生物素配体，所述质控线上含有抗FAM抗20μL进行充分研磨；研磨后所得汁液用TEBuffer进行稀释后，即可作为模板用于MIRA反5异性引物和荧光素(FAM)标记的特异性探针与模版匹配后扩增出带有双标记的扩增产物，64对引物对同时扩增3个不同的黄龙病阳性模板，结果只有RPnrdB_F1/RPnrdB_R1能稳定扩[0057]在获得了具有良好扩增效果的RPnrdB_F1/RPnrdB_R1引物的基础上，为了下一步试纸条试验的顺利开展，根据nrdB基因序列特点设计并合成包含3个修饰位点的特异性荧[0061]5’_6_FAM_CGCACCATGCTCCATGAAGCTACCCTCCTCGA(THF)ATCGCCTATGCACATG_C3_[0063]5’6_FAM_ATGCTCCCTCATGTGAACAATATATGCAGT(THF)TCATCGCCAA[0066]基于实施例1提供的引物探针组合，本例构建了基于MIRA_LFD快速鉴定柑橘黄龙7[0082]将含有黄龙病菌nrdB基因的阳性质粒起始浓度调整为10ng/μL，再以10倍方式进[0085]本例随机对来自我国不同柑橘产区表现症状各异的疑似黄龙病样品(50个)进行8[0086]经检测分析，运用MIRA_LFD技术对50个疑似黄龙病样品的检测阳性率为100%,区分柑橘黄龙病菌与其他柑橘常见病原。且灵敏度

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