CN117660484B 敲除毛白杨d53基因在提高木材产量中的应用及其方法 （西南大学）

要.敲除毛白杨D53基因在提高木材产量中的应本发明公开了敲除毛白杨D53基因在提高木材产量中的应用及其方法，通过将D53敲除植物层数也显著增多；该结果说明缺失D53后杨树茎22.根据权利要求1所述敲除毛白杨D53述敲除毛白杨D53基因的方法是使用CRISPR/C3.根据权利要求1所述敲除毛白杨D53基因在4.提高毛白杨木材产量的方法，其特征在于：具体方法是将D53的CRIS5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述转化毛白杨的方法是采用农杆菌介3[0001]本发明涉及生物技术领域，具体涉及敲除毛白杨D53基因在提高木材产量中的应对人类生产生活具有极其重要的经济价值(Plomionetal.,2001)。随着我国经济的高速性启动子驱动的MAX2可完全挽救max2功能缺失突变体造成的次生生长减少(Agustiet4的核心组分D53被认为是解析其调控植物生长发育不同过程中，与其他激素信号交叉整合[0005]有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种敲除毛白杨D53基因在提高木材产量[0009]本发明优选的，所述敲除毛白杨D53基因是将D53的CRISPR/Cas9基因编辑载体转[0014]本发明的有益效果在于：本发明提供了敲除毛白杨D53基因在提高木材产量中的检测，以野生型株系和d53转基因株系的DNA为模板，进行PCR检测；其中M代表Marker56TTCAGAggtctcTctcgACTAGTGGAATCGGCAGCAAAGG-3’(SEQID[0053]引物BL-R：5’-AGCGTGggtctcGaccgACGCGTCCATCCACTCCAAGCTC-3’(SEQID7制性内切酶及T4DNA连接酶，通过变温循环仪(或PCR仪)将含有PtoD53靶点的gDNA表达盒连接至pYL-CRISPR/Cas9-DN表达载体(参见Ma,X.L.etal.Aforconvenient,high-efficiencymultiplexgenomeeditinginmonocotanddicotplants.MolPlant24,pii:S1674-2052(15)00204-X(2015).)得到重组载体，命名为℃,200rpm/min振荡培养过夜。采用BioFlux公司的碱裂解法质粒小提试剂盒进行质粒提[0065]将质粒送往公司测序，序列测定比对无误后即完成载体构建，构建成功后的8[0069]3)于超净台中在感受态细胞中加入800μLYEP液体培养基，混匀后在28℃摇床以[0071]5)将工程菌命名为(GV3101)PtoD53-Cas9，菌液中加入已灭菌甘油至终浓度为[0087]1)用镊子将叶盘夹入农杆菌重悬液中，轻轻晃动玻璃瓶9整个过程于暗环境中25℃培养。[0106]7)加入25μL无菌水溶解沉淀，获得野生型和pYL-PtoD53转基因毛白杨叶片DNA粗[0110]通过将D53-Cas9敲除植物载体导入毛白杨中，获得了多个d53阳性敲除转基因植所示。并将扩增获得的片段连接至pMD19载体后进行测序，测序鉴定敲除结果如图2中B所[0123]本研究又进行了对毛白杨d53敲除植株及野生型进行了茎横切片及染色观察，结