NYT 4746-2025 饲料中杆菌肽的测定 液相色谱-串联质谱法标准立项发展报告

饲料中杆菌肽的测定液相色谱-串联质谱法标准立项发展报告StandardizationDevelopmentReport:DeterminationofBacitracininFeedstuffs—LiquidChromatography-TandemMassSpectrometryMethod摘要饲料安全是食品安全的重要基础和源头保障，兽药残留问题直接关系人民群众身体健康和畜牧业的可持续发展。杆菌肽作为广泛使用的多肽类抗生素饲料添加剂，在促进动物生长和疾病防治中发挥着重要作用，但其不合理使用导致的药物残留问题日益受到国内外关注。我国现行饲料中杆菌肽检测方法在灵敏度、特异性和检测效率等方面已难以满足新形势下饲料质量安全监管的迫切需要。本报告围绕行业标准NY/T4746-2025《饲料中杆菌肽的测定液相色谱-串联质谱法》的制定背景、技术内容、编制原则和预期效益进行全面阐述，系统分析了国内外杆菌肽检测技术研究进展与标准现状，详细论证了采用液相色谱-串联质谱技术测定饲料中杆菌肽的显著技术优势。该标准通过优化样品前处理方法和色谱质谱条件，建立了高效、灵敏、准确的杆菌肽定量分析方法，对于完善我国饲料质量安全检测标准体系、提升饲料兽药残留监管能力、保障畜禽产品质量安全和促进饲料行业健康发展具有重要的现实意义和深远的战略价值。关键词：饲料安全；杆菌肽；液相色谱-串联质谱法；兽药残留；标准制定；质量安全Keywords:FeedSafety;Bacitracin;LiquidChromatography-TandemMassSpectrometry;VeterinaryDrugResidue;StandardDevelopment;QualitySafety一、引言1.1研究背景饲料工业是联结种植业和养殖业的中轴产业，是现代农业的重要组成部分。近年来，随着我国畜牧养殖业规模化、集约化程度的不断提高，饲料添加剂的使用日益普遍。杆菌肽（Bacitracin）作为一类由枯草芽孢杆菌（*Bacillussubtilis*）产生的新型多肽类抗生素，对革兰氏阳性菌具有强大的抑制作用，其抗菌谱与青霉素相似，广泛用于饲料添加剂以促进畜禽生长、改善饲料转化率和预防疾病。杆菌肽的化学结构由多种环状多肽组成，目前已分离鉴定出A、B1、B2、C、D、E、F等多种组分，其中杆菌肽A（BacitracinA）是其主要活性成分和生物学效价主要贡献者。然而，杆菌肽在生产和使用过程中不可避免地会产生药物残留，对动物源食品消费者构成潜在健康风险。研究表明，长期摄入含杆菌肽残留的动物源性食品可能导致肠道菌群失调、过敏反应以及细菌耐药性增强等问题。世界卫生组织（WHO）已将杆菌肽列为兽用抗生素中“极重要”类抗菌药物，其饲料添加使用需严格规范。欧盟于1999年起逐步禁止杆菌肽作为饲料促生长剂使用，美国食品药物管理局（FDA）也对杆菌肽的使用制定了严格的残留限量标准。1.2标准立项的必要性我国农业农村部公告第194号规定，自2020年1月1日起，退出除中药外的所有促生长类药物饲料添加剂品种，但杆菌肽作为治疗性药物仍可在兽医指导下使用。同时，农业农村部公告第250号明确了食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单，杆菌肽并未被完全禁用，其合理使用和科学监管尤为重要。在标准层面，我国现行饲料中杆菌肽的检测标准为GB/T21106-2007《动物源性饲料中杆菌肽链的测定高效液相色谱法》，该标准制定时间较早，采用高效液相色谱-紫外检测法，样品前处理流程复杂、净化效果不佳、检测灵敏度有限，且仅能定量总杆菌肽含量，无法精确识别和定量主要活性组分杆菌肽A。与此同时，国际食品法典委员会（CAC）及主要发达国家已普遍采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）进行兽药多残留分析，该方法具有高选择性、高灵敏度和强抗干扰能力等显著优势。因此，为适应我国饲料质量安全监管的实际需求，提升杆菌肽检测的技术能力和标准化水平，制定基于液相色谱-串联质谱法的新标准势在必行。农业农村部畜牧业司和全国饲料工业标准化技术委员会根据《中华人民共和国标准化法》和《饲料和饲料添加剂管理条例》等法律法规要求，批准立项制定本项行业标准。二、标准编制概况2.1标准基本信息本项标准编号为NY/T4746-2025，标准名称为《饲料中杆菌肽的测定液相色谱-串联质谱法》，英文名称为“DeterminationofBacitracininFeedstuffs—LiquidChromatography-TandemMassSpectrometryMethod”，由行业标准-农业（NY/T）归口管理，分类号为饲料类。该标准于2025年4月27日发布，自2025年8月1日起正式实施，目前标准状态为现行有效。标准格式为中文简体文本，版本类型为正式发布版本。2.2编制原则本标准的编制遵循以下基本原则：第一，科学性原则。标准的技术指标和方法参数均建立在充分的实验验证和国内外文献调研基础上，确保方法的科学性、可靠性和再现性。第二，适用性原则。充分考虑我国饲料行业的生产实际和检验检测机构的技术能力，方法设计兼顾先进性、实用性和经济性，确保标准能够在各级检测实验室推广应用。第三，协调性原则。标准的技术内容与现行有效的法律法规、强制性标准和技术规范保持协调一致，避免冲突和重复，注重与饲料中其他兽药残留检测标准的方法兼容性。第四，国际化原则。积极参考和借鉴国际食品法典委员会相关标准和国外先进标准的技术思路和方法框架，对标国际前沿技术发展水平，提升我国标准的国际对接程度。2.3编制过程本标准的编制过程分为预研启动、方法研究、实验验证、征求意见、技术审查和报批发布六个阶段。在预研启动阶段，起草组广泛调研了国内外杆菌肽检测技术研究文献和相关标准法规，梳理了技术路线和关键创新点。在方法研究阶段，通过对色谱分离条件、质谱检测参数、样品提取净化条件的系统优化，建立了完善的检测方法体系。随后组织多家实验室开展协同验证实验，对方法检出限、定量限、回收率、精密度等关键技术参数进行充分验证。征求意见阶段广泛征集了饲料检测机构、科研院所、饲料生产企业和行业管理部门的意见建议。经全国饲料工业标准化技术委员会审查通过后，最终形成的标准文本于2025年4月正式发布。三、标准主要技术内容3.1适用范围本标准规定了饲料中杆菌肽（以杆菌肽A计）含量测定的液相色谱-串联质谱法。标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预混合饲料中杆菌肽的定性和定量测定。方法的定量限为50μg/kg，适用于饲料中杆菌肽残留的日常监测和监督抽查。3.2方法原理本标准采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定饲料中杆菌肽的含量。其核心原理为：试样中的杆菌肽经酸性提取液提取后，经固相萃取柱净化，以高效液相色谱系统进行分离，采用电喷雾离子源（ESI）正离子模式电离，通过多反应监测（MRM）模式进行质谱检测。方法的定量依据为杆菌肽A的特征母离子-子离子对转换，通过外标法定量。同时，根据欧盟2002/657/EC决议关于质谱检测确认的技术要求，采用离子对比例进行阳性确证，确保检测结果的准确性和可靠性。3.3样品前处理技术样品前处理是饲料中兽药残留分析的关键环节，直接决定方法的回收率、净化效果和检测效率。由于饲料基质十分复杂，含有大量的蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素、矿物质及各种饲料添加剂，目标分析物的有效提取和基质干扰物的高效去除是前处理方法优化的核心难点。本标准在前处理技术上进行了系统优化：首先采用含0.1%甲酸的乙腈-水溶液作为提取溶剂，在酸性条件下实现杆菌肽与饲料基质的有效分离；其次通过高速均质和离心处理促进目标物向提取液中转移；随后采用混合阳离子交换固相萃取柱进行净化，有效去除饲料中的脂类、蛋白质和色素等基质干扰物；最终经氮吹浓缩和定容后供仪器测定。方法优化兼顾了提取回收率与净化效果之间的平衡，经实验验证，各类型饲料基质中杆菌肽的提取回收率均可达到85.0%~110.0%之间。3.4色谱-质谱条件在色谱分离方面，本标准选用C18反相色谱柱（如ACQUITYUPLCBEHC18，2.1mm×100mm，1.7μm或等效色谱柱），以含0.1%甲酸的水溶液和含0.1%甲酸的乙腈溶液作为流动相进行梯度洗脱。梯度洗脱程序经过系统优化，确保杆菌肽A与其他组分及基质干扰物实现良好分离。柱温设定为40℃，流速为0.3mL/min，进样体积为5μL。在质谱检测方面，采用电喷雾离子源正离子模式，毛细管电压为3.0kV，离子源温度为150℃，脱溶剂气温度为500℃，脱溶剂气流速为800L/h。采用多反应监测模式，监测杆菌肽A的两个特征离子对：m/z712.4→669.4作为定量离子对，m/z712.4→199.1作为定性离子对。通过离子对丰度比进行阳性确证，满足残留检测的法规要求。方法的检出限约为10μg/kg，定量限为50μg/kg。3.5方法性能指标经系统的实验室内验证和实验室间协同验证，本标准规定的检测方法性能指标为：在50~2000μg/L的浓度范围内，方法的线性关系良好，线性相关系数（r）不低于0.995；定量限为50μg/kg；添加回收实验结果显示，在50、100、500μg/kg三个添加浓度水平下，平均回收率范围为85.0%~110.0%；日内相对标准偏差（RSD）不高于10%，日间相对标准偏差不高于15%。方法各项技术参数满足GB/T27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》对残留分析方法确认的技术要求。四、国内外相关标准和技术进展对比4.1国内标准现状我国现行饲料中杆菌肽检测标准主要为GB/T21106-2007《动物源性饲料中杆菌肽链的测定高效液相色谱法》。该标准采用高效液相色谱-紫外检测法，检测波长设定为240nm，定量限为500μg/kg。然而，该标准在实际应用中存在明显的技术局限：一是紫外检测的选择性有限，饲料基质中存在的多种共存干扰物可能影响目标峰的分辨和准确定量；二是方法灵敏度较低，难以满足日益严格的残留限量监管要求；三是样品前处理采用液液萃取结合氮吹浓缩的方法，操作流程繁琐、回收率不稳、方法的精密度和重现性不够理想。此外，现行有效的有关杆菌肽残留检测的农业行业标准还有NY/T3806-2020《畜产品中杆菌肽的测定液相色谱-串联质谱法》，但该标准适用于畜产品基质（肌肉、肝脏、肾脏、蛋、奶等），并不适用于饲料基质。因此，制定适用于饲料基质的杆菌肽LC-MS/MS检测标准具有填补标准空白的积极意义。4.2国际标准和技术动态在国际层面，国际食品法典委员会（CAC）尚未制定饲料中杆菌肽检测的专门方法标准，但CAC/GL71-2009《兽药残留分析的方法性能评价指南》为兽药残留分析方法提供了技术框架和性能要求参考。欧盟参考实验室（EURLs）在兽药残留检测方面推荐采用LC-MS/MS作为确证方法，并已在多种动物源性食品基质中建立了杆菌肽及其降解产物的多残留分析方法。美国FDA的《饲料添加剂分析手册》中也推荐采用高效液相色谱法或液相色谱-串联质谱法进行饲料中杆菌肽的检测。从技术发展动态来看，液相色谱-串联质谱技术近年来在兽药残留分析领域取得了显著进展。高分辨质谱（如Q-TOF、Orbitrap）的应用使得非靶向筛查和未知物鉴定成为可能，为饲料中药物残留的风险评估和监测提供了前沿技术手段。超高效液相色谱（UHPLC）技术的普及大幅缩短了分析时间、提高了分离效率。QuEChERS方法等快速前处理技术的应用简化了操作流程、提高了分析通量。全自动固相萃取、在线净化等自动化技术的引入进一步提高了检测效率和结果的稳定性。4.3本标准的技术突破与先进性相较于现行标准，本标准实现了以下技术突破和提升。首先，方法灵敏度大幅提升：LC-MS/MS方法使定量限从原方法的500μg/kg降至50μg/kg，检测灵敏度提高了10倍，能够更好地满足低残留水平下的监管检测需求。其次，检测特异性实质性改善：采用MRM模式结合离子对比例确证，有效消除了基质干扰，显著降低了假阳性和假阴性风险。第三，适用范围扩展：本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预混合饲料等多种饲料类型，覆盖面更广，适用性更强。第四，检测效率显著提高：优化的前处理流程和色谱条件缩短了样品分析周期，单批次样品检测效率大幅提升。第五，与国际标准接轨：本标准的方法原理和技术路线与国际食品法典委员会和美国FDA推荐的方法框架保持一致，实现了与国际先进标准的技术对接。五、标准实施的意义和预期效益5.1提升饲料质量安全监管能力本标准的发布实施为各级饲料检验检测机构和饲料企业提供了科学、统一、规范的杆菌肽检测技术依据，有效填补了我国饲料中杆菌肽LC-MS/MS检测方法标准的空白。标准的实施有助于提升我国饲料药物残留检测的整体技术水平，增强对饲料中杆菌肽添加使用的监测和预警能力，为畜牧养殖环节的用药安全监管提供有力的技术支撑。5.2保障动物性食品安全和消费者健康通过本标准的实施，能够更加准确、高效地监测饲料中杆菌肽的添加剂量和使用情况，从源头上控制杆菌肽通过饲料进入动物体内并在动物源性食品中产生药物残留的风险。这对于保障肉、蛋、奶等动物性食品的质量安全、保护消费者身体健康和合法权益具有直接的现实意义。5.3促进饲料行业健康发展和技术升级标准的实施促进了公平有序的市场竞争环境。规范的检测方法和明确的技术要求，有利于引导饲料生产企业科学、合规地使用杆菌肽产品，淘汰不符合质量安全要求的产品和生产工艺，推动饲料行业向绿色化、优质化方向发展。同时，也为优质饲料产品的认证和市场推广提供可靠的技术依据。5.4促进国际贸易和技术交流在当前国际贸易中，饲料和动物源性食品的药物残留指标是技术性贸易壁垒的重要构成因素。本标准的制修订对标国际先进标准，采用国际通行的LC-MS/MS技术路线，有利于我国饲料检测技术与国际接轨，促进检测结果在国际贸易中的互认，减少因检测方法差异导致的贸易争端，为饲料产品出口创造有利条件。六、主要起草单位简介本项标准的主要起草单位为中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所（以下简称“质标所”）。中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所成立于2003年，是国家级农产品质量安全专业研究与检测机构，加挂“农业农村部农产品质量标准研究中心”和“农业农村部农产品质量安全风险评估实验室（北京）”的牌子。质标所是国家饲料质量监督检验中心（北京）的依托单位之一，长期承担饲料和饲料添加剂质量安全监测、风险评估、标准制修订和检测技术研究等工作任务。质标所拥有一支高水平的科研人才队伍，现有在职科研人员中具有博士学位者占比超过70%，形成了以农产品质量安全政策法规、风险评估、检测技术、标准物质研制和标准制修订为主要方向的多学科交叉研究团队。研究所建有标准化验室，配备液相色谱-串联质谱仪、气相色谱-串联质谱仪、电感耦合等离子体质谱仪、高分辨质谱仪、氨基酸分析仪等大型精密仪器设备，总价值逾亿元。在标准制修订方面，质标所近年来牵头或参与制修订国家标准和行业标准100余项，涵盖饲料质量安全、农药残留、兽药残留、重金属污染、生物毒素等多个领域。研究所主持制修订的多项标准获得省部级