NYT 4749-2025 饲料中7种大环内酯类药物的测定 液相色谱-串联质谱法标准立项发展报告

饲料中7种大环内酯类药物的测定液相色谱-串联质谱法标准立项发展报告StandardizationDevelopmentReport:DeterminationofSevenMacrolidesinFeed—HighPerformanceLiquidChromatography-TandemMassSpectrometry摘要大环内酯类药物作为畜禽养殖中广泛使用的抗菌药物，其在饲料中的违规添加和残留问题直接影响动物源性食品安全和公共卫生安全。现行饲料中药物检测标准存在检测种类少、方法灵敏度不足、覆盖基质有限等局限，难以满足日益严格的监管需求。本报告针对《饲料中7种大环内酯类药物的测定液相色谱-串联质谱法》（NY/T4749-2025）标准的立项、研制过程及技术内容进行系统阐述。该标准由中华人民共和国农业农村部发布，于2025年4月27日发布，2025年8月1日正式实施，规定了饲料中泰乐菌素、替米考星、红霉素、螺旋霉素、竹桃霉素、吉他霉素、林可霉素等7种大环内酯类药物的液相色谱-串联质谱测定方法。标准采用固相萃取前处理技术结合液相色谱-串联质谱检测平台，实现了饲料基质中多种大环内酯类药物同步提取、净化和高灵敏检测，方法定量限达到5μg/kg，回收率为76.5%～98.2%，相对标准偏差小于12%。该标准的发布填补了国内饲料中大环内酯类药物多残留同步检测的标准空白，为饲料质量安全监管、畜禽产品源头控制和国际贸易技术壁垒应对提供了有力的技术支撑。关键词：饲料；大环内酯类药物；液相色谱-串联质谱；残留检测；标准研制；质量安全Keywords:Feed;Macrolides;LiquidChromatography-TandemMassSpectrometry;ResidueDetermination;StandardDevelopment;QualitySafety1标准立项背景与必要性1.1行业监管需求的迫切性大环内酯类药物（Macrolides）是一类具有大环内酯环基本结构单元的抗菌药物，主要通过抑制细菌蛋白质合成发挥抑菌作用。由于其抗菌谱广、组织穿透力强、交叉耐药性相对较低等优势，泰乐菌素（Tylosin）、替米考星（Tilmicosin）、红霉素（Erythromycin）、螺旋霉素（Spiramycin）、吉他霉素（Kitasamycin）等药物在畜禽养殖中被广泛用于治疗呼吸道和消化道感染性疾病，部分品种甚至作为饲料添加剂用于促生长目的。然而，大环内酯类药物的不规范使用和滥用导致了一系列公共健康隐患。其一，饲料中药物添加量控制不当会导致动物源性食品中药物残留超标，对人体产生过敏反应、肠道菌群失调、耳毒性和肝毒性等不良反应；其二，长期亚剂量暴露加速了细菌耐药性的产生与传播，尤其是大环内酯-林可酰胺-链阳菌素B（MLSB）耐药表型的出现，严重削弱了该类药物的临床治疗价值；其三，国际贸易中药物残留限量已成为重要的技术性贸易壁垒，出口畜禽产品因药物残留超标被扣留或退货的事件时有发生，造成巨大经济损失。近年来，我国高度重视饲料质量安全监管工作。2024年农业农村部办公厅印发《2024年饲料质量安全监管工作方案》，要求加强饲料中禁用物质和药物饲料添加剂的监测力度，推动检测方法标准的制修订。《中华人民共和国农业农村部公告》中多次更新饲料中允许使用的药物品种目录，并明确规定了停药期和休药期要求，对检测技术提出了更高标准。1.2现有标准与技术瓶颈在我国饲料检测标准体系中，涉及大环内酯类药物测定的标准主要包括农业农村部发布的《饲料中9种糖皮质激素的测定》等，但专门针对大环内酯类药物的检测标准较为匮乏。现行有效的相关标准或技术规范主要存在以下不足：（1）检测品种覆盖不全。现有标准多仅针对单一或少数几种大环内酯类药物进行检测，无法满足多种药物同步筛查的需求。在饲料样品中，往往可能存在多种药物联合添加或交叉污染的情况，单品种检测方法导致检测效率低下，且容易遗漏风险物质。（2）基质适应性不足。饲料基质高度复杂，包含谷物、豆粕、鱼粉、矿物质、维生素预混料等多种成分，不同饲料类型（配合饲料、浓缩饲料、预混合饲料）的基质干扰差异显著。部分现有检测方法仅适用于特定类型的饲料，通用性和适应性不足。（3）灵敏度和确证能力不足。早期标准多采用高效液相色谱-紫外检测法（HPLC-UV）或微生物学方法，这类方法灵敏度较低，定量限一般为50～100μg/kg，难以满足低浓度残留的监测需求；同时缺乏质谱确证能力，容易产生假阳性结果。（4）前处理技术滞后。饲料中药物残留的提取和净化是决定检测方法性能的关键步骤。传统液液萃取方法操作繁琐、有机溶剂消耗量大，净化效果不理想，基质效应严重，影响检测结果的准确性和重复性。1.3标准立项意义在上述背景下，制定一项覆盖多种大环内酯类药物、适用于不同饲料基质、具备高灵敏度和强确证能力的检测方法标准具有极为重要的现实意义。液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）技术凭借其高选择性、高灵敏度、强抗干扰能力和多残留同时分析的优势，已成为当今兽药残留检测领域的主流技术平台。基于该技术制定饲料中大环内酯类药物检测标准，将有效提升我国饲料质量安全监管的技术能力和水平。2标准研制过程与编制原则2.1研制过程本标准编制工作遵循国家标准制修订的程序要求，经历了立项论证、方法研究、实验室间验证、征求意见、专家评审、报批发布等完整环节。在立项论证阶段，起草单位系统调研了国内外相关标准和技术文献。国际上，欧盟关于动物饲料中药物添加剂的管理法规（Regulation(EC)No1831/2003）和食品中兽药残留检测方法标准（CommissionDecision2002/657/EC）为方法性能指标提供了参考依据；美国饲料管理官方协会（AAFCO）的相关规定和AOAC官方分析方法为方法验证提供了参照。国内方面，起草组重点分析了现行《饲料中药物添加剂的测定》系列标准的技术路线和存在问题，明确了新标准的改进方向和关键技术指标。在方法研究阶段，起草单位针对饲料基质特点，系统考察了不同提取溶剂（乙腈、甲醇、乙酸乙酯及混合溶剂）、不同净化方式（固相萃取、QuEChERS、基质分散固相萃取）对7种大环内酯类药物回收率和基质效应的影响。经过大量试验优化，最终确定了“酸性乙腈提取-混合阳离子交换固相萃取柱净化-液相色谱-串联质谱测定”的技术路线。在实验室间验证阶段，组织了8家具有CNAS认可或CMA资质的检验检测机构参加协同验证试验。各实验室使用统一提供的饲料空白样品和加标样品，按照标准草案进行检测。通过对各实验室测定结果的统计分析，评估了方法的重复性、再现性和正确度等关键性能参数，确保方法在不同实验室条件下均能获得稳定可靠的结果。在征求意见阶段，标准草案通过全国饲料工业标准化技术委员会向行业广泛征求意见，共收到来自科研院所、检测机构、饲料生产企业和行业管理部门的反馈意见30余条。起草组逐条研究处理，对标准文本进行了修改完善。2.2编制原则本标准的编制遵循以下基本原则：（1）科学性原则。方法的建立以严谨的试验数据为基础，各项技术参数的确定均经过系统的条件优化和方法学验证，确保检测结果的准确可靠。（2）适用性原则。方法设计充分考虑了我国饲料行业的生产实际和检测机构的装备条件，在保证方法性能的前提下尽量简化操作流程，降低检测成本，提升方法的可操作性。（3）协调性原则。标准的技术内容和指标要求与现行有效的法律法规、强制性标准和推荐性标准保持协调一致，避免冲突和重复。（4）先进性原则。方法采用液相色谱-串联质谱技术平台和多残留同步分析策略，符合国际兽药残留检测技术的发展方向，能够满足当前和未来一段时间的监管需求。（5）规范性原则。标准的编写格式和表述方式严格按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的要求执行，确保标准文本的规范性和可读性。3标准主要技术内容3.1适用范围与检测对象本标准规定了饲料中泰乐菌素、替米考星、红霉素、螺旋霉素、竹桃霉素、吉他霉素和林可霉素等7种大环内酯类药物残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预混合饲料中上述7种药物含量的测定。值得注意的是，林可霉素虽不属于严格意义上的大环内酯类药物，而属于林可酰胺类抗生素，但由于其在兽医临床中常与大环内酯类药物联合使用，且具有相似的检测特性和监管需求，故一并纳入本标准检测范围，体现了标准的实用性和前瞻性。3.2方法原理试样中目标药物用酸性乙腈溶液提取，经混合阳离子交换固相萃取柱净化，浓缩定容后用液相色谱-串联质谱仪测定。采用电喷雾离子源（ESI）正离子模式和多反应监测（MRM）模式进行数据采集，以保留时间和定性离子对进行定性确认，以定量离子对峰面积进行外标法定量。3.3前处理技术前处理过程主要包括提取和净化两个步骤。提取步骤采用含1%甲酸的乙腈溶液作为提取溶剂，利用酸性条件促进目标药物从饲料基质中充分解离和溶解，同时乙腈具有良好的蛋白沉淀作用，有助于去除饲料中的蛋白质类干扰物质。提取液经离心后取上清液，经混合阳离子交换固相萃取柱净化。该净化方式利用目标药物在酸性条件下呈阳离子状态与交换柱上的磺酸基发生离子交换作用而被保留，中性及酸性干扰物质随洗涤液流出，实现了高效净化和富集。3.4色谱-质谱条件色谱分离采用C18反相色谱柱（推荐规格：100mm×2.1mm，1.7～1.8μm粒径），以含0.1%甲酸的水溶液和含0.1%甲酸的乙腈溶液作为流动相进行梯度洗脱。在该色谱条件下，7种目标药物可获得良好的色谱分离，各色谱峰形对称，无明显拖尾现象。质谱条件方面，采用电喷雾离子源正离子模式，离子喷雾电压为3.0～3.5kV，离子源温度为120～150℃，脱溶剂气温度为350～450℃。各化合物在MRM模式下选择两个特征离子对（一个定量离子对和一个定性离子对），通过离子对丰度比进行确证，确保定性结果的可靠性。3.5方法性能指标经系统的的方法学验证，本标准的主要性能指标如下：-定量限：7种药物在饲料基质中的定量限均为5μg/kg，远低于现行监管限量要求，能够满足低浓度残留监测需求。-线性范围：在5～500μg/kg范围内，各药物的线性相关系数（r）均不小于0.995，具有良好的线性关系。-精密度：在重复性条件下，各药物测定结果的相对标准偏差（RSD）为2.3%～8.6%；在再现性条件下，RSD为4.8%～11.7%，方法精密度良好。-基质效应：经空白基质匹配标准曲线校正后，各药物的基质效应为-12.6%～15.3%，方法可有效控制基质干扰。4主要起草单位简介本标准的主要起草单位之一为中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所（简称“质标所”）。该研究所是国家级农产品质量安全专业科研机构，长期从事农产品和农业投入品质量安全检测技术研究、标准制修订和风险评估工作。质标所设有农业农村部农产品质量标准研究中心、农业农村部农产品质量安全风险评估实验室（北京）等科研平台，建有覆盖色谱分析、质谱分析、分子生物学检测等多技术领域的高水平实验平台，配备液相色谱-串联质谱、气相色谱-串联质谱、电感耦合等离子体质谱等大型精密仪器设备，仪器装备条件达到国际先进水平。在兽药残留检测领域，质标所承担了多项国家科技支撑计划、国家重点研发计划和国家自然科学基金项目，在兽药多残留同步检测、快速筛查技术和标准样品研制等方面积累了丰富的研究成果和技术经验。该所牵头或参与制修订了多项饲料和农产品质量安全国家标准和行业标准，涵盖农药残留、兽药残留、重金属、生物毒素和违禁添加物等多个检测领域，为我国农产品质量安全监管体系建设和标准体系完善作出了重要贡献。5标准实施的预期效益与展望5.1预期经济效益本标准的实施将产生显著的经济效益。首先，多残留同步检测技术的应用显著提高了检测效率，单次检测可同时完成7种药物的定量分析，与传统单品种检测方法相比可节约检测时间约70%，降低检测成本约50%，为饲料生产企业和检测机构节省大量人力、物力和时间成本。其次，标准的确立为饲料产品的质量控制和市场准入提供了明确的检测依据，有助于饲料生产企业加强原料和成品质量管理，降低产品质量风险，减少因产品质量问题导致的经济损失。5.2预期社会效益从社会效益来看，本标准的实施对于保障动物源性食品安全、维护公众健康具有重要意义。通过加强对饲料中药物残留的监测和监管，可以从源头上控制畜禽产品中的药物残留风险，降低消费者通过膳食摄入药物残留而产生健康危害的概率。同时，标准的技术支撑作用有助于提升我国饲料质量安全监管的科学化、规范化水平，增强消费者对国产畜禽产品的消费信心，促进社会和谐稳定。5.3未来发展趋势展望未来，饲料中药物检测标准的研制将在以下方向继续深化发展：（1）检测范围进一步扩展。随着新型抗菌药物和替代促生长剂的出现，检测标准的覆盖范围需要不断扩展，逐步将更多品种和代谢物纳入检测体系。（2）快速筛查技术应用。高分辨质谱（HRMS）、实时直接分析-质谱（DART-MS）、表面增强拉曼光谱（SERS）等快速筛查技术与确证方法的结合，将推动饲料中药物检测向高通量、现场化方向发展。（3）绿色检测技术开发。减少有机溶剂使用、简化操作步骤、降低能耗的环境友好型前处理技术（如QuEChERS改良方法、微型化固相萃取等）将成为标准方法研制的重要发展方向。（4）智能化与信息化融合。检测标准的数字化表达、实验室信息管理系统（LIMS）与标准方法的深度融合以及人工智能辅助数据分析将逐步应用，提升标准实施的效率和准确性。6结论《饲料中7种大环内酯类药物的测定液相色谱-串联质谱法》（NY/T4749-2025）是我国饲料质量安全检测标准体系的重要组成部分。该标准的制定紧密结合了当前饲料质量安全监管的实际需求，系统解决了现有方法在检测种类、灵敏度、基质适应性等方面存在的不足，首次实现了饲料中7种大环内酯类药物多残留同步测定的标准化。标准采用液相色谱-串联质谱技术，通过优化前处理方法和仪器条件，建立了具有灵敏度高、选择性好、确证能力强、适用范围广的检测方法。方法定量限为5μg/kg，回收率范围为76.5%～98.2%，各项技术指标均满足饲料质量安全监管的要求，达到国际同类标准的先进水平。标准的发布实施将为我国饲料质量安全监管提供有力的技术支撑，为饲料生产企业的质量控制提供可靠的检测工具，为保障动物源性食品安全和维护公众健康发挥重要作用。未来，随着检测技术的不断进步和监管需求的持续提升，相关标准体系将进一步完善，为我国饲料工业和养殖业的持续健康发展保驾护航。参考文献[1]GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则[S].[2]GB/T27404