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DB34DB34/T3305—2018石榴干腐病检测与鉴定技术规程DetectionandIdentificationofPilidiellagranati2018-12-29发布2019-01-29实施安徽省市场监督管理局发布I1GB/T6682分析实验室用水规分类地位：属真菌界Fungi，子囊菌门Ascomycota，子囊菌纲Sordariomycetes，间座壳目5.1高速离心机：转速≤15000r/5.5恒温培养箱：20℃~30℃5.7恒温水浴锅：4℃~100℃25.14显微镜：物镜头10×~40×6.1PCR试剂：2×PCRTaqMa异戊醇（25：24：1氯仿，异丙醇，TE（Tris-HCL10mmol/L，EDTA1mmol/L，pH8.0）基中培养。待长出菌丝后，转至PDA培养基平板和孢子形态（参见附录A.3）。进行单孢分离与纯化后从培养好的菌落边缘用打孔器取10块直径为养5d，过滤收集菌丝，经液氮冷冻研磨成粉，加），将上清转移至新的EP管中，加入等体积氯仿，轻轻颠倒混匀，常温条件下12000rpm离心5min；者TE（pH8.0）溶解沉淀（含20），——GF-F：5’-AAGGACACAACCCCAGATAC-3’；——GF-R：5’-ATAAACTACTACGCTCAGAG-3’。3胶在1×TAE缓冲液中电泳，用凝胶成像系统分析。若阳性对照出现一条450bp的DNA片段，阴性分离并鉴定为石榴干腐病菌的菌株，应妥善保存。短期保存可将菌株接种到PDA培4

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