NYT 548-2025 猪传染性胃肠炎诊断技术标准立项发展报告

猪传染性胃肠炎诊断技术标准立项发展报告StandardizationDevelopmentReport:DiagnosticTechniquesforTransmissibleGastroenteritisofPigs摘要猪传染性胃肠炎（TransmissibleGastroenteritisofPigs，TGE）是由猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）引起的一种急性、高度接触性肠道传染病，以呕吐、严重腹泻和脱水为主要临床特征，对养猪业造成严重的经济损失。随着我国生猪养殖规模化和集约化程度不断提高，疫病防控形势日趋复杂，建立科学、规范、统一的诊断技术标准对于TGE的早期监测、快速诊断和有效防控具有重要意义。本报告围绕农业行业标准NY/T548-2025《猪传染性胃肠炎诊断技术》的立项背景、标准内容、技术要点及应用价值展开系统阐述。该标准在原NY/T548-2002版本基础上进行了全面修订，充分吸纳了近年来国内外TGEV病原学、血清学及分子生物学诊断领域的最新研究成果，整合了病毒分离鉴定、RT-PCR检测、荧光定量RT-PCR检测、酶联免疫吸附试验（ELISA）及间接免疫荧光试验（IFA）等多种诊断方法，构建了涵盖病原学诊断、血清学诊断和分子生物学诊断三位一体的技术体系。标准的发布实施将为我国猪传染性胃肠炎的规范化诊断、流行病学调查和防控决策提供权威技术支撑，对保障生猪养殖业健康发展、维护食品安全和公共卫生安全具有重要的现实意义。关键词：猪传染性胃肠炎；诊断技术；行业标准；RT-PCR；ELISA；疫病防控AbstractTransmissiblegastroenteritisofpigs(TGE)isanacute,highlycontagiousintestinaldiseasecausedbytransmissiblegastroenteritisvirus(TGEV),characterizedbyvomiting,severediarrhea,anddehydration,causingsignificanteconomiclossestotheswineindustry.Withthecontinuousimprovementoflarge-scaleandintensivepigproductioninChina,thesituationofdiseasepreventionandcontrolhasbecomeincreasinglycomplex.Establishingscientific,standardized,andunifieddiagnostictechnicalstandardsisofgreatsignificanceforearlysurveillance,rapiddiagnosis,andeffectivepreventionofTGE.Thisreportsystematicallyelaboratesontheprojectbackground,standardcontent,technicalkeypoints,andapplicationvalueoftheagriculturalindustrystandardNY/T548-2025*DiagnosticTechniquesforTransmissibleGastroenteritisofPigs*.BasedonthecomprehensiverevisionoftheoriginalNY/T548-2002version,thisstandardfullyincorporatesthelatestresearchachievementsinetiological,serological,andmolecularbiologicaldiagnosisofTGEV,integratingmultiplediagnosticmethodsincludingvirusisolationandidentification,RT-PCRdetection,real-timequantitativeRT-PCRdetection,enzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA),andindirectimmunofluorescenceassay(IFA),therebyconstructingatrinitytechnicalsystemcoveringetiological,serological,andmolecularbiologicaldiagnosis.Thereleaseandimplementationofthisstandardwillprovideauthoritativetechnicalsupportforstandardizeddiagnosis,epidemiologicalinvestigation,andpreventiondecision-makingofTGEinChina,playingasignificantroleinensuringthehealthydevelopmentoftheswineindustryandmaintainingfoodsafetyandpublichealth.Keywords:transmissiblegastroenteritisofpigs;diagnostictechniques;industrystandard;RT-PCR;ELISA;diseasepreventionandcontrol一、引言1.1标准立项背景猪传染性胃肠炎（TransmissibleGastroenteritis，TGE）是由冠状病毒科（Coronaviridae）猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）引起的以猪呕吐、严重腹泻和脱水为特征的高度接触性肠道传染病。该病各年龄段的猪均易感，其中10日龄以内的仔猪发病率和死亡率极高，死亡率可达100%；随着日龄增长，死亡率逐渐下降，但生长性能和饲料报酬显著降低，给养猪生产造成巨大的经济损失。TGE被世界动物卫生组织（WOAH）列为须通报的重要猪传染病，我国将其列为二类动物疫病。自1945年Doyle和Hutchings首次报道TGE以来，该病已在世界范围内广泛传播和流行。我国自1956年首次发现TGE以来，各地不断有疫情发生和报道。近年来，随着生猪养殖密度增加、跨区域调运频繁以及猪群免疫状况复杂化，TGE的流行形势日趋复杂。值得关注的是，TGEV与猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪轮状病毒（PoRV）等病原体在临床上均以腹泻为主要特征，单纯依靠临床症状难以进行鉴别诊断，这更加凸显了建立科学规范的诊断技术标准的重要性和紧迫性。1.2标准修订必要性原标准NY/T548-2002《猪传染性胃肠炎诊断技术》自2002年发布实施以来，在指导我国TGE的实验室诊断和临床防控中发挥了重要作用。然而，经过二十余年的发展，该标准在以下方面已难以适应新形势下的需求：第一，诊断技术快速发展。近年来，分子生物学诊断技术取得了长足进步，荧光定量RT-PCR（qRT-PCR）、数字PCR等新技术不断成熟并逐步应用于TGEV的检测。与常规RT-PCR相比，荧光定量RT-PCR具有灵敏度更高、特异性更强、可定量分析且能有效降低交叉污染风险等显著优势，已成为当前病原核酸检测的主流技术。这些新技术亟需纳入标准体系。第二，标准使用范围亟需扩展。原有标准侧重于传统的病毒分离鉴定和血清学检测方法，未充分涵盖高通量、自动化检测技术，也未涉及混合感染鉴别诊断的技术方案。第三，与相关标准的配套性有待提升。随着GB/T18641-2018《伪狂犬病诊断方法》、GB/T34739-2017《动物狂犬病病毒核酸检测方法》等一批新标准的相继发布，TGE诊断标准的技术思路和编写格式也需要相应更新与协调。第四，防控需求日益提高。当前我国正在大力推进动物疫病净化工作，农业农村部发布的《动物疫病净化示范区评估标准》和《全国动植物保护能力提升工程建设规划》等文件对疫病诊断的准确性、灵敏度和标准化提出了更高要求。TGE作为严重危害养猪业的重要疫病，其诊断技术的标准化是实施疫病净化的重要技术保障。二、标准修订的技术路线NY/T548-2025《猪传染性胃肠炎诊断技术》的修订工作遵循“科学严谨、实用可行、先进适用、协调一致”的原则，采用以下技术路线：标准修订系统梳理了2002年以来国内外TGEV诊断技术研究的最新进展，广泛搜集和分析了WOAH《陆生动物诊断试验与疫苗手册》中关于TGE诊断方法的技术规范，充分参考了国际标准化组织（ISO）和全国动物卫生标准化技术委员会相关标准文件，以确保技术指标的先进性和国际协调性。在此基础上，组织国内高校、科研院所和各级动物疫病预防控制机构的专家进行多轮论证，并通过不同实验室间的比对试验对各项诊断方法的灵敏度和特异性进行了系统验证，确保标准技术指标的可靠性和重复性。标准编写严格遵循GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的要求，保证了标准文本的规范性。三、标准主要技术内容3.1标准适用范围NY/T550-2025《猪传染性胃肠炎诊断技术》规定了猪传染性胃肠炎的病原学诊断、血清学诊断和分子生物学诊断的技术要求。该标准适用于猪传染性胃肠炎的临床诊断、实验室确诊、流行病学调查、疫情监测及检疫检验等工作，为各级动物疫病预防控制机构、科研院所、高校及相关检测实验室提供了统一的技术依据。3.2诊断技术体系框架该标准构建了多层次、互补性的诊断技术框架，核心内容涵盖三大技术模块：病原学诊断模块，主要包括病毒分离鉴定和病毒中和试验。病毒分离鉴定是TGE诊断的经典“金标准”方法，通过将病料接种于猪睾丸细胞（ST）或猪肾细胞（PK-15）等敏感细胞系进行病毒分离，通过观察特征性细胞病变（CPE）并结合特异性鉴定予以确认。分子生物学诊断模块，包含常规RT-PCR和荧光定量RT-PCR。其中，荧光定量RT-PCR作为新增技术方法，针对TGEV的保守基因区段设计特异性引物和探针，能够实现病毒的快速、灵敏、定量检测，灵敏度较常规RT-PCR提高1~2个数量级。血清学诊断模块，涵盖酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接免疫荧光试验（IFA）和血清中和试验等。ELISA方法适用于大规模血清学调查和疫苗免疫效果评估，具有操作简便、高通量等优势。3.3关键技术要点3.3.1临床诊断与样品采集标准详细规定了TGE的临床诊断要点。TGE的潜伏期一般为18小时至3天，传播迅速，数日内可波及全群。临床表现以呕吐、水样腹泻和严重脱水为特征，不同日龄猪临床表现差异较大：哺乳仔猪症状最严重，先出现呕吐，继而发生剧烈水样腹泻，粪便呈黄色、灰色或白色，常含有未消化的乳凝块，体温短暂升高后降至正常或偏低，病死率随日龄减小而升高。育肥猪和成年猪症状较轻，主要表现为食欲减退、腹泻和体重下降，一般在一周内康复。对于病死猪的病理剖检，典型病变主要集中在胃肠道：胃内含有未消化的凝乳块，胃底黏膜充血、出血；小肠壁变薄、弛缓扩张，呈半透明状，充满黄色液体和气体；肠系膜淋巴结肿胀、充血。标准对样品采集的规范进行了详细说明，包括样品种类、采集时机、保存运输条件等关键环节，确保送检样品的质量和检测结果的可靠性。病原学检测样品应采集发病急性期（出现症状后24~48小时内）的粪便、肛门拭子或小肠及内容物；血清学检测样品应采集发病期和恢复期双份血清，用于判定抗体水平动态变化。3.3.2RT-PCR检测方法标准规定的RT-PCR方法针对TGEV的N基因或S基因高度保守区域设计特异性引物，通过反转录和PCR扩增实现病毒核酸的检测。标准对RNA提取、引物序列、反应体系、扩增程序、产物分析及结果判定等技术参数均作出了明确规定，确保不同实验室间检测结果的可比性。该方法具有灵敏、特异、快速等优点，适用于发病动物临床样本的快速检测和病原鉴定。3.3.3荧光定量RT-PCR方法荧光定量RT-PCR是本次标准修订新增的重要技术内容。该方法采用TaqMan探针法，在常规RT-PCR基础上引入荧光共振能量转移（FRET）原理，通过实时监测荧光信号实现核酸扩增产物的定量分析。标准对该方法的引物和探针序列、反应体系优化、扩增条件、标准曲线建立、阴阳性对照设置及结果判定标准进行了详细规定。该方法灵敏度高、特异性强、检测速度快（2小时内可完成），且可以有效降低气溶胶污染导致的假阳性风险，是目前TGEV核酸检测的首选方法。3.3.4ELISA检测方法标准收录了间接ELISA抗体检测方法。该方法以纯化的TGEV抗原包被酶标板，通过酶标二抗催化底物显色反应来检测血清中的特异性抗体。标准对抗原包被浓度、血清稀释度、洗涤条件、酶标抗体工作浓度、显色时间及判定标准等关键参数进行了优化和统一规定。ELISA方法适用于猪群TGEV感染状况的大规模血清学调查、疫苗免疫效果评估以及进出口生猪的检疫检验。该方法具有操作简便、高通量、客观量化等优势，在临床应用和流行病学调查中具有广泛的适用性。3.3.5鉴别诊断鉴于TGE的临床症状与猪流行性腹泻（PED）、猪轮状病毒感染等疾病高度相似，标准专门设立了鉴别诊断章节，明确了TGEV与猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪轮状病毒（PoRV）及猪丁型冠状病毒（PDCoV）的鉴别诊断要点。通过特异性引物的多重RT-PCR检测或荧光定量RT-PCR检测，可实现TGEV与其他猪肠道冠状病毒的同时检测和鉴别，为临床上准确确定病原提供了可靠的技术手段。四、主要参与单位及职责NY/T548-2025《猪传染性胃肠炎诊断技术》的修订工作由中国动物卫生与流行病学中心牵头，联合中国动物疫病预防控制中心、中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国农业大学动物医学院等单位共同完成。中国动物卫生与流行病学中心作为标准修订的主要承担单位，是农业农村部直属的国家级动物卫生技术支撑机构，长期承担全国重大动物疫病监测、流行病学调查、诊断技术研究和标准制修订工作。该中心设有国家外来动物疫病诊断实验室和动物卫生标准研究室，在猪传染病诊断技术标准化领域积累了丰富的工作经验，先后主持或参与制修订动物卫生国家标准和行业标准数十项。中心拥有生物安全三级（BSL-3）实验室、ABI7500荧光定量PCR仪、全自动核酸提取仪、倒置荧光显微镜等先进仪器设备，具备开展TGEV病原分离鉴定、核酸检测和血清学检测等全方位诊断技术研究的能力。在本次标准修订过程中，中国动物卫生与流行病学中心主要承担了标准文本的起草、技术指标的验证、实验室间比对试验的组织实施以及标准征求意见的汇总处理等工作。中心研究人员系统收集和整理了近年来国内外TGEV诊断技术研究的最新文献和数据，对各诊断方法的灵敏度、特异性、重复性和可操作性进行了全面的评价和比较，为标准技术内容的科学性和先进性提供了有力的数据支撑。五、修订前后的主要变化与原标准NY/T548-2002相比，新标准NY/T548-2025在以下方面进行了重要调整和完善：技术内容方面，新增了荧光定量RT-PCR检测方法，弥补了原标准在分子生物学定量检测方面的空白。同时对原有病毒分离鉴定和血清学检测方法的操作流程和判定标准进行了更新与优化，增加了对检测条件控制的详细说明。标准框架方面，按照GB/T1.1-2020标准化工作导则的要求对标准结构进行了全面调整，使标准文本的层次结构、条款表述和编写格式更加规范统一。适用范围方面，扩展了标准的适用场景，增加了对混合感染鉴别诊断的技术方案，提高了标准的实用性和覆盖面。质量控制方面，增加了实验室质量控制要求，对检测过程中的阳性对照、阴性对照、内参设置和结果的有效性判定进行了更为明确和严格的规定。六、标准应用与实施意义NY/T548-2025的发布实施对推动我国猪传染性胃肠炎防控工作具有深远影响。在提升诊断能力和水平方面，该标准将促进各级动物疫病预防控制机构和养殖企业建立统一的TGE诊断技术平台，尤其是荧光定量RT-PCR方法的标准化应用，将显著提高TGEV检测的灵敏度和时效性，为疫情的早发现、快反应提供技术保障。在支撑疫病净化和区域化管理方面，当前我国正加快推进动物疫病净化工作，该标准的颁布为种猪场TGE的净化评估提供了权威的检测技术依据。标准中规范化的血清学调查方法和病原学检测技术，为净化场的评估认证和维持监测提供了统一的技术标尺。在促进国际贸易方面，标准的修订充分参考了国际通行技术规范，提高了我国TGE诊断技术标准的国际协调性和互认度，有助于打破动