NYT 4488-2025 油料中褪黑素含量的测定 液相色谱串联质谱法标准立项发展报告

油料中褪黑素含量的测定液相色谱串联质谱法标准立项发展报告StandardizationDevelopmentReport:DeterminationofMelatoninContentinOilseedsbyLiquidChromatography-TandemMassSpectrometry摘要关键词：褪黑素；油料；液相色谱串联质谱法；农业行业标准；食品安全；质量控制Keywords:Melatonin;Oilseeds;LiquidChromatography-TandemMassSpectrometry;AgriculturalIndustryStandard;FoodSafety;QualityControl1引言1.1研究背景褪黑素（melatonin，N-乙酰-5-甲氧基色胺）最早于1958年由Lerner等人从牛松果体中分离鉴定，长期以来被视为一种主要由动物松果体分泌的神经内分泌激素。自1995年Dubbels等人在高等植物中发现褪黑素以来，植物源褪黑素的研究逐渐成为植物学和食品科学领域的热点方向。大量研究证实，褪黑素广泛存在于大豆、花生、葵花籽、油菜籽、芝麻等油料作物及其加工产品中，在植物体内参与种子萌发调控、光合作用调节、衰老进程延缓以及低温、干旱、盐碱等非生物胁迫响应等多项生理过程。与此同时，膳食来源的植物褪黑素也被认为对人体具有调节昼夜节律、改善睡眠质量、清除自由基、增强免疫机能等多重健康功效。油料作物是我国重要的经济作物和食用植物油加工原料，其品质直接关系到食用油产品的营养价值和安全性。随着消费者对功能性食品和营养健康油脂的需求持续增长，油料中内在功能性成分的精准定量分析已成为油脂品质评价的重要维度之一。然而，褪黑素在油料基质中含量通常处于痕量水平（ng/g～µg/g），且油料基质富含油脂、蛋白质、磷脂等复杂干扰组分，对检测方法的灵敏度、选择性和抗基质干扰能力提出了极高的技术挑战。1.2标准立项的必要性在NY/T4488-2025标准发布之前，我国尚未建立油料中褪黑素含量测定的统一标准方法。目前，国内各科研院所、检测机构和生产企业多参考国外文献报道的实验室自建方法，普遍存在以下突出问题：第一，检测方法缺乏统一规范。不同实验室在前处理方式（液液萃取、固相萃取、QuEChERS等）、色谱分离条件、质谱检测参数等方面差异明显，导致同类样品在不同实验室间的检测结果存在较大偏差，数据的互认性和可比性不足。第二，质量控制水平参差不齐。缺少统一的基质匹配校准、内标校正、方法验证和不确定度评定要求，部分检测结果难以满足仲裁检测和市场监管的需求。2标准编制依据与原则2.1编制依据本标准的编制严格遵循《中华人民共和国标准化法》《中华人民共和国农产品质量安全法》等法律法规的要求，按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定进行编写。在技术内容确定过程中，主要依据以下技术文件和方法基准：-GB/T6682《分析实验室用水规格和试验方法》-GB/T27404《实验室质量控制规范食品理化检测》-JJF1059.1《测量不确定度评定与表示》-农业部发布的相关农产品质量安全检测技术规范2.2编制原则本标准的编制遵循以下基本原则：（1）科学性。在大量试验验证和文献调研的基础上，确定科学合理的前处理方案和仪器分析条件，确保方法的选择性、灵敏度、准确度和精密度满足痕量分析要求。（2）适用性。充分考虑我国油料生产实际和检测实验室的设备条件，标准方法在保证检测质量的前提下力求操作可行、经济合理。（3）规范性。严格遵循标准编写规则，对方法原理、试剂材料、仪器设备、样品前处理、色谱质谱条件、结果计算和精密度要求等进行明确规定。（4）先进性。采用液相色谱串联质谱法这一当前国际公认的痕量有机物确证分析技术，方法性能指标达到国际同类标准水平。3标准主要技术内容3.1方法原理本标准规定的方法基于液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）技术。其基本原理为：试样中的褪黑素经提取、净化后，用高效液相色谱系统进行分离，在电喷雾离子源（ESI）正离子模式下电离，生成母离子，经第一质量分析器（Q1）选择后进入碰撞池进行碰撞诱导解离（CID），产生的特征子离子经第二质量分析器（Q3）进行质量分析，通过多反应监测（MRM）模式实现对褪黑素的选择性检测。方法采用同位素内标（如氘代褪黑素melatonin-d4或melatonin-d5）进行定量校正，以有效补偿样品前处理过程中的待测物损失和基质效应引起的信号抑制或增强。3.2样品前处理油料样品经粉碎、过筛（孔径0.425mm，40目）均质化处理后，准确称取一定量（通常为0.5g～2.0g）试样。前处理流程主要包括以下关键步骤：-提取：采用适当比例的有机溶剂（如甲醇、乙腈或其水溶液）进行液-固萃取，辅助手段可采用涡旋振荡和超声提取，提取时间经优化以确保褪黑素充分溶出。-净化：针对油料基质富含脂质的特点，采用低温冷冻脱脂（-20℃冷冻后离心）结合固相萃取（SPE，如C18、HLB或MCX小柱）的方式有效去除油脂和色素等干扰物。-浓缩定容：净化后的提取液在温和氮气流下吹干，用初始流动相复溶并定容，经滤膜（0.22µm有机微孔滤膜）过滤后供仪器测定。3.3色谱与质谱条件色谱条件方面，本标准推荐采用C18反相色谱柱（如规格为2.1mm×100mm，粒径1.7µm～3.5µm），柱温控制在30℃～40℃。流动相系统采用含甲酸或乙酸铵缓冲盐的水溶液与甲醇（或乙腈）的二元梯度洗脱模式，梯度程序的设置以确保褪黑素与基质干扰组分的有效分离为目标，流速一般为0.2mL/min～0.4mL/min，进样量一般为2µL～10µL。质谱条件方面，采用电喷雾离子源正离子模式（ESI⁺），离子源温度、雾化气压力、干燥气流速、毛细管电压等参数经系统优化，褪黑素的定量离子对和定性离子对根据实际仪器响应情况进行选择确认，典型离子对为m/z233.1→174.1（定量）和m/z233.1→159.1（定性）。3.4定量方法标准采用内标-标准曲线法定量。配制系列浓度的褪黑素标准工作溶液，每份添加等量的内标溶液，以褪黑素与内标的峰面积比值为纵坐标、对应的质量浓度为横坐标绘制标准曲线。试样中褪黑素的含量根据标准曲线计算，并以内标进行校正，最终结果以mg/kg或µg/kg表示。3.5方法性能指标经过多家实验室协同验证，本标准规定的方法性能指标达到以下水平：-检出限（LOD）：≤0.5µg/kg（以信噪比S/N=3计）-定量限（LOQ）：≤2.0µg/kg（以信噪比S/N=10计）-回收率：在加标水平范围内，平均回收率为85%～110%-精密度：重复性条件下相对标准偏差（RSDᵣ）≤10%，再现性条件下相对标准偏差（RSD_R）≤15%-线性范围：在0.5ng/mL～100ng/mL范围内，线性相关系数r≥0.9954标准实施的意义与预期效益4.1填补标准空白，完善检测标准体系NY/T4488-2025标准作为我国首个针对油料中褪黑素含量检测的行业标准，填补了该领域标准体系的空白，为油料品质评价和功能性成分检测提供了统一的技术规范。标准的发布实施将推动褪黑素检测从“实验室自建方法”阶段迈入“标准化检测”阶段，促进全国范围内检测能力的规范化建设。我国是全球最大的油料作物生产国和食用植物油消费国。油菜籽、大豆、花生、葵花籽、芝麻等油料作物年产量超过6000万吨。随着《“健康中国2030”规划纲要》和《国民营养计划（2017—2030年）》的深入实施，功能性油脂和营养导向型农产品开发已成为产业升级的重要方向。该标准的实施将为油料育种筛选（高褪黑素含量品种选育）、油料加工工艺优化（褪黑素保留率评价）以及功能性油脂产品开发提供准确可靠的检测技术支撑，促进油料产业由“产量导向”向“质量导向”和“功能导向”转型。4.3强化质量监管，保障消费权益标准的发布实施为农产品质量安全监管机构、第三方检测机构和食品生产企业提供了法定的检测依据，有利于加强油料及其制品中功能性成分的监督管理。同时，统一的检测标准有助于规范市场秩序，防止虚假标注和夸大宣传，保护消费者的合法权益。4.4促进国际贸易，增强标准话语权在国际贸易中，检测方法的标准化和互认性是消除技术性贸易壁垒的关键因素。当前，国际标准化组织（ISO）尚未发布油料中褪黑素检测的国际标准。我国率先建立该领域的行业标准，有助于提升我国在功能性农产品检测领域的国际影响力和标准话语权，为后续推动国际标准制定奠定技术基础。5标准主要起草单位介绍本标准由农业农村部农产品质量安全监管司归口管理，由全国农业食品标准专业技术组织负责技术审查。主要起草单位汇集了国内农产品质量安全检测领域的权威科研机构和国家级检测中心，其中中国农业科学院油料作物研究所作为核心起草单位，在标准研制过程中发挥了关键作用。中国农业科学院油料作物研究所（以下简称“油料所”）始建于1960年，是国家级油料作物专业研究机构，也是全国油料产品质量安全风险评估和检测技术研究的权威技术依托单位。研究所设有农业农村部油料产品质量安全风险评估实验室、农业农村部油料及制品质量监督检验测试中心等国家级科研与检测平台，长期承担全国油料产品质量安全监测、风险评估和技术标准研制任务。在标准研制过程中，油料所充分发挥其在油料品质分析与功能成分检测领域的深厚技术积累，牵头完成了方法学的系统研究、实验室间的协同验证以及标准文本的起草工作。研究团队系统优化了油料中褪黑素提取净化方案，攻克了高油脂基质下痕量褪黑素检测的基质效应抑制难题，并通过组织多家实验室开展协同验证试验，确保了标准方法的稳健性和可操作性。此外，油料所还积极参与了国际植物褪黑素检测方法的研究交流，为提升标准的国际适用性提供了有力支撑。油料所在农产品质量安全标准领域成果丰硕，先后主持和参与制修订国家标准、农业行业标准100余项，在我国油料标准化体系建设中发挥着不可替代的引领作用，为本标准的科学性、权威性和适用性提供了坚实保障。6结论与展望NY/T4488-2025《油料中褪黑素含量的测定液相色谱串联质谱法》是我国油料品质检测标准体系的重要补充和完善。该标准的发布与实施，从根本上解决了长期以来油料中褪黑素检测方法不统一、结果不可比的突出问题，标志着我国油料功能性成分检测技术迈上了标准化、规范化的新台阶。标准采用液相色谱串联质谱法这一先进的分析技术，具有灵敏度高、选择性好、准确可靠、高通量等突出优势，能够满足当前油料科研、生产和监管的多元需求。标准的实施将有力推动我国油料品质评价体系的完善和功能性油脂产业的发展，对促进农产品质量安全水平提升、服务健康中国战略具有深远的意义。展望未来，随着植物褪黑素研究的持续深入和功能性油脂市场的不断拓展，油料中褪黑素检测标准的应用场景将进一步扩大。建议在标准实施的基础上，逐步开展油料制品（如食用植物油、油料蛋白、油料饼粕等）中褪黑素检测方法的延伸研究，适时拓展标准覆盖的基质范围；加强对标准应用的技术培训和能力验证，推动标准在全国各级检测机构的有效实施；积极跟踪国际标准化动态，适时提出国际标准提案，推动我国在植物褪黑素检测领域的标准国际化进程，为全球功能性农产品标准化发展贡献中国方案和中国智慧。参考文献[1]LernerAB,CaseJD,TakahashiY,etal.Isolationofmelatonin,thepinealglandfactorthatlightensmelanocytes[J].JournaloftheAmericanChemicalSociety,1958,80(10):2587-2587.[2]DubbelsR,ReiterRJ,KlenkeE,etal.Melatonininedibleplantsidentifiedbyradioimmunoassayandbyhighperformanceliquidchromatography-massspectrometry[J].JournalofPinealResearch,1995,18(1):28-31.[3]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局,中国国家标准化管理委员会.标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则:GB/T1.1-2020[S].北京:中国标准出版社,2020.[4]中华人民共和国农业农村部.农产品质量安全检测机构考核评审细则[Z].2022.[5]ArnaoMB,Hernández-RuizJ.Functionsofmelatonininplants:areview[J].JournalofPinealResearch,2015,59(2):133-