DB42-T 1786.3-2023 生猪疫病防控技术 第3部分：非洲猪瘟监测样品采集技术规程

ICS65.020.30CCSB41DB42湖北省市场监督管理局发布IDB42/T1786.3—2023前言 V 12规范性引用文件 13术语和定义 14样品采集处理与检测方法 1 1 样品处理保存与运输234.4 5猪场环境监测样品采集 2 环境监测样品采集方法25 猪舍内环境监测样品采集35 猪舍外环境监测样品采集355 6猪群监测样品采集 47处理方案 48档案记录 4附录A （资料性）车辆样品采集部位示意图6 （资料性）种猪群样品采集数量计算公式7附录C（规范性）群体数量较大时采样数量表 8DB42/T1786.3—2023本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件是DB42/T1786《生猪疫病防控技术》的第3部分。DB42/T1786已经发布了以下部分：——第1部分：伪狂犬病监测评估技术规程；——第2部分：传染性胸膜肺炎监测评估技术规程；——第3部分：非洲猪瘟监测样品采集技术规程。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖北省农业科学院提出。本文件由湖北省农业农村厅归口。本文件起草单位：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所，华中农业大学，湖北省动物疫病预防控制中心，红安县鸿彤牧业公司，湖北金旭农业发展股份有限公司，湖北奥登农牧科技有限公司。本文件主要起草人：杨克礼，田永祥，何启盖，裴洁，郭锐，周丹娜，李文涛，吴早林，张召，张华平，库旭钢，刘威，梁婉，刘泽文，袁芳艳，高婷。本文件为首次发布。本文件实施应用中的疑问，可咨询湖北省农业农村厅，联系电话邮箱：hbsnab@126.com；对本标准的有关修改意见或建议，请反馈至湖北省农业科学院畜牧兽医研究所，联系电话邮箱：hbxms@163.com。DB42/T1786.3—2023V引言非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的猪的一种急性、热性、高度接触性动物传染病，以高热、网状内皮系统出血和高死亡率为特征。世界动物卫生组织（OIE）将其列为法定报告动物疫病，我国将其列为一类动物疫病，是严重危害我国养猪业的烈性传染病。由于目前尚无安全有效的疫苗，对于该病的防控主要以加强生物安全为主。制定非洲猪瘟监测样品采集技术规程，有利于养殖场科学规范监测疫情，尽早采取防控措施，有效预防和控制该病的发生与流行，提升生猪疫病防控技术水平。DB42/T1786拟由以下部分构成，具体如下：——第1部分：伪狂犬病监测评估技术规程。目的在于对采用的检测技术，监测群体的规模以及监测频次提出相应的规范要求。——第2部分：传染性胸膜肺炎监测评估技术规程。目的在于对猪传染性胸膜肺炎的检测、预防和治疗提出相应的规范要求。——第3部分：非洲猪瘟监测样品采集技术规程。目的在于对猪场环境非洲猪瘟监测样品采集区域、采集点、采样频次和猪群非洲猪瘟监测样品组织类型、采集数量、采集频次提出相应的规范要求。本文件为系列文件，目的是针对猪伪狂犬病、猪传染性胸膜肺炎和非洲猪瘟提出对应样品采集、检测、监测技术要求。之后涉及不同病原的检测、监测、防控规定，归为本文件的不同部分。DB42/T1786.3—20231生猪疫病防控技术第3部分:非洲猪瘟监测样品采集技术规程本文件规定了非洲猪瘟监测样品采集的术语与定义、样品采集处理与检测方法、猪场环境监测样品采集、猪群监测样品采集、处理方案和档案记录。本文件适用于猪场非洲猪瘟监测样品的采集。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T18648非洲猪瘟诊断技术GB19489实验室生物安全通用要求GB/T25169畜禽粪便检测技术GB/T27522畜禽养殖污水采样技术规范NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范NY/T1948兽医实验室生物安全要求通则SN/T1559-2010非洲猪瘟检疫技术规范3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1非洲猪瘟africanswinefever是由非洲猪瘟病毒（ASFV）感染家猪和野猪的一种急性、热性、高度接触性动物传染病，以高热、网状内皮系统出血和高死亡率为特征。[来源：SN/T1559-2010，3.1，有修改]3.2监测monitoring采用规定的方法，持续对特定群体中疫病的发生、流行、分布及相关因素进行观察和检测的过程。3.3监测样品monitoringsample取自生猪或环境，拟通过检测反映个体、群体或者环境有关状况的材料或物料。4样品采集处理与检测方法4,1采样前准备2DB42/T1786.3—20234.1.1人员准备采样人员经洗手消毒，穿戴好一次性手套、防护服、口罩、鞋套，携带采样所需物品。4.1.2物品准备棉拭子、装有PBS的离心管、真空采血管、记号笔、剪刀、镊子、75%酒精棉、密封袋、样品箱、冰袋等,可根据实际需要增减采样物品。4.2样品的采集采集猪的扁桃体、口鼻拭子等样品及猪场环境中的粉尘、粪便、尿液、水、土壤等样品。口鼻拭子及组织样品的采集应符合NY/T541中的规定；粪便样品采集应符合GB/T25169中的规定；污水样品采集应符合GB/T27522中的规定；土壤样品用无菌镊子取2-5g装入无菌离心管中，做好标记。采集猪样品时要求一猪一副手套，6小时内完成全部样品采集。4.3样品处理、保存与运输样品处理、保存及运输，应符合NY/T541中的规定。4,4检测方法按GB/T18648中的非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测方法检测非洲猪瘟病毒核酸。5猪场环境监测样品采集5.1采样位置选择原则工作中高频率接触点、不易清洗点等高风险点。5.2环境监测样品采集方法戴一次性PE手套，将用生理盐水充分浸湿的无菌棉拭子在物体表面涂抹3-5次后，放入装有1-2ml灭菌PBS的离心管中。做好标记后冷藏或冷冻状态下保存或送检。5.3办公及生活区样品采集办公及生活区各场所样品采集按表1规定执行。表1办公及生活区样品采集份数及采样频率每个采样点采品，每个采样区域的样品混DB42/T1786.3—20233表1办公及生活区样品采集份数及采样频率（续）个样品，每个采样区域的样样本进行检5.4猪舍内环境监测样品采集猪舍内环境样品采集按表2规定执行。表2猪舍内环境样品采集点、样品采集份数及采样频率每个采样点域5.5猪舍外环境监测样品采集猪舍外环境样品采集按表3规定执行。表3猪舍外环境样品采集点、样品采集份数及采样频率每个采样点采集1-2份样5.6人员监测样品采集DB42/T1786.3—20234各类人员样品采集按表4规定执行。表4各类人员样品采集份数及采样频率用生理盐水浸湿的无菌棉拭子采集5.7车辆监测样品采集车辆每次进场前用生理盐水浸湿的棉拭子擦拭车门把手、轮胎、前挡泥板、引擎盖板、底盘、后备箱、方向盘、座椅、内部门把手、脚踏板、车厢（前、中、后处的边角、围栏、缝隙）。每辆车采集的样品份数不少于20份，车内部所有样品混合成1份样本，车前部所有样品混合成1份样本，车后部所有样品混合成1份样本。车辆样品采集部位见附录A。6猪群监测样品采集猪群监测样品采集时不同猪群的抽样比例及采样频率按表5规定执行。表5不同猪群抽样比例及采样频率件下，不同预期流行率、不同可接受误差的采样数量参7处理方案按照本文件采样方案检测样品中如非洲猪瘟病毒核酸出现阳性，则按照国家现行非洲猪瘟疫情处置方案处理。采样中应做好场地、物品、操作人员防护用品等消毒或无害化处理。废弃物处置应符合GB19489和NY/T1948中的规定。阳性样品及检测余样均按GB19489要求做无害化处理。8档案记录DB42/T1786.3—20235样品采集过程中，随时做好标记和档案记录。档案记录应包括样品采集时间、地点，样品类型，样品数量，样品编号，样品采集人，样品检测方法，样品检测结果，样品检测人，余样处理方法，余样处理人，审核人等内容。DB42/T1786.3—20236车辆样品采集部位示意图小型车监测样品采集部位参见图1。图A.1小型车监测样品采集部位示意图货车等大型车监测样品采集部位参见图2。图A.2大型车监测样品采集部位示意图DB42/T1786.3—20237种猪群样品采集数量计算公式群内个体数量大，对抽样数量的影响可忽略不计时，采样数量的公式如下：P——预期流行率；z——来自标准正态分布1-α/2百分位点。对于每一个置信水平，都有一个相应的z值。生物学研究中，常用的置信水平为90%、95%、99%，其对应的z值分别是1.64、1.96、2.58，也可以选择其他不同的置信水平，其对应的z值可通过查表获得