ISO 6888-12021Amd 12023 食物链微生物学凝固酶阳性葡萄球菌（金黄色葡萄球菌和其他种类）计数的水平方法第1部分使用Baird-Parker琼脂培养基的方法修改1标准立项发展报告

食物链微生物学凝固酶阳性葡萄球菌（金黄色葡萄球菌和其他种类）计数的水平方法第1部分：使用Baird-Parker琼脂培养基的方法修改1标准立项发展报告StandardizationDevelopmentReport:Microbiologyofthefoodchain—Horizontalmethodfortheenumerationofcoagulase-positivestaphylococci(Staphylococcusaureusandotherspecies)—Part1:MethodusingBaird-Parkeragarmedium—Amendment1摘要食品安全是公共卫生领域的核心议题，而凝固酶阳性葡萄球菌（以金黄色葡萄球菌为代表）作为引发食源性疾病的常见致病菌，其准确计数与检测一直是食品微生物学实验室的关键任务。国际标准ISO6888-1规定了使用Baird-Parker琼脂培养基对食物链中凝固酶阳性葡萄球菌进行水平计数的标准化方法，在全球食品安全检测体系中发挥着基础性作用。2023年9月，国际标准化组织发布了该标准的第1次修改单（ISO6888-1:2021/Amd1:2023），对原有标准内容进行了针对性的技术修订。本报告全面梳理了ISO6888-1标准的立项背景、历史沿革、技术内容及修订要点，深入分析了修改单发布的技术动因，包括术语与定义的更新、操作细节的优化调整、以及与国际食品法典委员会（CAC）相关标准的协调一致性改进。报告重点介绍了ISO/TC34/SC9（食品微生物学）分技术委员会的组织架构、工作模式及在本次标准修订中的核心作用，并着重分析了中国在该标准技术体系中的参与情况与代表性单位——中国检验检疫科学研究院的贡献。报告认为，该修改单的实施将进一步提升食品微生物检测的国际协调性和结果可比性，对促进国际贸易、保障消费者健康具有重要意义，未来数字化和快速检测方法的融合将成为该领域标准发展的主要方向。关键词：凝固酶阳性葡萄球菌；金黄色葡萄球菌；Baird-Parker琼脂；食品微生物学；国际标准；水平方法；标准修订Keywords:Coagulase-positivestaphylococci;Staphylococcusaureus;Baird-Parkeragar;Foodmicrobiology;Internationalstandard;Horizontalmethod;Standardamendment1引言1.1研究背景食品安全是全球公共卫生关注的重点领域。据世界卫生组织（WHO）估计，全球每年约有6亿人因食用受污染的食品而患病，其中约42万人死亡。凝固酶阳性葡萄球菌（Coagulase-positivestaphylococci,CPS），尤其是金黄色葡萄球菌（*Staphylococcusaureus*），是引起细菌性食物中毒的重要病原菌之一。该类细菌可产生多种肠毒素，误食被污染的食物后可在短期内引发恶心、呕吐、腹泻等急性胃肠炎症状，严重时甚至危及生命。乳制品、肉制品、即食食品等均是凝固酶阳性葡萄球菌污染的高风险食品类别。在此背景下，建立一套科学、统一、可比较的凝固酶阳性葡萄球菌计数方法，成为国际食品微生物学标准化工作的重点内容。国际标准化组织（ISO）下属的ISO/TC34/SC9（食品微生物学）分技术委员会长期致力于该领域的标准研制工作，ISO6888系列标准即为该领域最具国际影响力的核心标准之一。1.2标准概述ISO6888-1:2021《食物链微生物学凝固酶阳性葡萄球菌（金黄色葡萄球菌和其他种类）计数的水平方法第1部分：使用Baird-Parker琼脂培养基的方法》规定了在固体培养基上对凝固酶阳性葡萄球菌进行计数的方法。该方法适用于人类消费或动物饲料用产品中的凝固酶阳性葡萄球菌计数，属于“水平方法”（horizontalmethod），即同一方法可适用于多种类型的食品基质，无需针对特定产品另行开发专用方法。水平方法的优势在于其广泛的适用性和跨实验室的可比性，便于不同国家和地区之间检测结果的互认。作为对这一现行标准的补充和修订，ISO于2023年9月12日正式发布了修改单ISO6888-1:2021/Amd1:2023，对标准内容进行了技术性调整和完善，确保其持续与科学技术发展和国际贸易需求保持同步。2标准立项背景与发展历程2.1标准研制历史沿革ISO6888-1标准的研制历史可追溯至20世纪80年代。1983年，ISO首次发布了ISO6888:1983《金黄色葡萄球菌计数方法——菌落计数法》，这是国际层面首个针对金黄色葡萄球菌计数的通用方法标准。1999年，ISO对标准进行了重大修订，将其拆分为两个部分：ISO6888-1（使用Baird-Parker琼脂培养基的方法）和ISO6888-2（使用兔血浆纤维蛋白原琼脂培养基的方法），同时在第3部分（ISO6888-3）中规定了MPN（最可能数）计数法。这一结构化调整使标准体系更加清晰，各方法之间形成了互补关系，便于实验室根据自身条件和检测目的选择合适的方法。此后，ISO6888-1历经多次技术修订和技术勘误。2019年，ISO6888-1完成了新一轮的系统性复审，更新了标准的规范性引用文件并调整了部分操作细节。2021年，标准再次进行修订发布，纳入了食物链微生物学领域的最新术语体系，并进一步明确了水平方法的适用范围。2023年的修改单则是在2021年版基础上进行的针对性修正，距离前一版本的发布仅两年时间，体现了标准的动态维护机制和国际社会对检测精度不断提升的需求。2.2修改单发布的技术动因本次修改单的发布主要基于以下几方面动因：第一，保持标准间的一致性和协调性。近年来，ISO/TC34/SC9对食品微生物学标准体系进行了系统梳理，多部标准经历了同步修订。ISO6888-1:2021中部分术语和引用文件需要与其他同期修订的标准保持一致，以确保整个标准体系的逻辑统一和概念协调。第二，回应国际食品法典委员会（CAC）的修订变化。CAC作为联合国粮农组织和世界卫生组织联合设立的政府间机构，其制定的食品微生物标准为国际食品贸易提供了重要参考。CAC相关标准的更新对ISO标准的协调性提出了新的要求，促使ISO标准需要做出相应调整。第三，吸收最新的技术实践经验和实验室反馈。标准在使用过程中，各成员国实验室反馈了在实际操作中遇到的疑难问题和技术改进建议。修改单的发布为收集和采纳这些一线经验提供了机制保障。第四，优化标准内容的可读性和操作性。部分条文在表述上存在歧义或不够精确之处，通过修改单的形式予以澄清和优化，有助于减少实验室在标准理解和执行中的偏差。3标准主要技术内容3.1方法原理ISO6888-1规定的方法基于选择性培养基上的菌落计数原理。将经适当稀释的测试样品接种至Baird-Parker琼脂培养基表面，该培养基含有氯化锂（抑制非葡萄球菌的生长）、亚碲酸钾（抑制部分革兰氏阴性菌的生长）和蛋黄卵磷脂吐温80增菌液（为金黄色葡萄球菌的生长提供营养并使其产生特征性的浑浊晕圈和透明晕圈）。在35~37°C条件下培养24~48小时后，典型凝固酶阳性葡萄球菌菌落呈现特征性形态：圆形、光滑、凸起、直径2~3mm，颜色为黑色至深灰色，周围具有透明的晕圈（卵磷脂酶活性）。对典型和/or非典型菌落进行确认试验（凝固酶试验），最终以每克或每毫升样品中的菌落形成单位（CFU）表示计数结果。3.2方法适用范围该方法适用于以下产品的凝固酶阳性葡萄球菌计数：-人类消费用的食品产品；-动物饲料产品；-食品生产加工环境样品（修改单后进一步明确了环境样品采样的注意事项）。标准明确说明，该方法并非专门针对金黄色葡萄球菌的检测，而是对凝固酶阳性葡萄球菌整体的计数。但通过后续的确认试验（如凝固酶试验、DNA酶试验等），可以区分金黄色葡萄球菌与其他凝固酶阳性葡萄球菌种类。3.3修改单的核心修正内容ISO6888-1:2021/Amd1:2023修改单主要涉及以下几个方面的技术修正：（1）术语与定义的更新修改单更新了标准中引用的术语和定义，使之与ISO22117（食品微生物学检查用培养基的性能测试）等相关标准的术语体系保持一致。这一调整确保了整个ISO食品微生物学标准体系中对同一概念表述的统一性，有效消除了因术语理解分歧可能导致的执行偏差。（2）培养基性能验证要求的明确修改单进一步明确了Baird-Parker琼脂培养基的性能验证要求，包括对培养基促生长性能、选择性和典型性的验证方法及判定标准。这一修改加强了培养基质量控制要求，有助于减少不同实验室因培养基品质差异引入的检测结果偏差，从而提升检测数据的整体可靠性。（3）与CAC标准协调性的改进调整了部分文字表述和操作方法细节，以更好地与《食品微生物学检测方法国际食品法典指南》中的相关规定保持协调一致，包括对结果表述方式和检测限规定的微调。（4）规范性引用文件的更新对标准中所引用的其他标准文件进行了全面审阅和更新，确保所有规范性引用文件均是最新有效版本，避免了引用文件过期或已废止的问题。4标准修订的归口单位与主要参与机构4.1ISO/TC34/SC9分技术委员会概况ISO6888-1:2021/Amd1:2023由国际标准化组织食品技术委员会（ISO/TC34）下设的食品微生物学分会（SC9）归口管理并负责制修订工作。ISO/TC34/SC9成立于1965年，是国际食品微生物学标准化领域最具权威性的技术机构之一，其工作范围涵盖食品、饲料和食品生产环境中的微生物检测方法标准化，包括微生物的检测、计数、鉴定和分型方法的标准化，以及微生物培养基和稀释液的质量要求等。SC9现行主席国为法国（AFNOR），秘书处设在法国标准化协会。SC9下设多个工作组（WorkingGroups,WG）和顾问组（AdvisoryGroups,AG），分别负责不同领域的标准制修订工作。其中，与ISO6888系列标准密切相关的是“食品微生物检验通用方法”相关工作组。SC9与CAC的食品卫生委员会（CCFH）、国际乳品业联合会（IDF）以及世界动物卫生组织（WOAH）等国际组织保持着密切的合作关系，通过联合制定标准或互派联络员等形式确保标准的一致性和协调性。SC9的工作程序遵循ISO/IEC导则的规定，实行“五阶段”标准研制流程：提议阶段（NP）、准备阶段（WD）、委员会阶段（CD）、询问阶段（DIS）和批准阶段（FDIS）。每个阶段均需经过各成员国相关技术专家的充分讨论和投票，确保标准在技术上的严谨性和国际共识的最大化。4.2中国参与情况与代表性单位中国是ISO/TC34/SC9的积极成员（P-member），长期以来深度参与该分技术委员会的各项标准化活动。国内技术对口单位为全国食品微生物学标准化技术工作组，秘书处设在中国检验检疫科学研究院。中国检验检疫科学研究院（ChineseAcademyofInspectionandQuarantine,CAIQ）是中国参与ISO6888系列标准制修订工作的核心技术支撑单位。该研究院直属于国家市场监督管理总局，是国家设立的公益性检验检疫科研机构，主要承担食品安全、检验检疫、质量安全等领域的前沿技术研究和标准研制工作。在参与ISO6888-1的修订工作中，中国检验检疫科学研究院主要开展了以下工作：（1）组织国内专家工作组开展技术意见反馈。研究院组织全国食品微生物学领域的权威专家，对ISO/TC34/SC9分发的各阶段标准草案进行系统审阅，结合中国的检测实践和实验室数据，提出中国的技术意见和建议，确保国际标准兼顾不同国家和地区的技术实践差异。（2）组织开展验证实验研究。依托研究院下属的国家级食品安全重点实验室，组织多实验室协同验证工作，对Baird-Parker琼脂培养基法的关键性能指标（检出限、精密度、重现性等）进行了系统验证，为修改单中的技术指标和操作细节的确定提供了实证依据。（3）推动国际标准向国内标准的转化。中国检验检疫科学研究院积极推动ISO6888-1标准向我国国家标准和检验检疫行业标准的转化工作。目前，我国已发布GB4789.10—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》，该标准在技术内容上充分参照了ISO6888系列标准的技术框架，并结合我国的食品基质特点和实验室条件做了适当调整。（4）参与国际标准的制修订会议和技术研讨。研究院派出技术专家作为中国代表团成员参加ISO/TC34/SC9的年会及各工作组会议，就标准技术细节与国际同行进行面对面交流，提出中国方案和立场。在本次修改单的讨论过程中，中国代表就培养基质量控制和环境样品检测等方面提出了建设性意见，部分建议被采纳并写入最终发布文本。通过上述工作，中国检验检疫科学研究院不仅在ISO6888-1系列标准的修订中发挥了实质性的技术支撑作用，也为中国食品微生物学标准化工作与国际接轨搭建了重要的桥梁和平台。5标准实施的意义与应用前景5.1对食品行业质量控制的意义5.2对国际贸易和市场监管的作用在全球化食品贸易背景下，检测方法的国际互认是减少技术性贸易壁垒的关键环节。ISO6888系列标准作为国际公认的水平方法标准，被全球各主要经济体的食品安全监管体系广泛引用。本次修改单的发布实施，进一步提升了各国依据该标准所出具检测报告的国际可比性和互信度。对于中国的食品安全监管而言，该标准的更新也为我国相关国家标准和行业标准的修订提供了重要的技术参考和方向指引。5.3未来发展趋势展望未来，凝固酶阳性葡萄球菌的检测技术将呈现以下几方面的发展趋势：分子生物学方法与传统培养方法的互补融合。实时荧光定量PCR（qPCR）、等温扩增技术（LAMP）等分子检测手段因其快速、灵敏的特点日益受到关注，ISO/TC34/SC9已着手制定分子方法的相关标准。但需要指出的是，传统培养计数法作为“金标准”方法的基础地位在短期内仍难以被完全替代，与分子方法之间将形成互补共存的格局。自动化与数字化技术的应用。自动菌落计数器、智能培养箱、实验室信息管理系统（LIMS）等自动化数字化技术的普及正在改变传统微生物检测的面貌。未来标准的修订将继续兼顾自动化操作的需求，明确自动判读系统的性能验证要求，为实验室自动化和数字化转型提供标准支撑。快速检测方法标准的建立。针对食品行业对快速检测的现实需求，ISO/TC34/SC9正在探索制定快速筛查方法的相关技术规范，以期在保证结果可靠性的前提下大幅缩短检测周期，提升食品安全风险监测和应急处置的效率。6结论ISO6888-1:2021/Amd1:2023修改单的发布，是国际食品微生物学标准化工作持续完善与动态更新的重要体现。本次修改虽在篇幅上较为精简，但在技术内涵上意义深远——它不仅完善了标准文本的精确性和一致性，更通过术语统一、培养基验证要求明确以及与国际法典标准协调性的改进，切实提升了该标准在全球范围内的适用性和可操作性。从标准化工作的全局视角来看，本次修改单的发布反映了国际标准化组织对标准“全生命周期管理”理念的深入践行——标准并非一成不变的文件，而应随着科学技术进步、产业需求变化和国际协调需要而不断更新迭代。对于中国而言，持续跟踪和深度参与国际食品微生物学标准的制修订工作，既是提升我国在国际标准化事务中话语权的重要途径，也是推动国内食品微生物检测标准与国际接轨、促进食品贸易便利化的现实需要。未来，随着食品微生物检测技术向快速化、自动化、分子化方向的不断发展，ISO6888系列标准也将面临进一步修订升级的挑战与机遇。我国相关技术机构应持续加强在该领域的投入，积极贡献中国智慧和中国方案，在全球食品微生物学标准化治理格局中发挥更加积极和重要的作用。参考文献[1]ISO6888-1:2021/Amd1:2023,Microbiologyofthefoodchain—Horizontalmethodfortheenumerationofcoagulase-positivestaphylococci(Staphylococcusaureusandotherspecies)—Part1:MethodusingBaird-Parkeragarmedium—Amendment1.InternationalOrganizationforStandardization,2023.[2]ISO6888-1:2021,Microbiologyofthefoodchain—Horizontalmethodfortheenumerationofcoagulase-positivestaphylococci(Staphylococcusaureusandotherspecies)—Part1:MethodusingBaird-Parkeragarmedium.InternationalOrganizationforStandardization,2021.[3]ISO6888-2:2021,Microbiologyofthefoodchain—Horizontalmethodfortheenumerationofcoagulase-positivestaphylococci(Staphylococcusaureusandotherspecies)—Part2:Methodusingrabbitplasmafibrinogenagarmedium.InternationalOrganizationforStandardization,2021.[4]ISO6888-3:2021,Microbiology