培养基存储有效期确认方案

培养基存储有效期确认方案1.人员与职责1.1确认参与人员本次确认工作小组的成员如下：确认工作小组职责范围成员岗位组长

组员

组员

1.2职责说明人员职责分工确认工作小组组长1.负责起草或安排人员起草方案2.负责安排与协调考察工作的实施3.对确认中出现的变更、偏差提出初步处理意见4.负责分析评价考察数据5.负责撰写或安排人员撰写确认报告组员1.在组长的指导下按照方案实施确认工作2.负责确认中所需资源（水、电、汽等）的供给3.负责确认中所有仪器仪表、衡器的校验及其文件管理4.负责收集整理确认过程中产生的数据记录并汇总至组长5.负责将确认中出现的变更、偏差及时报告给组长6进行确认中出现的异常情况（如变更、偏差）的调查处理

2.概述培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节。计数测定用培养基的促生长能力是微生物限度检查结果判断的重要影响因素，控制菌检查用培养基也可能由于其促生长能力、指示能力、抑制能力的差异，从而对菌落颜色、形态等指标存在较大差异，影响结果判断的客观性。培养基适用性检查是通过检验用培养基与对照培养基的比较，以阳性菌的生长状态或特征来评价检验用培养基是否符合检验要求。为了提高工作效率并确保培养基质量，本公司采用北京三药科技开发公司提供的脱水干粉培养基，通过规定的配制方法进行配制后储存在规定的容器中，在相应的条件下保存，本次考察培养基储存时间为3个月。培养基配制完成后0~10天内进行培养基适用性考察，若质量符合规定，则将该批培养基继续留存；否则剩余培养基全部销毁。培养基配制完成后40~50天进行培养基适用性考察，若质量符合规定，则将该批培养基继续留存；否则剩余培养基全部销毁。培养基配制完成后92～100天进行培养基适用性考察，无论质量是否符合规定都结束该批次的培养基效期考察。对剩余培养基进行销毁处理。

3.目的本公司日常使用的培养基有胰酪大豆胨琼脂培养基、R2A琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基、哥伦比亚琼脂培养基、硫乙醇酸盐流体培养基。制定本方案用以考察和确认微生物实验室中使用到的灭菌培养基的质量以及使用效期。保证培养基贮存于规定的条件下在有效期内其质量符合使用要求。

4.适用范围适用于本公司实验室日常使用的各类培养基。

5.考察程序5.1培养基配制考察培养基：取脱水培养基按生产厂家的操作说明进行配制，分装于蓝盖培养基瓶中，按说明书规定温度和时间进行灭菌，贮存于2～8℃的药品保存箱中。对照培养基：本公司采用的对照培养基为中检院提供的对照培养基，在进行配制时按对照培养基上的配制说明进行配制。5.2培养基效期考察项目及可接受标准根据培养基的用途不同，考察的项目也有所不同。需要考察的项目包括：外观、pH、无菌性、促生长能力、以及灵敏度测试等。首先每种培养基需要测定无菌性，且可接受标准均是：无菌落生长每种培养基外观和pH测定可接受标准如下：培养基名称考察项目可接受标准胰酪大豆胨琼脂培养基外观

土黄色,无结晶,无涟漪,无裂痕R2A琼脂培养基浅黄色,无结晶,无涟漪,无裂痕沙氏葡萄糖琼脂培养基淡褐色,无结晶,无涟漪,无裂痕胰酪大豆胨液体培养基黄色澄清液体哥伦比亚琼脂培养基淡黄色,无结晶,无涟漪,无裂痕硫乙醇酸盐流体培养基淡黄色澄清液体,液面红色超过1/3时,要加热驱氧。若全部呈现红色,培养基不可用。

每种培养基适用性考察项目及可接受标准如下：培养基名称考察项目可接受标准胰酪大豆胨琼脂培养基促生长能力回收率为0.5~2.0pH7.3±0.2R2A琼脂培养基促生长能力回收率为0.5~2.0pH7.2±0.2胰酪大豆胨液体培养基促生长能力浑浊pH7.3±0.2沙氏葡萄糖琼脂培养基促生长能力回收率为0.5~2.0pH5.6±0.2哥伦比亚琼脂培养基促生长能力菌落生长良好pH7.3±0.2硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度试验浑浊pH7.1±0.2每种培养基适用性考察项目所需菌种及培养条件如下：培养基项目菌种&要求培养条件胰酪大豆胨琼脂培养基/TSA无菌性随机取1个单位30~35℃，≥5d促生长能力金黄色葡萄球菌，≤100cfu铜绿假单胞菌，≤100cfu枯草芽孢杆菌，≤100cfu大肠埃希菌，≤100cfu白色念珠菌，≤100cfu黑曲霉，≤100cfu30~35℃，≤3d胰酪大豆胨液体培养基/TSB（无菌用）无菌性随机取5个单位20~25℃，≥14d促生长能力（灵敏度试验）枯草芽孢杆菌，≤100cfu白色念珠菌，≤100cfu黑曲霉，≤100cfu20~25℃，≤5d硫乙醇酸盐流体培养基/FTM（无菌用）无菌性随机取部分单位30~35℃，≥14d促生长能力（灵敏度试验）金黄色葡萄球菌，≤100cfu铜绿假单胞菌，≤100cfu生孢梭菌，≤100cfu30~35℃，≤3d沙氏葡萄糖琼脂培养基/SDA无菌性随机取1个单位20~25℃，≥7d促生长能力白色念珠菌，≤100cfu黑曲霉，≤100cfu20~25℃，≤5dR2A琼脂培养基/R2A无菌性随机取1个单位30~35℃，≥5d促生长能力金黄色葡萄球菌，≤100cfu铜绿假单胞菌，≤100cfu枯草芽孢杆菌，≤100cfu大肠埃希菌，≤100cfu白色念珠菌，≤100cfu黑曲霉，≤100cfu30~35℃，≤5d哥伦比亚琼脂培养基/COA无菌性随机取1个单位30~35℃，≥7d促生长能力生孢梭菌，≤100cfu30~35℃，≤3d5.3制备和使用菌种：取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的斜面培养物（不超过4代），划线于胰酪大豆胨琼脂培养基中置30-35℃的培养箱中培养18-24h,用无菌接种环挑取适量菌置含有适量pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液的无菌试管中，制成适宜浓度的菌悬液。（如制备的菌悬液浓度过大，可用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液10稀释至适宜浓度）取生孢梭菌的斜面培养物（不超过4代），划线于哥伦比亚琼脂培养基中置30-35℃的培养箱中培养18-24h,用无菌接种环挑取适量菌置含有适量pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液的无菌试管中，制成适宜浓度的菌悬液。（如制备的菌悬液浓度过大，可用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液10稀释至适宜浓度）

取白色念珠菌的斜面培养物（不超过4代），划线于沙氏葡萄糖琼脂培养基中置20～25℃的培养箱中培养2-3天,用无菌接种环挑取适量菌置含有适量pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液的无菌试管中，制成适宜浓度的菌悬液。（如制备的菌悬液浓度过大，可用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液10稀释至适宜浓度）取黑曲霉的斜面培养物（不超过4代），划线于沙氏葡萄糖琼脂培养基中置20-25℃的培养箱中培养5-7天，取黑曲霉的新鲜培养物置含有适量0.05%聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，将孢子洗脱后，然后采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，制成适宜浓度的菌悬液。（如制备的菌悬液浓度过大，可用0.05%聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10稀释至适宜浓度）菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2〜8°C,可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2〜8°C，在验证过的贮存期内使用。5.4操作固体培养基促生长能力检查：每皿接种试验菌1ml（含菌数50~100cfu），每种菌平行接种2个皿，倾注对照培养基，被检培养基同法操作；混匀，凝固后在相应试验菌检查规定的培养基温度及最短培养基时间下培养。与对照培养基比较，被检培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致且回收率合格。液体培养基促生长能力检查：取不大于100cfu的试验菌株分别接种于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养基温度及最短培养基时间下培养。增菌培养基多为澄清液体培养