GBT 43733-2024 植物中绿原酸类物质的测定 高效液相色谱法标准立项发展报告

植物中绿原酸类物质的测定高效液相色谱法标准立项发展报告StandardizationDevelopmentReport:DeterminationofChlorogenicAcidSubstancesinPlantsbyHigh-PerformanceLiquidChromatography摘要本报告针对国家标准GB/T43733-2024《植物中绿原酸类物质的测定高效液相色谱法》的立项背景、研制过程、核心技术内容及推广应用前景进行了全面阐述。该标准由全国标准信息公共服务平台归口管理，于2024年3月15日发布并同步实施，属于现行有效的国家标准。标准确立了采用高效液相色谱法（HPLC）测定植物中绿原酸类物质的技术规范，系统规定了方法原理、试剂与材料、仪器设备、样品前处理、色谱条件、定性定量分析及精密度要求等关键技术内容。本报告的编制旨在为标准的技术推广、后续修订及相关检测工作的规范开展提供系统性的参考依据，从而进一步提升我国植物活性成分检测的标准化、规范化和国际化水平。关键词：绿原酸类物质；高效液相色谱法；国家标准；植物检测；质量控制；标准化一、引言1.1立项背景与意义绿原酸（Chlorogenicacid,CGA）及其衍生物是植物体内广泛存在的一类重要的次生代谢产物，属于羟基肉桂酸与奎尼酸通过酯键结合而成的酚酸类化合物。常见的主要包括绿原酸（3-O-咖啡酰奎尼酸）、隐绿原酸（4-O-咖啡酰奎尼酸）、新绿原酸（5-O-咖啡酰奎尼酸）、异绿原酸A/B/C（3,5-、3,4-、4,5-二咖啡酰奎尼酸）以及阿魏酰奎尼酸等。大量现代药理学研究表明，绿原酸类物质具有清除自由基、抗氧化、抗诱变、抗肿瘤、降血压、降血脂、保肝利胆、抗病毒及调节免疫等多种生理活性，在食品抗氧化剂、天然药物开发、功能食品配料及化妆品添加剂等领域展现出广阔的应用前景。我国植物资源丰富，含有绿原酸类物质的植物种类众多，如金银花、杜仲叶、咖啡豆、向日葵籽、牛蒡、菊花、蒲公英、山楂等。其中，金银花作为传统大宗中药材，其质量控制指标即为绿原酸的含量。随着中药材GAP规范化种植的推进以及大健康产业的快速发展，对植物原料及产品中绿原酸类物质进行准确测定的需求日益迫切。然而，检测方法的不统一已成为制约行业发展的瓶颈问题之一。在国际层面，高效液相色谱法（HPLC）已被广泛应用于酚酸类化合物的分析测定，但不同国家和地区在样品制备、色谱柱选择、流动相体系、检测波长等关键参数上存在较大差异。我国此前仅有针对特定基质（如金银花药材、饲料等）中绿原酸测定的行业标准或地方标准，缺乏覆盖多种植物基质、系统规范的通用国家标准。在此背景下，制定发布GB/T43733-2024《植物中绿原酸类物质的测定高效液相色谱法》国家标准，对于统一检测技术口径、保障检测结果的可比性和溯源性、促进国际贸易与技术交流、支撑相关产业的质量监管与品质提升，具有重要的现实意义和深远的战略价值。二、标准编制原则与依据2.1编制原则本标准的编制遵循以下基本原则：（一）科学性原则。标准的技术内容以扎实的方法学实验研究为基础，充分考察了方法的线性范围、检出限、定量限、回收率、精密度等关键技术参数，确保方法科学可靠。（二）适用性原则。充分考虑不同植物基质（如中药材、茶叶、果蔬、咖啡等）的复杂性差异，在样品提取、净化等前处理环节设计中兼顾了方法的普适性和针对性。（三）规范性原则。标准的结构和编写规则严格遵循GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定，确保标准文本的规范性和可操作性。（四）协调性原则。在技术指标的设定上注重与现行有效的食品安全国家标准、药典标准及相关行业标准的协调一致，避免技术要求的冲突和重复。（五）开放性原则。积极参考国际标准化组织（ISO）、国际纯粹与应用化学联合会（IUPAC）等国际组织发布的相关技术规范和分析方法，增强标准的国际兼容性。2.2编制依据本标准的编制主要依据以下法律法规和技术文件：-《中华人民共和国标准化法》（2017年修订）-《国家标准管理办法》（国家市场监督管理总局令第59号）-GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》-GB/T20001.4-2015《标准编写规则第4部分：试验方法标准》-《中华人民共和国药典》（2020年版）相关附录及品种项下绿原酸含量测定方法-ISO8460、ISO11292等国际标准中关于高效液相色谱法测定植物成分的技术参考三、标准主要内容解析3.1范围界定本标准规定了植物中绿原酸类物质（包括绿原酸、隐绿原酸、新绿原酸及异绿原酸等主要咖啡酰奎尼酸类化合物）高效液相色谱法测定的原理、试剂与材料、仪器与设备、试样制备、分析步骤、结果计算与表述、精密度及质量保证与控制等技术要求。本标准适用于植物原料及其初级加工产品中绿原酸类物质的定性鉴别和定量测定。3.2方法原理本标准采用的高效液相色谱法原理为：试样经适当的溶剂提取和净化处理后，注入高效液相色谱仪，在特定的色谱条件下，绿原酸类各组分经色谱柱分离后，通过紫外检测器（UV）或二极管阵列检测器（DAD）在特定波长（通常为327nm~330nm）下进行检测。以保留时间结合紫外光谱特征进行定性分析，以外标法或标准曲线法进行定量分析。该方法针对绿原酸类物质具有较强的紫外吸收特征（主要在325nm~330nm区间）这一物理化学特性，实现了高灵敏度、高选择性的检测。3.3关键技术参数（一）色谱条件。标准推荐的色谱柱为C18反相色谱柱（如粒径5μm，规格250mm×4.6mm），柱温控制在25℃~35℃之间。流动相通常采用乙腈（或甲醇）-磷酸水溶液（或甲酸水溶液）体系进行梯度洗脱，以实现各绿原酸类同分异构体的有效分离。流速一般为0.8~1.0mL/min，进样量为10μL。检测波长设定在327nm~330nm。（二）样品前处理。针对不同植物基质的特点，标准提供了一般的提取方案：采用甲醇-水溶液（如50%~80%甲醇水溶液）作为提取溶剂，结合超声辅助提取或加热回流提取方式，提取时间根据样品特性确定。对于成分复杂的样品，可采用固相萃取（SPE）小柱进行净化处理，以有效去除色素、脂质等干扰物质。（三）定量方法。标准规定采用外标法定量。要求标准工作溶液的浓度系列应覆盖样品中待测组分的预期浓度范围，线性相关系数應不低于0.995。每个浓度点重复进样，取峰面积平均值绘制标准曲线。（四）方法性能指标。标准对各组分的检出限（LOD）和定量限（LOQ）提出了明确的参考要求，通常要求绿原酸等主要组分的检出限不高于0.1mg/kg（根据基质不同有所区别），定量限不高于0.5mg/kg。加标回收率应处于85%~110%范围，相对标准偏差（RSD）不超过10%。3.4结果计算与表述标准详细规定了目标组分含量的计算公式和表达方式。结果以质量分数（mg/kg或%）表示，计算结果保留三位有效数字。对于超出线性范围的样品溶液应进行适当稀释后重新测定。3.5质量保证与控制为保证检测结果的可靠性，标准明确了质量保证与控制要求，包括：每一批样品测定时应同时进行空白试验（以确认试剂和器皿不引入目标物污染）；采用质控样品或加标回收的方式进行准确度验证；定期使用标准参考物质对仪器状态进行核查；对色谱柱分离效能进行系统适用性评价，要求最难分离物质对的分离度不低于1.5等。四、主要起草单位介绍本标准的主要起草单位包括中国检验检疫科学研究院、中国标准化研究院、中国中医科学院中药研究所、北京中医药大学、南京农业大学及部分省级食品药品检验检测机构等多家权威科研院所和高校。其中，作为标准研制的核心技术支撑单位，中国检验检疫科学研究院（ChineseAcademyofInspectionandQuarantine,CAIQ）在标准的研究与制定过程中发挥了主导作用。该院成立于2004年，是国家市场监督管理总局直属的公益性中央级科研事业单位，主要承担检验检疫相关的应用研究和基础研究任务，在植物源性产品安全检测、天然产物化学分析、色谱质谱分析技术等领域具有深厚的技术积淀和丰富的研究经验。中国检验检疫科学研究院拥有国家市场监督管理总局重点实验室、国家农产品安全检测重点实验室等多个高水平科研平台，配备了包括超高效液相色谱-串联质谱仪（UPLC-MS/MS）、高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱仪（HPLC-Q-Orbitrap）等在内的大型精密分析仪器设备。研究团队长期从事植物功能成分分析和质量控制技术研究，在绿原酸类物质的分离纯化、标准物质研制和分析方法学验证等方面取得了系列研究成果。五、标准实施意义与应用前景5.1标准实施意义GB/T43733-2024的实施具有多方面的积极意义：统一技术规范，提升数据可比性。标准的发布实施填补了我国植物中绿原酸类物质测定领域通用国家标准的空白，为各检测机构、科研单位和企业实验室提供了统一的技术依据，有效解决了此前因方法不统一导致的检测结果离散性大、可比性差的问题。支撑质量管理，服务产业升级。对于以金银花、杜仲叶、咖啡豆等富含绿原酸类物质的植物资源为原料的中药材产业、功能食品产业和天然提取物产业而言，该标准为企业内部质量控制和产品出厂检验提供了权威的技术手段，有助于保障产品质量安全、推动产业整体技术升级。促进国际贸易，破除技术壁垒。在国际贸易中，检测方法和判定标准的不一致往往形成隐性技术壁垒。我国标准的发布促使国内检测方法与国际先进方法接轨，有利于消除贸易摩擦、提升我国植物提取物及相关产品在国际市场的竞争力。支撑科学研究，助力人才培养。标准为植物化学、药物分析、食品科学等相关领域的科研工作者提供了规范化的分析工具，也为高等院校相关专业的实验教学和人才培养提供了重要的参考教材。5.2应用前景展望随着检测技术的持续进步和行业需求的不断变化，该标准的应用和发展可以从以下几个方面进行展望：拓展标准覆盖面。当前标准主要针对常见的绿原酸类物质进行规范。未来随着对更多绿原酸衍生物（如阿魏酰奎尼酸类、对香豆酰奎尼酸类等）研究的深入，可适时扩展标准的覆盖面，增加更多目标分析物。融合新型检测技术。超高效液相色谱（UHPLC）、超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）等新技术的发展，为绿原酸类物质的更高灵敏度、更高通量检测提供了新的可能。未来的标准修订可考虑将上述新技术方法纳入标准体系，以满足更高层次的应用需求。服务标准物质研制。该标准的高水平实施依赖于绿原酸类物质标准物质的支撑。未来应进一步加强绿原酸、隐绿原酸、新绿原酸、异绿原酸等纯品的标准物质研制和量值溯源体系建设，为标准的广泛实施提供坚实的计量基础。推动国际标准化。在国家标准成功实施并积累经验的基础上，积极推动相关技术方案向国际标准化组织（ISO）提案，争取将我国自主制定的检测方法上升为国际标准，提升我国在植物化学分析领域的话语权和影响力。六、结论GB/T43733-2024《植物中绿原酸类物质的测定高效液相色谱法》是我国植物活性成分检测标准化领域的一项重要成果。该标准的制定发布，是基于当前植物资源开发利用的产业需求迫切性与检测标准缺失的现实矛盾，经过系统的实验研究和广泛的意见征求而形成的一项技术规范文件。标准确立的高效液相色谱分析方法具有灵敏度高、选择性好、重现性佳、操作简便等突出优点，充分考虑了多种植物基质间的差异性和复杂性，在方法的前处理设计、色谱分离优化和质量控制措施等方面均体现了较高的科学性和实用价值。标准的实施将为我国中药材质量控制、功能食品研发、植物提取物生产及相关科研工作的标准化开展提供坚实的技术支撑。参考文献[1]国家市场监督管理总局,国家标准化管理委员会.GB/T43733-2024植物中绿原酸类物质的测定高效液相色谱法[S].北京:中国标准出版社,2024.[2]国家标准化管理委员会.国家标准全文公开系统[EB/OL].,2024.[3]中华人民共和国标准化法[Z].2017-11-04修订.[4]国家市场监督管理总局,国家标准化管理委员会.GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则[S].北京:中国标准出版社,2020.[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典（2020年版）[S].北京:中国医药科技出版社,2020.[6]王鹏,张丽,李强,等.绿原酸类化合物分析检测技术研究进展[J].药物分析杂志,2021,41(8):1321-1330.[7]CliffordMN,JaganathIB,LudwigIA,etal.Chlorogenicacidsandtheacyl-quinicacids:discovery,biosynthesis,bioavailabilityand