CN119391559A 一种制备产β-半乳糖苷酶乳酸菌透性化细胞及富含低聚半乳糖酸乳的方法 （石河子大学）

CCTCCNO:M20183972018.07.10CCTCCNO:M201910302019.12.09CCTCCNO:M202320252023.10.25一种制备产β-半乳糖苷酶乳酸菌透性化细乳酸菌菌种接种于以乳糖为碳源的MRS培养基酸缓冲液对菌体进行洗涤；加入无菌水重悬菌磷酸盐缓冲液对所述(2)冷冻干燥处理的菌粉样全细胞催化剂可以直接添加入牛乳等食品基质中进行乳糖的原位水解和GOS的合成，为原位制2(3)用灭菌磷酸盐缓冲液对所述(2)冷冻干燥处理的菌粉样品进行复溶，即获得具有β2.根据权利要求1所述的一种制备产β一4.根据权利要求1所述的一种制备产β一半乳糖苷酶6.根据权利要求1所述的一种制备产β一半8.根据权利要求1所述的一种制备产β一半9.一种利用具有β半乳糖苷酶活性的乳酸菌透性化细胞原位制备富含低聚半乳糖酸乳(5)：将商业发酵剂保加利亚乳杆菌(Lactobacillusbulgaricus)、嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)按1g/L的比例添加至所述步骤(4)所得酶处理复原乳中，10.根据权利要求9所述的一种利用具有β半乳糖苷酶活性的乳酸菌透性化细胞原位制3半乳糖基活性，能够水解乳糖并合成GOS。目前商业化β一半乳糖苷酶主要来源于米曲霉(Aspergillusoryzae)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyceslactis)和环状芽孢杆菌报道利用氯仿再经冷冻干燥处理可以制备产β一半乳糖苷酶乳酸克鲁维酵母透性化细胞植物乳杆菌(LactobacillusplantarumMCC2156)的透性化细胞并用于乳糖水解和GOS合用重复冻融的方法处理环状芽孢杆菌(Bacilluscirculans)ATCC31382、米曲霉(Aspergillusoryzae)ATCC20423及拟热带假丝酵母(Candidapseudotropicalis)ATCC的灭菌乳。发明专利CN102369998A使用来自曲霉菌(Aspergillus)、酵母菌34％(w/w)。Wang等人发现经乳酸菌素nisin处理的产β一半乳糖苷酶嗜热链球菌4能否合成GOS(AppliedMicrobiologyand[0004]发明专利CN114258950A使用Nurica乳糖酶加入到热处理后的浓缩牛奶中低温冻干燥技术制备的乳酸菌透性化细胞作为全细胞催化剂直接在牛乳中水解乳糖合成GOS的[0018]一种利用具有β半乳糖苷酶活性的乳酸菌透性化细胞原位制备富含低聚半乳糖酸[0021](5)：将商业发酵剂保加利亚乳杆菌(Lactobacillusbulgaricus)、嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)按1g/L的比例添加至所述步骤(4)所得酶处理复原乳中，5全细胞催化剂可以直接添加入牛乳等食品基质中进行乳糖的原位水解和GOS的合成，为原[0027]下述实例中所用的植物乳植杆菌(Lactobacillusplantarum)YLBGNL一S7来自石号为：CCTCCNO:M2018397，保藏日期为2018年7月10日。开菲尔乳杆菌(Lactobacilluskefiri)L6来自石河子大学食品微生物与生物技术研究中心，并已保藏于中国典型培养物[0029]挑取产β半乳糖苷酶乳酸菌的单菌落，接种于20mL以乳糖为碳源的MRS液体培养[0032]其中所述胞内转糖基β一半乳糖苷酶产生菌优选为植物乳植杆菌(Lactobacillusplantarum)YLBGNL一S7、开菲尔乳杆菌(Lactobacilluskefiri)L6、乳酸片球菌4℃灭菌20min。6[0040]取20μL适当稀释后的粗酶液及冻干粉末与80μL0.1M磷酸缓冲液(pH7.0)配制的邻硝基苯βD半乳糖苷(ONPG)溶液于50℃反应10min，反应结束后加入100μL1mol/L碳[0041]经检测植物乳植杆菌YLBGNL一S7超声破碎提取的粗酶液酶活性可以达到2400±[0047]以1mL12％(w/v)灭菌后的复原乳为基质，向复原乳中加入实施例3中所得的酶处理复原乳。按1g/L的比例加入商业发酵剂(Lactobacillusbulgaricus和[0048]利用高效液相法对不同温度孵育条件下原位制备GOS酸乳进行糖分组成及含量测7[0049]三蒸水将富含GOS发酵酸乳稀释至糖浓度为1用0.22μm滤膜过滤后HPLC进样分孵育条件下富含GOS酸乳进行糖分组成及含量测定如复原乳。按1g/L的比例加入商业发酵剂(Lactobacillusbulgaricus和Streptococcus[0056]三蒸水将富含GOS发酵酸乳稀释至糖浓度为1用0.22μm滤膜过滤后HPLC进样分8酶处理复原乳。按1g/L的比例加入商业发酵剂(Lactobacillusbulgaricus和[0063]三蒸水将富含GOS发酵酸乳稀释至糖浓度为1用0.22μm滤膜过滤后HPLC进样分酵酸乳。利用高效液相法对发酵后获得的富含GOS酸乳与对照发酵乳进行糖分组成及含量[0069]三蒸水将富含GOS发酵酸乳稀释至糖浓度为1用0.22μm滤膜过滤后H