核酸的理化性质专家讲座

核酸理化性质第1页一.普通物理性质1.形态DNA——白色纤维状固体RNA——白色粉末状固体第2页一.普通物理性质2.溶解性微溶于水不溶于乙醇、乙醚和氯仿等普通有机溶剂RNA核蛋白体(RNP)易溶于0.14mol/LNaCl溶液DNP可溶于高浓度(1~2mol/L)NaCl溶液第3页一.普通物理性质DNA溶液粘度极高

(因其分子直径小而长度大)RNA溶液粘度要小得多3.粘度核酸变性或降解后，粘度降低第4页核酸既含有酸性磷酸基团，又含有弱碱性碱基，故可发生两性解离。其解离状态随溶液pH值而改变。二.两性解离因为磷酸基团酸性很强，所以pI较低，整个分子相当于多元酸。利用核酸两性解离能够经过调整核酸溶液pH来沉淀核酸，也可经过电泳分离纯化核酸。第5页嘌呤和嘧啶含有共轭双键，能强烈吸收紫外光。在260nm处有最大吸收峰。对于纯DNA或RNA，能够经过测得A260来推测其核酸含量。纯DNA：A260/A280

=1.8

纯RNA：A260/A280

=2.0三.

紫外吸收性质A260/A280值能够反应核酸纯度。第6页1.变性概念核酸在一些物理或化学原因作用下，其空间结构发生改变，从而引发理化性质改变及生物活性降低或丧失。A260值升高粘度下降沉降系数加紧……

四.变性与复性(一)变性第7页(一)变性2.引发变性原因物理原因：

热（热变性）紫外、辐射等化学原因：

过酸（酸变性） 过碱（碱变性） 有机溶剂 尿素……使氢键断裂，破坏碱基堆集力，从而引发核酸二级结构破坏。第8页(一)变性3.增色效应变性后DNA对260nm紫外光吸收值比变性前显著升高，这种现象称为增色效应。这是因为变性DNA双螺旋解体，藏于螺旋内部碱基暴露出来。增色效应常可用来衡量DNA变性程度。第9页(一)变性4.热变性曲线(熔解曲线)在DNA发生热变性过程中，A260随温度改变曲线。不一样DNA熔解曲线不一样，但很类似。都是——S形曲线变性百分率100500温度A260第10页(一)变性又称熔解温度、熔点5.解链温度(Tm值)(meltingtemperature)指DNA变性到达50%，即增色效应到达二分之一时温度DNATm值普通在70~85℃之间变性百分率100500温度A260Tm第11页(一)变性影响Tm值原因：DNA分子中GC碱基正确含量

DNA分子中GC含量高，则Tm值大5.解链温度(Tm值)DNA溶液环境

如离子强度、pH第12页(一)变性RNA含局部双螺旋，也可发生变性。RNA变性特点： 变性效应不如DNA显著 增色效应跳跃较平缓

Tm值较低第13页变性DNA在适当条件下，又可使两条彼此分开链重新缔合成为双螺旋结构，此过程成为复性。1.复性概念退火：热变性DNA在迟缓冷却条件下复性过程。

（二）复性

四.变性与复性第14页当变性DNA经复性以重新形成双螺旋结构时，其溶液A260值则减小，这种现象称为减色效应。减色效应常可用来衡量DNA复性程度。2.减色效应

四.变性与复性（二）复性第15页不一样起源DNA分子放在一起热变性，然后慢慢冷却，让其复性。这些异源DNA（RNA)之间有互补序列或部分互补序