药品生物检定技术（第2版）课件 第二篇 第六章 异常毒性检查

第六章异常毒性检查目录01概述02异常毒性检查方法学习目标1.掌握异常毒性检查的概念。2.熟悉异常毒性检查的原理。3.了解异常毒性检查的方法。知识目标1.学会按照质量标准规范进行异常毒性检查试验操作。2.能够准确判断异常毒性检查的试验结果。能力目标1.培养严谨负责的科学态度和职业道德。2.增强药品质量安全意识，关注公众用药健康。素养目标第一节概述异常毒性检查法（TestforUnduetoxicity）系给予动物一定剂量的供试品溶液，在规定时间内观察动物出现的异常反应或死亡情况，检查供试品中是否污染外源性毒性物质以及是否存在意外的不安全因素。异常毒性有别于药物本身所具有的毒性特征，是指由生产过程中引人或其他原因所致的毒性。一、概念二、异常毒性检查法的历史随着制药工业的发展与进步，注射剂污染外源性毒性物质以及存在意外不安全因素的可能性逐渐减少，凡是有准确的化学和物理方法或细胞学方法能取代动物试验进行药品质量检测的，原则上均应尽量采用，以减少动物试验。国内企业执行GMP情况及质量保证体系参差不齐，直接彻底取消的时机和条件尚不成熟，存在一定的监管风险，2025年版《中国药典》仍保留异常毒性检查项。《中国药典》（2025年版）一部收载了6个异常毒性检查品种，二部收载62个异常毒性检查品种，三部生物制品收载了52个异常毒性检查品种。三部在5个总论中增加了“根据制品风险评估结果或本身质量属性特点确定质量标准中是否设置异常毒性检查项目”的表述，并在凡例中对如何执行异常毒性检查提出了明确要求，即品种正文设有异常毒性项目的，生产企业可结合风险评估结果与质量控制策略，不作为每批放行的必检项目，但仍需不定期检查。三、异常毒性检查的原理供试品以规定剂量和给药途径注入动物体内，不应造成动物死亡，也不应影响动物的健康状态或其体重的正常增长（指生物制品）；观察期内如果出现动物死亡，显示不健康状态、体重未能正常增长（指生物制品）则表明供试品中存在超量的外源性毒性物质及意外的不安全因素，提示临床应用时可能发生急性不良反应。四、异常毒性检查限值设定异常毒性检查的限值应低于该注射剂本身毒性的最低致死剂量，考虑到实验室间差异、动物反应差异和制剂的差异，建议限值至少应小于LD1，可信限下限的1/3（建议采用1/3-1/6）。如难以计算得最低致死量，可采用小于LD50可信限下限的1/4（建议采用1/4-1/8）。如半数致死量与临床体重剂量之比小于20可采用LD50可信限下限的1/4或LD1可信限下限的1/3。第二节药品异常毒性检查方法

《中国药典》（2025年版）四部规定，非生物制品异常毒性试验采用小鼠试验法，生物制品异常毒性试验可采用小鼠试验法或豚鼠试验法。以动物死亡、显示不健康状态或体重未能正常增长（指生物制品）为指标，判定供试品中是否存在超量的外源性毒性物质及意外的不安全因素。一、试验前准备（一）检查材料1.器材2.试剂3.实验动物应健康合格，在试验前及试验的观察期内，均应按正常饲养条件饲养。做过本试验的动物不得重复使用。（二）检查设备二、操作过程（一）供试液配制按品种项下规定的浓度制成供试品溶液。临用前，供试品溶液应平衡至室温。（二）异常毒性检查法1．非生物制品非生物制品采用小鼠试验法。除另有规定外，取小鼠5只，注射前每只小鼠称重，应为18~22g。每只小鼠静脉注射供试品溶液0.5ml，一般应在4~5秒内匀速注射完毕，规定缓慢注射的品种可延长至30秒。注射后，观察小鼠死亡情况。2．生物制品异常毒性试验包括小鼠和豚鼠试验。试验中应设同批动物空白对照。按照规定的给药途径缓慢注入动物体内。（1）小鼠试验法：除另有规定外，取小鼠5只，注射前每只小鼠称重，应为18~22g。每只小鼠腹腔注射供试品溶液0.5ml，观察7天。（2）豚鼠试验法：除另有规定外，取豚鼠2只，注射前每只称体重，应在250~350g。每只豚鼠腹腔注射供试品5.0ml，观察7天。三、结果判断（一）非生物制品除另有规定外，全部小鼠在给药后48小时内不得有死亡；如有死亡时，应另取体重19~21g的小鼠10只复试，判定标准同前。《中国药典》2025年版二部仅有两个品种例外，一是玻璃酸酶，结果判断为48小时内不得发生皮下组织坏死或死亡现象，如有一只小鼠发生组织坏死或死亡，应按上述方法复试，全部小鼠在48小时内不得有组织坏死或死亡现象；二是右旋糖酐铁注射液，采用体重18~22g的小鼠10只，5天内死亡不得超过3只，否则需另取小鼠20只，重复试验，合并2次实验结果，小鼠死亡总数不得越过10只。（二）生物制品除另有规定外，观察期内，小鼠（豚鼠）应全部健存，且无异常反应，到期时每只小鼠（豚鼠）体重应增加，判定供试品符合规定。如不符合上述要求，应另取体重19~21g的小鼠10只（或250-350g的豚鼠4只）复试一次，判定标准同前。注意：给药后，在规定时间内不引起可能死亡的任何反应不属于异常毒性检查范围，不作为判断结果的依据！四、注意事项（一）试验环境开展异常毒性检查的实验室应具有实验动物使用许可证。准备及进行静脉注射、腹腔注射时，实验室应有足够的照明度。（二）动物要求用于异常毒性检查的动物应购自具有实验动物生产许可证的供应商，并且每批实验动物均具有质量合格证。应对异常毒性检查用动物及笼具进行标记或标识，称重并记录每只动物体重。（三）器具直接接触供试品的器具（称量、溶解、稀释、注射器等）应无菌、无热原，或采用适宜有效的方法除菌除热原。称量都具、溶解、稀释用容量瓶及刻度吸管等，应按规定进行计量检定或较准，满足试验要求。静脉注射时，选择的针头规格应与动物静脉粗细相适应，注射器规格和精度应与给药体积相适应。（四）供试品溶液注射前将供试品溶液的温度平衡至室温；已开启或配制完成的供试品溶液应避免污染，并在30分钟内注射给药；需要使用而品种项下未写明溶解或稀释用溶剂名称和浓度时，溶剂可选择无热原灭菌注射用水或无菌、无热原0.9%氯化钠溶液。（五）试验动物数量1.初试动物数量非生物制品实验中，初试小鼠只数通常为5只；《中国药典》2025年版仅有1个品种例外，二部右旋糖酐铁注射液初试小鼠只数为10只。2.复试动物数量非生物制品实验中，复试小鼠只数通常为10只；《中国药典》2025年版仅有2个品种例外，二部中玻璃酸酶复试小鼠只数为5只，右旋糖酐铁注射液复试小鼠只数为20只。（六）给药1.给药途径非生物制品试验中，小鼠通常为静脉注射给药；《中国药典》2020年版仅有2个品种例外，一部止喘灵注射液为腹腔注射途径给药，二部玻璃酸酶为皮下注射给药。2.给药体积非生物制品试验中，小鼠通常按0.5ml供试品溶液注射给药；《中国药典》2025年版仅有1个品种例外，二部玻璃酸酶为0.25ml供试品溶液皮下注射给药。

生物制品试验中，小鼠通常按0.5mL供试品溶液注射给药，豚鼠通常按5mL供试品溶液注射给药；三部生物制品中，伤寒疫苗、伤寒甲型副伤寒联合疫苗、伤寒乙型副伤寒联合疫苗，每只豚鼠的注射剂量为1.5mL；人凝血因子VⅢ，豚鼠注射剂量为每只15IU，小鼠注射剂量每只为1.5IU。3.注射给药（1）应对安瓶颈部、针头穿刺的瓶塞等部位进行消毒。静脉注射的部位最好从远心端开始选择。（2）静脉注射时，针头应斜面向上，进入静脉后再向前插入适宜距离，以免注射时药液渗漏。（3）应按品种项下规定的时间或速度，将规定剂量的供试品溶液全