《兽药中非法添加药物快速筛查法（液相色谱-二极管阵列法）》

附件1

兽药中非法添加药物快速筛查法

（液相色谱—二极管阵列法）

1适用范围

1.1本方法适用于兽药中紫外光谱图库中所列非法添加药物的筛查。

1.2用于紫外光谱图库之外的具有紫外吸收的非法添加药物的筛查时，需进行空

白试验和检测限测定，并测定对照品溶液的紫外光谱图。

2检查方法

按照高效液相色谱法（《中国兽药典》一部附录0512）测定。

2.1超高效液相色谱—二极管阵列法

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（ACQUITY

UPLCHSST3，1.8µm，2.1×100mm）；以水-1mol/L醋酸铵溶液（取醋酸铵77g，加水

至1000ml，用冰醋酸调节pH值至5.0）（99∶1）为流动相A，甲醇-1mol/L醋酸铵溶

液（99∶1）为流动相B，按下表进行线性梯度洗脱；流速每分钟0.45ml；二极管阵

列检测器，采集波长范围为200nm~400nm，分辨率为1.2nm，提取波长按需设定（如

230nm、270nm、最大值图等）。

时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）

0.00982

0.25982

12.25199

13.00199

13.01982

17.00982

供试品溶液的配制中药固体制剂取50mg，加50%甲醇溶液10ml，超声10

分钟（必要时可调整）；

中药液体制剂取10µl~20µl，加50%甲醇溶液10ml，摇匀；

化药液体制剂取20µl，加50%甲醇溶液10ml，摇匀；

其他化药制剂取50mg，加50%甲醇溶液10ml，超声10分钟（必要时可调整），

—2—

用50%甲醇溶液稀释制成每1ml中约含有效成分50µg~100µg的溶液。

对照品溶液的配制（紫外光谱图库外品种）取对照品适量，用50%甲醇溶液溶

解并稀释制成每1ml中约含50µg~100µg的溶液，溶解性差的对照品，可加适量盐酸

溶液或氢氧化钾溶液使其溶解。

测定法取供试品溶液2µl，注入液相色谱仪，同时记录色谱图与光谱图。通过

与紫外光谱图库中对照光谱图最大吸收波长和图形比对，确定供试品中是否含有相应

药物。可根据实验结果调整进样量或浓度，使紫外光谱图光滑、特征清晰。

结果判定供试品溶液光谱图与紫外光谱图库中对应光谱图无明显差异，判为可

疑阳性结果。筛查结果呈可疑阳性的样品，需按农业农村部发布的兽药质量监督抽检

计划的相关要求，采用补充检查方法进行确证。

2.2液相色谱—二极管阵列法

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（AlltimaC18，

5µm，4.6×250mm）；以磷酸二氢钠溶液（取磷酸二氢钠3.0g，加水1000ml，加三乙

胺0.5ml，用饱和氢氧化钠溶液调pH值至7.0）∶甲醇（70∶30）为流动相；流速每

分钟1.0ml；二极管阵列检测器，采集波长范围为200nm~400nm，分辨率为1.2nm，

提取波长按需设定。

供试品溶液的配制同2.1。

对照品溶液的配制同2.1。

测定法取供试品溶液10µl~20µl注入液相色谱仪，其他同2.1。

结果判定同2.1。

2.3液相色谱—二极管阵列法（磺胺类）

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（AlltimaT3，

5µm，4.6×250mm）；0.2%冰醋酸溶液∶乙腈（70∶30）为流动相；流速每分钟1.0ml；

二极管阵列检测器，采集波长范围为200nm~400nm，分辨率为1.2nm，提取波长按需

设定。

供试品溶液的配制同2.1。

对照品溶液的配制同2.1。

测定法取供试品溶液10µl~20µl注入液相色谱仪，其他同2.1。

结果判定同2.1。

2.4液相色谱—二极管阵列法（氟喹诺酮类）

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（AtlantisC18，

—3—

5µm，4.6×250mm）；以磷酸溶液（取磷酸3ml，加水1000ml，用三乙胺调节pH值至

3.0±0.1，加乙腈53ml，摇匀）为流动相A，乙腈为流动相B，甲醇为流动相C，按下

表进行线性梯度洗脱；流速每分钟1.0ml；二极管阵列检测器，采集波长范围为

200nm~400nm，分辨率为1.2nm，提取波长按需设定。

时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）流动相C（%）

0.0089.66.24.2

30.0089.66.24.2

30.2090100

55.0090100

55.2089.66.24.2

65.0089.66.24.2

供试品溶液的配制同2.1。

对照品溶液的配制同2.1。

测定法取供试品溶液10µl~20µl注入液相色谱仪，其他同2.1。

结果判定同2.1。

附：药物紫外光谱图库

注：编号由品种序号和方法序号组成，-1是指方法2.1，-2是指方法2.2，-3是指

方法2.3，-4是指方法2.4，对应谱图为该方法条件下所得。

—4—

药物紫外光谱图库

最大吸收

名称编号谱图

波长(nm)

001-1273.5

氨茶

碱

001-2271.2

002-1273.5

茶碱

002-2271.2

—5—

003-1275.9

二羟

丙茶

碱

003-2272.4

004-1275.9

己酮

可可

碱

004-2273.6

—6—

硫酸

227.1

沙丁005-1

279.5

胺醇

006-1279.5

特布

他林

006-2279.5

盐酸

氯丙007-1264.0

那林

—7—

260.5

007-2

328.3

盐酸

班布008-1266.4

特罗

235.4

盐酸

261.6

丙卡009-1

298.7

特罗

341.8

异丙

托溴010-1260.4

铵

—8—

211.7

011-1248.5

313.1

盐酸

氨溴

索

245.1

011-2

302.1

210.5

盐酸012-1250.9

溴己309.5

新

012-2不出峰

228.3

盐酸

266.4

二氧013-1

292.7

丙嗪

329.9

—9—

223.9

268.8

013-2

295.0

333.1

水相:有机相40:60

014-1204.5

青霉

素

014-2/

6.392峰1

204.2

0.64

苄星青霉素

0.48

苄星

AU

青霉015-1204.20.32

素

0.16

0.00

200.00250.00300.00350.00400.00

纳米

—10—

6.750峰1

0.40205.4

0.35青霉素V

0.30

0.25

0.20

青霉AU

016-1268.1

素V0.15

0.10

0.05268.1

0.00

200.0250.0300.0350.0400.0

纳米

7.006峰1

0.60205.4

0.50

苯唑西林

0.40

0.30

苯唑AU

017-1205.4

西林0.20

0.10

0.00

200.0250.0300.0350.0400.0

纳米

7.605峰1

204.2

0.64苄星氯唑西林

（氯唑西林峰）

0.48

苄星

氯唑018-1204.2AU0.32

西林

0.16

0.00

200.00250.00300.00350.00400.00

纳米

1.945峰1

0.6204.2

0.5

阿莫西林

0.4229.0

0.3

阿莫229.0AU

019-1

西林272.80.2

0.1

272.8

0.0

200.0250.0300.0350.0400.0

纳米

—11—

头孢237.8

020-1

吡肟259.2

头孢231.8

021-1

丙烯281.9

头孢225.9

022-1

地尼289.1

头孢235.4

023-1

地嗪262.8

—12—

头孢

唑林024-1274.7

头孢

025-1237.8

西丁

头孢

026-1274.7

替唑

头孢

027-1275.9

呋辛

—13—

头孢

呋辛028-1288.7

酯

头孢

029-1234.2

甲肟

头孢266.4

030-1

克洛332.3

头孢234.2

031-1

克肟290.3

—14—

头孢236.6

032-1

喹肟268.8

头孢264.0

033-1

拉定344.1

头孢211.7

034-1

硫脒334.7

头孢

美他035-1236.6

酯

—15—

头孢241.3

036-1

美唑274.7

头孢

271.1

孟多037-1

348.7

酯

头孢

038-1270.0

尼西

头孢230.6

039-1

哌酮270.0

—16—

头孢212.8

040-1

匹胺275.9

头孢231.8

羟氨041-1265.2

苄341.8

头孢239.0

042-1

噻吩329.9

头孢236.6

043-1

噻呋268.8

—17—

头孢

044-1237.8

噻肟

头孢

045-1258.0

他啶

头孢

046-1261.6

替安

4.408峰1

203.0

0.60头孢氨苄

0.45

头孢260.8

AU260.8

047-10.30

氨苄342.7

0.15

342.7

0.00

200.00250.00300.00350.00400.00

纳米

—18—

3.872峰1

0.6204.2233.7

0.5头孢洛宁

0.4

0.3

头孢AU

048-1233.70.2

洛宁

0.1

0.0

200.0250.0300.0350.0400.0

纳米

3.270峰1

0.3242.0

205.4头孢曲松

0.2

头孢AU

049-1242.00.1

曲松

0.0

200.0250.0300.0350.0400.0

纳米

4.389峰1

0.70234.9

205.4

0.60头孢维星

0.50

0.40

头孢AU

050-1234.90.30

维星

0.20

0.10

0.00

200.0250.0300.0350.0400.0

纳米

诺氟280.7

051-1

沙星317.9

—19—

228.6

051-2272.4

323.6

051-4278.5

218.8

052-1274.7

326.3

吡哌

酸

226.3

052-2264.1

331.9

—20—

228.3

053-1

296.3

226.3

氧氟254.6

053-2

沙星287.8

330.7

226.4

053-4

293.9

环丙280.7

054-1

沙星319.1

—21—

271.2

054-2

323.6

278.5

054-4

315.4

212.8

055-1289.1

323.9

洛美

沙星

280.7

055-2

326.0

—22—

288.0

055-4

320.1

210.5

056-1285.5

347.5

达氟056-260分钟不出峰

沙星

283.2

056-4

347.6

沙拉281.9

057-1

沙星321.5

—23—

232.2

057-2273.6

323.6

280.8

057-4

316.6

280.7

058-1

319.1

058-260分钟不出峰

培氟

沙星

277.3

058-4

315.4

—24—

280.7

059-1

319.1

恩诺

沙星059-2120分钟以后出峰

277.3

059-4

315.4

281.9

060-1

321.5

二氟060-260分钟不出峰

沙星

279.7

060-4

316.6

—25—

5.259峰1

297.9

0.6

马波沙星

0.5

0.4

马波225.4AU225.4

061-10.3

沙星297.9

0.2

0.1

0.0

200.0250.0300.0350.0400.0

纳米

氟甲236.6

062-1

喹326.3

7.194峰1

261.0

0.2噁喹酸

219.5

噁喹AU

063-1261.0

酸0.1219.5

321.7321.7

0.0

200.0250.0300.0350.0400.0

纳米

磺胺

064-1268.8

嘧啶

—26—

064-2257.0

064-3267.8

260.4

065-1

287.9

磺胺

噻唑

257.0

065-2

279.5

—27—

258.3

065-3

285.6

066-1267.6

磺胺

二甲

嘧啶

066-3266.6

磺胺

对甲

067-1271.1

氧嘧

啶

—28—

067-2242.8

磺胺

氯达068-1270.0

嗪

069-1270.0

磺胺

甲噁

唑

069-2257.0

—29—

磺胺

间甲

070-1273.5

氧嘧

啶

071-1270.0

磺胺

氯吡

嗪

257.0

071-2

330.7

磺胺

250.9

喹噁072-1

344.1

啉

—30—

251.1

072-2

360.0

1.495峰1

258.6

205.4

0.50

磺胺

0.40

0.30

磺胺AU

073-1258.60.20

0.10

0.00

200.0250.0300.0350.0400.0

纳米

5.874峰1

0.70205.4

0.60

269.3磺胺地索辛

0.50

磺胺0.40

AU

地索074-1269.30.30

辛0.20

0.10

0.00

200.0250.0300.0350.0400.0

纳米

呋喃267.6

075-1

妥因369.1

—31—

274.8

075-2

378.4

261.6

076-1

367.9

呋喃

唑酮

259.3

076-2

363.0

呋喃262.8

077-1

西林377.6

—32—

260.5

077-2

376.0

078-1273.5

甲氧

苄啶

078-2285.4

二甲

氧苄079-1279.5

啶

—33—

079-2284.3

241.3

080-1262.8

377.6

喹乙

醇

238.1

080-2260.5

376.0

242.5

乙酰

081-1259.2

甲喹

377.6

—34—

239.2

081-2255.8

376.0

082-1279.5

氯霉

素

082-2不出峰

227.1

083-1

268.8

甲砜

霉素

223.9

083-2

265.3

—35—

225.9

084-1

268.8

氟苯

尼考

223.9

084-2

265.3

替米085-1291.5

考星

085-2不出峰

万古086-1283.1

霉素

086-2不出峰

—36—

4.742峰1

0.5207.7

0.4林可霉素

0.3

林可AU

087-1207.70.2

霉素

0.1

0.0

200.0250.0300.0350.0400.0

纳米