CN119403532A 用于多种用途的葡萄叶与蜂胶多酚的组合递送体系的生产方法 （雅比菲塔公司）

2024.11.15PCT/EP2023/0539632023.02.16WO2023/222267EN2023.11.23用于多种用途的葡萄叶与蜂胶多酚的组合葡萄叶与蜂胶多酚的组合递送体系的生产方法，使用了包含比率为25_50％/25_50％/25_萄叶切成<0.8mm的部分，混合直至完全地均匀比率为75_25％至50_50无需预先处理，只要将按重量计10％的蜂胶溶解在乙醇中后其含有其以1kg/min的速率分散在以500_3000rpm搅动2将葡萄叶以asyrtiko/athiri/aidani品种2550％/2550％/2550％w/w的比例切碎以1kg/min的速率分散在以5003000rpm搅动的第一容器中的步骤，所述第一容器含将蜂胶粉碎成小于1mm的颗粒的步骤，将按重量计10％的蜂胶溶解在乙醇中而无需预先处理，只要其在溶解后含有大于值小于8％并且总灰分小于10其中每个品种在将按重量计10％的蜂胶溶解在乙醇中的步骤后含有大于2000mg/l没食子酸当5.根据权利要求1至4所述的葡萄叶与蜂胶多酚的组6.根据权利要求1至4所述的葡萄叶与蜂胶多酚的组合递送于3000rpm下搅动2小时的步骤。于4000rpm下搅动3小时的步骤。将蜂胶/环糊精溶剂体系按520％的比率以100ml/sec的速率添加至搅动的第三容器3将所述体系的pH调整至3.56.2的范围的步骤，这导致蜂胶环糊精复合物的一部分后将所述体系在57℃的温度下存储在黑暗容器中的步骤。7.根据权利要求1至6所述的葡萄叶与蜂胶多酚的组并且温度37℃的蒸馏水中，9.根据权利要求8所述的化妆品组合物用于抵消应激11.由前述权利要求1一7中任一项所述的方法获得的葡萄叶与蜂胶多酚的组合递送体12.由前述权利要求1一7中任一项所述的方法获得的葡萄叶与蜂胶多酚的组合递送体13.由前述权利要求1一7中任一项所述的方法获得的葡萄叶与蜂胶多酚的组合递送体4[0001]本发明涉及用于包封和递送源自指定品种的葡萄叶和具体组成的蜂胶的多酚的萄干或作为葡萄果汁(grapejuice)或葡萄汁(mus大并且未被使用——或用于低价值产品——葡萄叶构成具有巨大利用区和季节的不同而变化，使得蜂胶及其提取物的标准化极为困难(Stavropoulou等人，5[0007]葡萄属植物和蜂胶两者的多酚构成重要的生物活性分子，主要对皮肤具有抗氧如微波或超声波辅助提取)可能会导致易受影响的多酚的降解以及最终提取物质量的下率。人们通常认为，来自植物材料(例如葡萄叶)的多酚显示有限的对人体皮肤的渗透。我们的实验室已经创建了一种具有天然无毒溶剂的蜂胶多酚控释体系(WO2017/6验室的专利中描述的，该专利创建了用于制备和稳定控释蜂胶胶体体系的方法酚的组合递送体系的生产方法，其特征在于，使用了比例为25_50％/25_50％/25_50％的且蜂胶的比率为75_25％至50_50无需预先处理，只要将按重量计10％的蜂胶溶解在乙次在仅由天然和安全成分组成的组合脂质体_环糊精体系中同时提取和包封三个指定品种[0022]_在喷雾前收集葡萄叶，并在无光条件下干燥至水分值<8％并且总灰分<10其7[0026]_将葡萄叶/环糊精_溶剂体系以10ml/sec的速率添加到脂质体体系中，使得脂质[0027]_然后将蜂胶/环糊精体系按10_17％的比率以10ml/sec的速率添加到搅动的容器[0028]·然后将蜂胶/环糊精体系按5_20％的比率以100ml/sec的速率添加到现在搅动在30分钟内为25_508小时内为50_75并且在24小时内完全释放，并且将体系在5_7℃[0032]_为了进行蜂胶多酚释放的体外研究，将指定量的胶体置于MW＝1000分子排阻的集样品以及测量其多酚浓度，其中用pH＝7.2并且温度37℃的蒸馏水替换除去的水的量以[0037]·两种载剂与多酚的相互作用提供适当的条件下的受控释放——蜂胶多酚的释8[0049]图2：是通过从细胞计数和对照组中的特定信号检测得到的胶原_III定量条形图[0050]图3：是通过从细胞计数和对照组中的特定信号检测得到的弹性蛋白定量条形图[0051]为了使本领域技术人员能够理解我们的发明，我们接下来详细描述脂质体/环糊精组合载剂中的葡萄叶和蜂胶多酚递送体系[0052]在喷雾前收获葡萄叶并在无光条件下干燥至显示水分值<8％和总灰分<10％。各个品种在将按重量计10％溶解在乙醇中并随后使用Folin_Ciocalteu方法在分光光度计中9[0058]为了制备该体系，首先将葡萄叶以asyrtiko/athiri/aidani25_50％/25_50％/w/w的浓度预先溶解在去离子水中。丙基_β_环糊精或β_环糊精已经以2_10％w/w的浓度质体体系获得1.0_7.5％w/w的浓度。添加完成后，将体系pH调整至5.0_8.0范围并且于[0069]然后将蜂胶/环糊精体系按10_17％的比率以10ml/sec的速率添加到搅动的容器生物利用度和调节酚类化合物的释放速率中特别有效，但应考虑到酚类化合物的浓度越[0074]确定没食子酸当量(GAE)含量是估计组合物总酚化合物含量的众所周知的方法。没食子酸当量可以例如使用Chun和Kim(2004)描述的Folin_Ciocal[0075]然后在37℃下在pH7.2的缓冲溶液中确定多酚的释放速率，并且将体系在5_7℃=7.2并且温度37℃的蒸馏水替换除去的水的量以维持箱体条件。[0082]使用了比率为assyrtiko/athiri/aidanivarieties34/33/33％w/w的葡萄叶。将切碎的叶按8％的比率以1kg/min的速率分散在由去离子水/植物1,3丙二醇75/25组成的值[0090]使用了比率为assyrtiko/athiri/aidanivarieties50/35/15％w/w的葡萄叶。将切碎的叶子按8％的比率以1kg/min的速率分散在由去离子水/植物1,3丙二醇75/25组成值[0099]为了记录蜂胶和葡萄叶多酚组合递送体系(以下简称活性(Active))在化妆品形[0102]将人真皮成纤维细胞以10,000个细胞/孔的2)照射细IIIa和弹性蛋白进行分析。[0103]在BSA于PBS中的溶液中将细胞与对感兴趣的生物标志物具有特异性的一抗(表3)同的采集时间和分辨率(40x物镜)采集每种生物标相对于评估面积和细胞数量(从DAPI细胞核检测图像中计算得出)进行归一化来对每个图[0116]FAOandOIV,FAO_OIVFOCUS2016Tableanddriedgrapes,Paris,2016,ISBN[0117]FAOSTAT.2020.Availableonline:/faostat/en/#data/QC.[0118]KatalinicV,SmoleMozinaS,GeneralicI,SkrozaD,LjubenkovI,KlancnikA.PhenolicProfile,AntioxidantCapacity,andAntimicrobialActivityofLeafExtractsfromSixVitisviniferaL.Varieties,InternationalJournalofFood[0119]SangiovanniE,DiLorenzoC,PiazzaS,ManzoniY,BrunelliC,FumagalliM,MagnavaccaA,MartinelliG,ColomboF,CasiraghiA,MelziG,MarabiniL,RestaniP,Dell'AgliM.VitisviniferaL.LeafExtractInhibitsInVitroMediatorsofInflammationandOxidativeStressInvolvedinInflammatory_BasedSkin[0120]LetsiouS,KapazoglouA,TsaftarisA.TranscriptionalandepigeneticeffectsofVitisviniferaL.leafextractonUV_stressedhumandermalTouriio[0121]MuninΑ,Edwards_LévyF:EncapsulationofNaturalPolyphenolicTouriio[0122]AlonsoC,RubioL,S,MartíM,BarbaC,Fernández_CamposF,CoderchL,ParraJL:Antioxidativeeffectsandpercutaneousabsorptionof[0123]AblaMJ,BangaAK:Quantificationofskinpenetrationofantioxidantsofvaryinglipophilici[0124]Karapetsas,A.,Voulgaridou,G.P.,Konialis,M.,Tsochantaridis,I.,Kynigopoulos,S.,Lambropoulou,M.,Stavropoulou,M.I.,Stathopoulou,K.,Aligiannis,N.,Bozidis,P.,Goussia,A.,Gardikis,K.,Panayiotidis,M.I.,&Pappa,A.PropolisExtractsInhibitUV_InducedPhotodamageinHumanExperimentalInVitroSkin[0125]DeLucaMP,FrancaJR,AugustoF,MacedoF,GrenhoL,CortesME,FaracoGA,MoreiraAN,VagnerR.SantosVR:PropolisVarnish:AntimicrobialPropertiesagainstCariogenicBacteria,CytotoxicityandSustained_ReleaseProfile.BioMedResearchInternational.[0126]BalataG,ElNahasHM,RadwanS:Propolisorganogelasanoveltopicaldeliverysystemfortreatingwounds:DrugDeliver[0127]FrancaJR,DeLucaMP,RibeiroTG,CastilhoRO,MoreiraAN,SantosVR,FaracoAA:Propolis_basedchitosanvarnish:drugdelivery,controlledreleaseandantimicrobialactivityagainstoralpathogenbacteria.MCComplementAltern[0128]Nichols,JA,&Katiyar,SK.Skinphotoprotectionbynaturalpolyphenols:anti_inflammatory,antioxidantandDNArepairmechanisms.Archivesofdermatologicalresearch,3theEncapsulationinBioavailabilityofPhenolicCompounds.Antioxidants(Basel,[0130]FangZ,BhandariB,Encapsulationofpolyphenols_areview,TrendsinFoodScience&Technology,Volume21,Issue1[0131]Figueroa_RoblesA,Antunes_RicardoM,Guajardo_FloresD,Encapsulationofphenoliccompoundswithliposomalimprovementinthecosmeticindustry,InternationalJournalofPharmaceutics,Vo[0132]SongJ,ZongJ,MaC,ChenS,LiH,ZhangD.Microparticlepreparedbychitosancoatingontheextrudedmixtureofcornstarch,resveratrol,andα_amylasecontrolledtheresveratrolrelease.IntJBiolMacromol.31；185:773_[0133]EstévezM,GüellC,DeLamo_CastellvíS,FerrandoM.EncapsulationofDvofikgrapeseedphenolic_richextractwithinW/O/Wemulsionsstabilizedwithcomplexedbiopolymers:Evaluationoftheirstabilityandrelease.FoodChem.2019Dvofik[0134]Paczkowska_WalendowskaM,J,RosiakN,TykarskaE,SzymańskaE,WinnickaK,MA,Cielecka_PiontekJ.BuccalResveratrolDeliverySystemasaPotentialNewConceptforthePeriodontitisTreatment.Pharmaceutics.2021Mar20；13(3):417.doi:10.3390/pharmaceutics13030417.PMID:33804630；PMCID:PMC8003728.[0135]WO2017/089842A1Inventors:GardikisKonstantinos,KoutsianasNikolaos,PateraAnna,DraganiPanagiota,TsoukalasAnagnostis_Ioannis,LetsiouSofia,MethodforPreparingaStableControlled_ReleasePropolisColloidalDispersionSystemforVarious[0136]TaoY,WangD,HuY,HuangY,YuY,WangD:Theimmunologicalenhancementactivityofprop