CN119409834A 用于通过cd39表达细胞的adcc靶向促进和增强t细胞介导的免疫反应的方法和组合物 （北京恩瑞尼生物科技股份有限公司）

202080036163.92020.08.10区大兴生物医药产业基地宝参南街16用于通过CD39表达细胞的ADCC靶向促进和管生成抑制剂等)组合，靶向检查点分子的免疫示这些细胞的消除可为针对肿瘤产生有效免疫细胞毒性T细胞和其他抗肿瘤细胞的肿瘤浸润。本发明不聚焦于尝试抑制CD39作为产生腺苷的2SEQIDNo.33的氨基酸序列组成的CDRL2和由SEQIDNo.34的氨基酸序列组成的CDRL3，(ii)重链可变区，其包含由SEQIDNo.29的氨基酸序列组成的CDRH1、由SEQIDNo.30的氨基酸序列组成的CDRH2和由SEQIDNo.31的氨基酸序列组成的CDR2.如权利要求1所述的抗CD39抗体或其抗原结合片段，所述抗CD39抗体或其抗原结合3.如权利要求1所述的抗CD39抗体或其抗原结合片段，所述抗CD39抗体或其抗原结合4.如权利要求1所述的抗CD39抗体或其抗原结合片段，所述抗CD39抗体或其抗原结合所述抗CD39抗体针对CD39+细胞的抗体依赖性细胞毒性(AD5.如权利要求1至4中任一项所述的抗CD39抗6.如权利要求5所述的抗CD39抗体或其抗原结合片段，其中所述免疫复合物形成通过8.如权利要求1至4中任一项所述的抗CD39抗11.如权利要求1至4中任一项所述的抗CD39抗体或其抗原结合片段，其中所述抗CD3912.如权利要求1至4中任一项所述的抗CD39抗体或其抗原结合片段，其中所述抗CD39抗体或其抗原结合片段包含IgG1或IgG3同种型的F314.如权利要求1至4中任一项所述的抗CD39抗体或其抗原结合片段，其中所述抗CD3915.如权利要求1至4中任一项所述的抗CD39抗体或其抗原结合片段，其中所述抗CD3916.如权利要求1至4中任一项所述的抗CD39抗体或其抗原结合片段，其中所述抗CD39抗体或其抗原结合片段为双特异性的，包含至少一个另外的抗原结合位点用于肿瘤抗原、17.如权利要求16所述的抗CD39抗体或其抗原结合片段，其中所述另外的抗原结合位20.一种如权利要求1至17中任一项所述的抗CD39抗体或其抗原结合片段或如权利要求18所述的药物制剂在制备用于改善患有肿瘤的受试者中的抗肿瘤T细胞免疫性的药物中试者施用所述抗CD39抗体使得肿瘤内CD39高细胞的数量减少，并且增强T细胞浸润至所述21.一种经分离的核酸分子，所述经分离的核24.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求21所述的经分离的核酸，所述宿主细a)表达权利要求1至17中任一项所述的抗CD39抗体b)表达权利要求1至17中任一项所述的抗CD39抗体或其抗原结合片段的重链和轻链多25.一种装置或药盒，所述装置或药盒包含至426.如权利要求25所述的装置或药盒，所述装置或药盒包含标记以检测至少一种抗28.一种产生至少一种权利要求1至17中任一项所述的抗CD39抗体或其抗原结合片段29.至少一种权利要求1至17中任一项所述的抗CD39抗体或其抗原结合片段在制备用30.如权利要求29的用途，其中至少一种抗CD39抗体或其抗原结合片段与所述CD39多31.一种权利要求1至17中任一项所述的抗CD39抗体或其抗原结合片段的药物组合物在制备用于在患有肿瘤的受试者中通过耗减肿瘤内CD39高细胞而改善抗肿瘤T细胞免疫性32.一种权利要求1至17中任一项所述的抗CD39抗体或其抗原结合片段的药物组合物33.一种权利要求1至17中任一项所述的抗CD39抗体或其抗原结合片段的药物组合物在制备用于在患有肿瘤的受试者中减少II型NKT细胞对肿瘤内免疫细胞功能的抑制的药物34.一种权利要求1至17中任一项所述的抗CD39抗体或其抗原结合片段的药物组合物在制备用于在患有肿瘤的受试者中减少调控性T细胞(Treg)对肿瘤内免疫细胞功能的抑制35.一种权利要求1至17中任一项所述的抗CD39抗体或其抗原结合片段的药物组合物在制备用于在患有肿瘤的受试者中减少肿瘤相关巨噬细胞(TAM)对肿瘤内免疫细胞功能的36.一种权利要求1至17中任一项所述的抗CD39抗体或其抗原结合片段在制备用于在的受试者施用足以使得所述肿瘤中的CD39表达细胞537.一种权利要求1至17中任一项所述的抗CD39抗体或其抗原结合片段在制备用于促进受试者的肿瘤中T细胞介导的免疫功能的药物(i)鉴定具有低于预定阈值的肿瘤浸润的肿瘤反应性淋巴细胞程度的癌症受试者，以39.如权利要求31所述的用途，其中所述肿瘤内CD39高细胞选自造血干细胞或祖细胞40.如权利要求31所述的用途，其中所述抗CD39抗体或其抗原结合片段降低一个或多42.一种权利要求1至17中任一项所述的抗CD39抗体或其抗原结合片段在制备用于治43.一种权利要求1至17中任一项所述的抗CD39抗体或其抗原结合片段在制备用于治45.如权利要求44所述的用途，其中所述病毒感染为HIV感染、HBV感染或COVID_19感51.如权利要求42所述的用途，其中所述药物用于与一种或多种检查点分子的一种或53.如权利要求42所述的用途，其中所述药物用于与一种或多种共刺激分子的一种或55.如权利要求42所述的用途，其中所述药物658.如权利要求57所述的用途，其中所述一种或多种先天免疫诱导剂选自由以下组成7[0002]本申请要求2019年8月12日提交的美国临时申请序列号62/885，509的优先权权的抑制性抗体的免疫疗法在晚期癌症中的成功，但相当大比例的患者仍对这些治疗无反胞毒性T细胞的下调或抑制的肿瘤内信号传导至发展通过降低那些细胞自周围血管渗入肿8[0009]已靶向外核苷酸酶CD39以便产生与所述蛋白质相关联的酶促活性的肿瘤内水平体依赖性细胞毒性(ADCC)活性抗CD39抗体靶向那些细胞以用于在肿瘤中消除可用于增加原结合片段包含(i)至少一个抗原结合结构域，所述至少一个抗原结合结构域在一个位点RIIIa结合部分，所述FcγRIIIa结合部分结合FcγRIIIa受体并赋予所述抗CD39抗体针对[0011]进一步提供了许多实施方案，所述实施方案可应用于本发明的任何方面和/或与光强度使用荧光标记的第二抗体来检测(例如仅用于物的稳定性可通过将抗CD39单克隆抗体(mAb)(诸如在2μg/ml或更大)与HCC1739BL细胞孵育不同时间且然后通过荧光缀合的第二抗体检测免疫复合物的存在来测定)；(ii)针对吞；(v)结合至具有选自由图33中所列的CD39氨基酸表位序列组成的组的序列的CD39氨基酸表位；和/或(vi)以与单克隆抗体克隆A1非竞争性或仅部分竞争性结合至CD39的方式结0.1％SDS中在50℃至65℃下洗涤)的核酸序列或核酸编码的氨基酸序列。在又另999％或更大)的CDR。在又另一实施方案中，所述抗CD39抗体或其抗原结合片段包含与SEQ异性地结合人CD39的抗原结合位点的人源化重链和轻链。在又另一实施方案中，所述抗增强T细胞浸润至肿瘤内或减少肿瘤中的T格条件下与编码本文描述的抗CD39抗体或其抗原结合片段的免疫球蛋白重链和/或轻链多肽的核酸的补体杂交；ii)具有在全长上与编码本文描述的抗CD39抗体或其抗原结合片段的免疫球蛋白重链和/或轻链多肽的核酸具有至少约90％同一性的序列；或iii)编码本文描述的抗CD39抗体或其抗原结合片段的免疫球蛋白重链和/或轻链[0015]在又另一方面中，提供一种由本文描述的核酸编码的经分离的免疫球蛋白重链[0020]在又另一方面中，一种产生至少一种如权利要求1至18中任一项所述的抗CD39抗合片段的药物组合物，其中所述抗CD39抗体或其抗原结合片段的施用使得肿瘤内CD39高细胞的数量减少并且增强T细胞浸润至肿瘤内或减少肿瘤中的T细括向患有肿瘤的受试者施用有效量的本文描述的抗CD39抗体或其抗原结合片段的药物组[0024]在又另一方面中，提供一种用于减少II型NKT细胞对肿瘤内免疫细胞功能的抑制[0025]在另一方面中，提供一种用于减少调控性T细胞(Treg)对肿瘤内免疫细胞功能的[0026]在又另一方面中，提供一种用于减少肿瘤相关巨噬细胞(TAM)对肿瘤内免疫细胞有肿瘤的受试者施用足以使得所述肿瘤中的CD39表达细胞减少的量的本文描述的抗CD39[0028]在又另一方面中，提供一种用于促进受试者的肿瘤中的T细胞介导的免疫功能的加肿瘤反应性T细胞浸润肿瘤的量向所述受试者施用本文描述的抗CD39抗体或其抗原结合[0029]如上文描述，进一步提供可应用于本发明的任何方面和/或与本文描述的任何其的一部分，任选地其中所述抗感染疗法为抗病毒疗法(包括染的治疗)、用于结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)的治疗和用于内脏利什曼另一实施方案中，施用所述抗CD39抗体或其抗原结合片段作为涉及一种或多种化学治疗结合部分)、阻断NK和CD8+细胞的HLA_E驱动的抑制的NGK2A检查点抑制剂、STING激动剂、[0030]图1.通过流式细胞术使用人CD39hi人B类淋巴母细胞(HCC1739BL)细胞测量的Ig39_21的亲和力。通过瞬时转染产生的完全人抗CD39抗体克隆Ig39_21如指示连续稀释，[0031]图2.Ig39_21证实针对HCC1739BL细胞的ADCC活性：Luc_报告基因测定。使用度表达人CD39的hCD39转染的Raji细胞(Raji_hCD39hi)或表达低水平的人CD39的hCD39转染的Raji细胞(Raji_hCD39lo)作为靶细胞。使用稳定表达荧光素酶和hCD16a_158V的Jurkat细胞作为效应细胞。在37℃下在5％CO2中将靶细胞与如所指示经连续稀释的Ig39_胞(SK_MEL_28)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为靶细胞。使用稳定表达荧光素酶和hCD16a_158V的Jurkat细胞作为效应细胞。在37℃下在5％CO2中将靶细胞与如所指示经连[0034]图5.CD39赋予靶Raji_hCD3ghi细胞对NK细胞毒性的抗性。使用经CFSE标记的[0035]图6.Ig39_21增强针对Raji_hCDSghi细胞的NK细胞毒性。在37℃下在5％CO2中将37℃下以不同比例(如所指示)与NK_92_CD16V/V效应细胞一起共培养6小时。通过流式细[0036]图7.Ig39_21加强针对hCD3ghi人B类淋巴母细胞(HCC1739BL)细胞的NK细胞毒在37℃下在5％CO2中将CFSE标记的HCC1739BL靶细胞与或不与Ig39_21抗体(10μg/mL)一起测定。将HCC1739BL靶细胞在不存在(Ig39_21WT)或存在岩藻糖基化抑制剂(Ig39_21AF)的定。在37℃下在5％CO2中将CFSE标记的HCC1739BL靶细胞与如所指示经连续稀释的Ig39_488)染色30分钟并通过流式细胞术进行分析。并行使用人IgG1同种型对照抗体(KLH_似的结合亲和力。将Ig39_21WT、Ig39_21AF或NP501_BK如所指示连续稀释并在4℃下与HCC1739BL细胞一起孵育30分钟。然后，在4℃下将细胞用第二抗体(抗人IgG(Fc特异性抗抗体(KLH_hIgG1)。Kd经计算为0.16nM(NP501_BK)、0.29nM(Ig39_21WT)和0.35nM(Ig39_[0041]图12.优化的Ig39_21(NP501_BK)和无岩藻糖基化Ig39_21发挥类IgG1同种型对照抗体(KLH_hIgG1)或完全人抗CD39单克隆抗体(Ig39_21AF或NP501_BK)一[0042]图13.NP501_BK和Ig39_21AF发挥比Ig39_21WT远远更高的ADCC活性：针对HCC1739BL细胞的NK细胞毒性。在37℃下在5指示经连续稀释的人IgG1同种型对照抗体(KLH_hIgG1)或完全人抗CD39单克隆抗体(Ig39_将Raji_hCD39hi靶细胞与经连续稀释的人IgG1同种型对照(KLH_hIgG1)或完全人抗CD39单人血清(NHS)持续2小时。通过流式细胞术分析靶细胞裂解并计算％P/I+细胞(细胞毒性[0044]图15.NP501_BK和Ig39_21AF在体内发挥类似的抗肿瘤功效。在肿瘤激发后第8、[0046]图17.NP501_BK在CD39+SK_MEL_28异种植入SK_MEL_28异种移植物的NU/J裸小鼠以评估NP501_BK的体内功效。当肿瘤达到大约[0047]图18.18种人/兔嵌合抗人CD39单克隆抗体相对参考抗hCD39单克隆抗体克隆A1对[0048]图19.人/兔嵌合克隆9B6和Ig39_21发挥类似的ADCLuc_报告基因测定。使用HCC1739BL细胞作为靶细胞。使用稳定表达荧光素酶和hCD16a_[0050]图21.具有高ADCC活性的人/兔嵌合抗体：使用H[0051]图22.具有低ADCC活性的人/兔嵌合克隆：使用HCC1[0052]图23.无ADCC活性的人/兔嵌合抗体：使用HCC1739BL细胞的Luc_报告基因测定。[0053]图24.选择人/兔嵌合抗体针对HCC1739BL细胞的NK细胞毒性。在37℃下在5％CO2中将CFSE标记的HCC1739BL靶细胞与如所指示经连续稀释的人/兔嵌合克隆一起孵育30分流式细胞术分析靶细胞死亡并计算CFSE+P/I+细胞的％(细胞毒性的％)。列举经计算的[0054]图25.参考抗人CD39单克隆抗体(hCD39Ref)抑制CHO细胞膜上的hCD39ATP酶活性。在37℃下将CHO_hCD39细胞与10μg/mL人IgG1同种型Ultra_LEAF抗体或抗hCD39Ref抗清液，并通过发光使用cellTiter-Glo@检测ATP水平。还并行检测了无抗体的细胞(细胞+[0055]图26.含有相同人IgG1Fc部分的参考抗体(hCD39Ref)和Ig39_21WT发挥类似的ADCC活性：针对HCC1739BL细胞的NK细胞毒性。在37℃下在5％CO2中将CFSE标记的HCC1739BL靶细胞与如所指示经连续稀释的抗hCD39单克隆抗体(hCD39Ref、NP501_BK、Ig39_21WT或Ig39_21AF)一起孵育30分钟。然后在37℃下将细胞与NK_92_CD16V/V效应细胞(E：T＝1：8)一起共培养6小时。通过流式细胞术分析靶细胞死亡并计算CFSE+P/I+细胞4℃下将HCC1739BL细胞与10μg/ml未缀合的人IgG1同种型Ultra_LEAF抗体或hCD39Ref抗[0057]图28.在HCC1739BL细胞上表位竞争基质_II相对抗hCD39参考抗体(hCD39Ref)。在4℃下将HCC1739BL细胞与10μg/ml未缀合的人IgG1同种型Ultra_LEAF抗体或hCD39Ref抗体一起孵育30分钟。然后在4℃下使细胞暴露于未缀合的兔或人/兔嵌合抗体(2A11、67C1)和低ADCC组(52G4)的示例性嵌合克隆未在细胞膜上形成稳定的免疫复合物(例如[0059]图30.通过流式细胞术使用HCC1739BL兔嵌合克隆(Hu/Ra8C11、8D8和9C10)和它们相应的人源化克隆(IgG1或IgG4同种型)如所[0060]图31.人源化兔抗体针对HCC1739BL细℃下在5％CO2中与CFSE标记的HCC1739BL靶细胞一起孵育30分钟。然后在37℃下将细胞与[0061]图32.人源化兔抗体针对Raji_hCD39hi细胞的时。通过流式细胞术分析靶细胞裂解并计算％P/I+细胞(细胞毒性的％)。列举经计算的氧、炎症和癌性微环境中的T淋巴细胞和自然杀伤(NK)细胞(Ohta等人(2006)ProcNatl并抑制酶促活性或从细胞表面去除酶促活性而抑制或降低ATP和衍生核苷酸分解代谢(最(诸如通过抗体依赖性细胞毒性)肿瘤微环境中的CD39表达细胞(比先前技术中的抗CD39抗细胞和CD39+内皮细胞以及CD39+癌细胞。所产生的肿瘤内CD39高细胞数量的减少可导致肿内免疫细胞功能的降低的II型NKT细胞抑制和/或肿瘤内免疫细胞功能的降低的调控性T细胞(Treg)抑制和/或肿瘤内免疫细胞功能的降低的肿瘤相关巨噬细胞(TAM本发明所涵盖的那些一样稳定的免疫复合物的抗体导致表面上的CD39减少，但通过增加抗CD39抗体经特别设计以具有包含IgG1Fc结构域的人恒定区。这种设计赋予本发明的抗CD39抗体FcγRIIIa受体依赖性细胞活性，例如针对CD39+细胞的抗体依赖性细胞毒性[0070]作为实例，图13和图26显示通过使用岩藻糖基化抑制剂(Ig39_21AF)或通过优化[0071]如图13和26中NK细胞毒性测定预测，这些不同岩藻糖基化Ig39_21抗体的体外最[0075]这些体外数据与体内肿瘤微环境的相关性：图16证实hCD39在携带MC38的hCD39KI小鼠的肿瘤内部高度上调，包括CD45+肿瘤浸润淋巴细胞(CD11b+髓样细胞和F4/80hiGr_1肿瘤相关巨噬细胞)和肿瘤相关血管内皮细胞(数据未显9C10和48F10)、低ADCC(人/兔嵌合克隆52G4)或ADCC阴性(人/兔嵌合克隆8E9、59B6和67C1)。这种免疫复合物的稳定性与抗体的ADCC活性之间的强和正相关为清晰可见的。抗[0080]作为一个实例，通过比较主题人/兔嵌合抗hCD39抗体的表位与市售抗hCD39单克模型中NP501_BK的抗肿瘤活性为其对CD39高肿瘤浸润淋巴细胞和肿瘤相关血管内皮细胞的[0083]另一实例为使用植入CD39+人SK_MEL_28黑素瘤细胞的NU/]裸小鼠的异种移植物杀死的靶细胞为CD39+SK_MEL_28肿瘤细胞，其与所述抗体针对SK_MEL_28细胞的体外ADCC如ATP、ADP、UTP和UDP的细胞外面向催化位点(Junger等人(2011)Nat.Rev.Immunol.11：酶的代表性人编码序列系提供于GenBank登录号S73813中。细胞周围腺苷可通过结合各种腺苷受体调节免疫细胞中的促炎性或促抑制性信号(Emst等人(2010)J.Immunol.185：化的能力，这表明CD39的近分泌活性发挥作用以负调控T细胞功能(Deaglio等人(2007)冠状病毒科)的情况中已注意到在耗竭的T细胞上这种标志物的上调(Canale等人(2017)(2020)Science10.1126/sci[0087]CD39蛋白的结构_功能关系为本领域中熟知(例如由Antonioli等人(2013)TrendsC末端片段的小细胞质结构域和由五个高度保守结构域组成的大细胞外疏水型结构域的形式组构，所述五个高度保守结构域被称为三磷酸腺苷双磷酸酶(apyrase)保守区(ACR)1至和ACR4的Ser218(Heine等人(2001)Eur.J.Biochem.268：364_373；Smith等人(1998)[0088]代表性人CD39cDNA和蛋白质序列为本领域中熟知且可从美国国家生物技术信息录物并且编码同工型1。相较于转录物变体1，可在登录号NM__001098175.1和NP_001091645.1下获得的人CD39同工型2使用替代5/外显子，其导致不同5/非翻译区(UTR)并录号NM_001164178.1和NP_001157650.1下获得的人CD39同工型3使用替代的5/外显子，其生更短同工型的转录物变体1，可在登录号NM_001164179.1和NP_001157651.1下获得的人在登录号NM_001164182.1和NP_001157654.1获得的人CD39同工型6缺乏替代外显子，在下可在登录号NM_001164183.1和NP_001157655.1下获得的还由另一转录物变体编码的人[0089]除人外的生物体中CD39直向同源物的核酸和多肽序列为熟知的且包括(例如)小(NM_174536.2和NP_776961.1)、青蛙CD39(NM_一者或多者的三磷酸腺苷双磷酸酶保守区(ACR)中的保守残基的突变引起CD39活性的降低术语抗体的“抗原结合部分”内。这些和其他潜在构建体描述于Chan和Carter(2010)一般而言，重链和轻链的可变区各自由四个框架区(FR)和三个互补决定区(CDR)(也称为起有助于形成所述抗体的抗原结合位点。存在用于确定CDR的至少两种技术：(1)基于跨物Interest，第5版，BethesdaMd.)，和(2)基于抗原_抗体复合物的结晶学研究的方法 领域中用于确定CDR。的抗体或其中所有抗体针对特定表位均显示单一结合特异性和亲和力的抗体组合物。通如，通过将从转基因或转染色体非人动物(例如具有包含人重链转基因和轻链转基因的基残基被来自非人物种的抗体中的相应残基置换。人源化抗体可通过在Fv框架区中和/或在和/或结合能力。人源化抗体可包含含有所有或大体上所有对应于非人免疫球蛋白的CDR、而所有或大体上所有框架区为人免疫球蛋白序列的那些的可变结构域。在一些实施方案术制得的具有对应于由人产生的抗体的氨基一种抑制性(FcγRIIB)受体组成。[0105]“FcγRIIi结合部分”为当与抗CD39抗体的抗原结合位点结合时可结合至FcγIgG3同种型的CH2和CH3结构域的重链Fc片段为FcγRIII结合部分。白质变性时保留，而通过三级折叠形成的表位(也称为构象表位)通常在蛋白质变性时失如(例如)通过放射免疫测定(RIA)所测量，抗体结合至获得氨基酸或核苷酸序列的比对的各种算法和软件为本领域中熟知。这些包括但不限于白质的核苷酸序列。[0110]“保守氨基酸取代”为其中一个氨基酸残基被具有类似侧链的另一氨基酸残基取术语还应解释为包括促进核酸转移至非质粒和非病所需的合成机制所识别或引入的启动子DNA序列。疫刺激信号或以其他方式增加免疫反应的效能或作用以促进抗肿瘤巨噬细胞活性的抗体或其他结合部分。先天免疫诱导剂包括CD24_[0134]“化学治疗剂”为可适用于治疗癌症的化学化合物。化学治疗剂的实例包括烷化酰胺(triethiylenethiophosphoramide)和三羟甲基蜜胺(trimethylolomelamine)；多聚类似物)；鬼臼毒素(podophyllotoxin)；鬼臼酸(podophyllinicacid)；替尼泊苷(teniposide)；念珠藻素(cryptophycin)(尤其念珠藻素1和念珠藻素8)；尾海兔素盐酸盐(mechlorethamineoxidehydrochloride)、美法仑(melphalan)、新恩比兴(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺括达内霉素A(dynemicinA)；埃斯培拉霉素(esperamicin)；和新制癌菌素生色团(neocarzinostatinchromophore)和相关色蛋白烯二炔类抗生素生色团)、阿克拉霉素(aclacinomysin)、放线菌素(actinomycin)、安曲霉素(authramycin)、重氮丝氨酸(deoxydoxorubicin))、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星酸(mycophenolicacid)、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素(streptonigrin)、链脲霉素(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他汀(gemcitabine)(GEMZAR)、替加氟(tegafur)(UFTORAL)、卡培他滨(capecitabine)(XELODA)、埃博霉素(epothilone)和5一氟尿嘧啶(5一FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸诸如氟达拉滨(fludarabine)、6一巯基嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤杂尿苷(6azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二脱氧尿苷(dideoxyuridine)、脱氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷叶酸补充剂，诸如亚叶酸(folinicacid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinicacid)；恩尿嘧啶曲沙(edatraxate)；德福法明(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌尼达明(lonidainine)；美登木素生物碱，诸如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇春地辛(vindesine)(ELDISINE、FILDESIN)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷醇(TAXOL)、白蛋白工程化的紫杉醇纳米颗粒制剂(ABRAXANE)和多西他赛(doxetaxel)米托蒽醌(novantrone)；依达曲沙(edatrexate)；道诺霉素(daunomycin)；氨基蝶呤芬(trioxifene)、克昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)和托瑞米芬(LHRH)激动剂，诸如乙酸亮丙瑞林(LUPRON和ELIGARD)、乙酸戈舍瑞林(goserelin地孕酮(megestrolacetate)(MEGASE)，依西美坦(exemestane)(AROMASIN)、福美司坦(FEMARA)和阿那曲唑(anastrozole)(AR疫苗，诸如ALLOVECTIN疫苗、LEUVECTIN疫苗和VAXID疫苗；拓扑异构酶1抑制剂(例如替尼(lapatinib)和二甲苯磺酸拉帕替尼(lapatinibditosylate)(ErbB_2和EGFR双重酪号传导引起的T细胞功能障碍的状态。其与无变应性的区别在于其并非通过不完整或不足在一个特定实施方案中，T细胞功能障碍病症为与CD39的不适当增加的水平特别相关联的性接触的细胞并经由血流或淋巴从疾病的原发位点迁移以侵入相少一种本发明的剂一起向受试者施用且不破坏其药物活性且当以足以递送治疗效应的量地，由杂交瘤细胞产生的单克隆抗体的结合特异性通过免疫沉淀或通过体外结合测定(诸如放射免疫测定(RIA)或酶联免疫吸附测定(ELISA)测定。此类技术和测定为本领域中已知。所述单克隆抗体的结合亲和力可例如通过ScatchardanalysisofMunsonand能够特异性地结合至编码鼠类抗体重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)。本发明所涵盖的通过共价连接至非免疫球蛋白多肽的编码序列的所有或部分的免疫球蛋白编码序列修饰。盖的抗体的一个抗原组合位点的可变结构域以产生嵌且通常两个可变结构域中的全部或大体上全部，其中所述CDR区中的全部或大体上全部对CDR残基和可能一些FR残基由来自啮齿动物抗体中的类似位点的残基取代(1991)]。Cole等人和Boerner等人的技术还适用于制备人单克隆抗体[(Cole等人，基因动物(例如其中内源性免疫球蛋白基因已经部分或完全灭活的小鼠)内制得。一经激Fishwild等人，NatureBiotechnology14，845_51(1996)；Neuberger，Nature[0184]还可使用如上文描述的已知选择和/或诱变方法使抗体亲和力成熟。优选的亲和或连接至超过一个其他功能分子，以产生结合至超过两个不同结合位点和/或靶分子的多合特异性的双特异性分子。在本文描述的其中双特异性分子为多特异性的一个实施方案述多特异性包括结合T细胞上的检查点蛋白(尤其与T细胞耗竭相关联的检查点诸如LAG_3、关联的一个或多个其他T细胞，并且导致表达CD39和其所结合的其他检查点蛋白中的每一[0191]在一个实施方案中，本文描述的双特异性分子包含至少一种抗体或其抗体片段[0192]双特异性分子与它们的特异性靶标的结合可使用本领域公认的方法诸如酶联免(例如抗体)检测特定目标蛋白质_抗体复合物的存生为基于两个免疫球蛋白重链/轻链对的共表达，其中所述两个重链具有不同特异性的双特异性结构。所述正确分子的纯化通常通过亲和色谱法步骤进行。类似程序公开于[0195]根据WO96/27011中描述的另一方法，一对抗体分子之间的界面可经工程化以最大化从重组细胞培养物回收的异二聚体的百分比。优选的界面包含抗体恒定结构域的CH3[0198]用于直接从重组细胞培养制备和分离双特异性抗体片段的各种技术也已进行了种方法还可用于产生抗体同二聚体。由Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90：6444_6448(1993)描述的“双功能抗体”技术已提供用于制造双特异性抗体片段的替代机换反应或通过形成硫醚键构建。适用于此目的的试剂的实例包括亚氨基硫醇酯和甲基_4_生的同二聚体抗体可具有改善的内化能力和/或增强的补体介导的细胞杀死和抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。参见Caron等人，J.ExpMed.，176：1191_1195(1992)和Shopes，CD39抗体诱导从免疫细胞FcγRIII结合依赖性移除(诸如通过抗CD39抗体介导的靶胞吞)核酸序列氨基酸序列[0210]利用上文VH和VL结构域的示例性全长抗体和示例性单链抗体(scFV)的序列如下核酸序列氨基酸序列[0212]在一些实施方案中，抗CD39抗体或其抗原结合片段包含至少一个重链可变结构[0213]在一些实施方案中，抗CD39抗体或其抗原结合片段包含至少一个轻链可变结构可由与本文描述的VH和VL结构域(相应地)编码序列诸如那些SEQIDNo.1(VH)和SEQIDNo.3(VL)中所示的那些相同或在严格条件(诸如在45℃下6x氯化钠/柠檬酸钠(SSC)，和在50℃至65℃下于0.2xSSC/0.1％SDS中洗涤)下杂交的核酸编地其中所述免疫复合物形成通过荧光强度使用荧光标记的第二抗体检测；(ii)针对CD39+细胞的补体依赖性细胞毒性(CDC)活性；(iii)CD45+免疫细胞上的CD39的抗体介导的靶胞吞；(iv)来自肿瘤中肿瘤血管内皮破坏或血管分布网络崩溃的CD39的抗体介导的靶胞吞；(v)(任选地)结合至具有选自图33中所列的CD39氨基酸表位序列的组的序列的CD39表位 Curr.Opin.Pharmacol.5：368_74(200基因座一般已经灭活。关于用于从转基因动物获得人抗体的方法的综述，参见Lonberg，自由此类动物产生的完整抗体的人可变区可例如通过与不同的人恒定区组合而经进一步(1991))。经由人B细胞杂交瘤技术产生的人抗体还描述于Li等人，Proc.Natl.Acad.Sci合特征的抗体筛选这些文库。这些方法综述于例如Hoogenboom等人，MethodsinFellouse，Proc.Natl.Acad.Sci.USA101(34)：12467_12472(2004)；和Lee等人，[0350]作为噬菌体展示方法的一个实例，VH和VL基因库通过聚合酶链反应(PCR)分别克片段形式或呈Fab片段形式。来自免疫来源的文库提供针对免疫原的高亲和力抗体而无需(例如自人)以提供针对广泛范围的非自身抗原以及还有自身抗原的单一来源抗体而无需库还可通过从干细胞克隆未经重排的V基因片段和使用含有随机序列的PCR引物以编码高度可变的CDR3区并进行体外重排合成制备。描述人抗体噬菌体文库的专利公布包括例如：[0355]表达控制序列和表达载体的选择取决于宿主细胞的选择。可采用各种表达宿主/[0356]适用于表达抗CD39抗体的多肽链的宿主细胞(或用作靶标的蛋白质)包括在适当动物细胞宿主一起使用的克隆和表达载体为本领域技癌来源的)、BHK(仓鼠肾成纤维细胞来源的)和HEK_293(人胚胎肾脏来源的)细胞系及其变[0358]重组蛋白在昆虫细胞培养系统(例如杆状病毒)中的表达也提供用于产生正确折包括Eck等人，Goodman&Gilman/sThePharmacologicalBasisofTherapeutics，第九版，Hardman等人编，McGraw_Hill，NewYork，(1为腺病毒和腺相关病毒(AAV)，它们为已经批准在基因疗法中用于人用途的双链DNA病毒。[0366]用于体内递送一种或多种核酸序列的一种说明性方法涉及使用腺病毒表达载“腺病毒表达载体”意指包括含有足以(a)支持包装构建体和(b)在有义或反义方向上表达达不需要基因产物为合成的。在一个具体实施方案中，所述递送载体涉及细胞色素b5还原酶3(CYB5R3)的市售ORF，腺病毒载体pAd中的转录变体1，具有C末端Flag和His标签， Cyb5r3基因的表达构建体的载体。含含有本文描述的核酸构建体的表位序列的AAV载体适用于[0371]具有由AAVITR结合的目标DNA分子的AAV表达载体可通过将选择的序列直接插入成型启动子的实例包括但不限于示例性CMV立即早期增强子/鸡β_肌动蛋[0373]这些和其他常见载体和调控元件的选择为常规的，并且许多这些序列为可获得(GaLV)、猿猴免疫缺陷病毒(SIV)、人免疫缺陷病毒(HIV)和其组合的那些(参见，例如，[0378]慢病毒载体是指可感染分裂细胞和非分裂细胞并通常产生高病毒滴度的逆转录因递送系统与HIV来源以及还有γ逆转录病毒来源的载体加以区分。[0380]非细胞病性病毒包括逆转录病毒(例如慢病毒)，其生命周期涉及将基因组病毒和用病毒颗粒感染靶细胞的步骤)为本领域技术[0381]逆转录病毒基因组含有分别编码衣壳蛋白、聚合酶和包膜组分的三种基因gag、[0384]可容易适应于递送编码抗CD39抗体剂的转基因的另外逆转录病毒递送系统包括(仅为阐述)已公布的PCT申请WO/2010/045002、WO/2010/148203、WO/2011/126864、WO/[0385]在某些实施方案中，逆转录病毒为包含以下的具有长末端重复(LTR)序列的肿瘤逆转录病毒多核苷酸序列；包含可操作地连接至抗CD39抗体列。[0386]在某些实施方案中，逆转录病毒为包含以下的具有糖体进入位点(lRES)或可操作地连接至第二治疗蛋白的编码序列的微型启动子或poIIII[0393]其他病毒载体可用作本发明中用于向宿主细胞递送寡核苷酸或多核苷酸序列的物的表达水平将取决于相关联的启动子和相关联的增强子元件类表达质粒为本领域中熟知且本领域普通技术人员将能够用包含编码细胞免疫反应元件或其片段的序列的多核苷酸以所述细胞免疫反应元件可表达的方式设计适当的表达构建[0399]大量携带用于表达细胞免疫反应元件或其片段的质粒的细菌宿主可经发酵和所[0400]质粒的目的为将核酸序列有效递送至细胞或组织并在细胞或组织中表达治疗表至4kb)环形质粒衍生物，它们已从所有原核载体部分释放。由于微环DNA载体不含有细菌(按数周或数月的顺序)。较小尺寸的微环还扩展它们克隆能力并促进它们递送至细胞内。MolecularTherapy(2013)；218，1526_1535和Hou等人，MolecularTherapy_Methods&495_500中，并且微环DNA载体实现由活性染色质和转录水平反映的持续表达。Gracey显著降低，可能是由于DNA直接或经由淋巴血管从所述肌肉漏出(HumanGeneTherapy4：[0405]为诱发免疫性，优选地将任何类型的DNA疫苗载体工程化为富含CpG(以刺激免疫疫苗可经工程化以含有抗原/表位，并且还可含有与抗原共表达以充当佐剂或免疫调节剂(多种启动子载体)的另外基因。已发现这些DNA疫苗为临床上安全的，例如在T1D患者中[0408]增强递送的物理方法包括电穿孔(其中高压的短脉冲携带核酸跨越膜)、基因枪质体，或可与细胞膜相互作用并融合或经历内吞作用以实现将DNA转移至细胞内的多聚体(合成脂质体)。DNA还可与聚合物(聚合复合物)或与可直接将负载释放至细它们包含非液体亲水性核(例如交联多糖或寡糖)且任选地包含两亲性化合物(诸如磷脂)用的参考文献中的经修饰的B型肝炎核蛋白载体系统还将适用于许多应用。另一说明性载体剂能够诱导靶向患者的肿瘤组织的MHCl限制性细胞毒性送至B16黑素瘤和其他肿瘤组织。由质粒编码的基因或cDNA的全身和局部表达可以施用体用于将抗CD39抗体剂转基因体内电穿孔至细胞内的示例性技术、载体和装置包括PCT公布[0415]美国专利公布2005/0052630描述可用于有效促进将生物分子引入身体或植物中作由软件或固件规定。所述EKD装置基于用户控制和脉冲参数的输入在阵列中的电极之间决于细胞的类型和经由电穿孔进入所述细胞内的体内用于细胞的转化。Chaiberg等人(2006)lnvestigativeOphthalmology&Visual离子的带正电或带负电的颗粒(Luo等人(1998)Phys.Plasma5：2868_2870)，并且如果存[0422]冷等离子体(即，非热等离子体)通过将经脉冲的高压信号递送至合适的电极产案。并入冷等离子体产生的这种原理的任何内的细胞的永久损坏和/或大体上最小化疼痛。例如，电位计可经配置以将电场维持至约述第二电信号可具有第二频率和第二幅度。所述第一频率可与所述第二频率不同或相同。至少一个约200V/cm至约1500V/cm的基于脂质的非病毒制剂为腺病毒基因疗法提供替代方案。当前体内脂质递送方法使用皮[0432]阳离子脂质体技术为基于具有带正电的头基和疏水性脂质尾的两亲性脂质结合[0433]本文公开的核酸构建体可与发挥作用以增强摄取至细胞内的聚阳离子分子缔[0434]适用于与核酸构建体复合的聚阳离子分子的一个实例包括细胞渗透肽(CPP)，实共价复合物，其保护核酸免受DNA酶降解并将寡核苷酸体外有效递送至细胞(MahapatroA[0435]可与本文描述的核酸构建体复合的聚阳离子分子的其他实例包括可作为和In些实施方案中，本发明提供用于使用本文描述的抗CD39抗体增强受试者的免疫反应的方[0443]在一些实施方案中，肿瘤表达或过表达由抗CD39抗体(诸如包含特异性地结合所述肿瘤抗原的抗原结合位点的双特异性剂)靶向的[0448]通过将本发明所涵盖的纯化剂与药学上可接受的媒介物(例如载体或赋形剂)组[0449]在一些实施方案中，抗CD39抗体被冻干和/或以冻干形式储存。在一些实施方案基二甲基苯甲基氯化铵、氯化六甲双铵(hexamethoniumchloride)、氯化苯甲烷铵[0462]适用于本发明的化学治疗剂包括但不限于烷化剂，诸如噻替派和环磷酰胺曲他雄酮(dromostanolonepropionate)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷的4(5)咪唑、4羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、克昔芬、LY117018、奥那司酮和托瑞米芬唑嘌呤、6硫鸟嘌呤、喷司他丁、磷酸氟达拉滨(fludarabinephosphate)和克拉屈滨物。在一些实施方案中，所述抗有丝分裂剂为驱动蛋白Eg5的抑制剂或有丝分裂激酶诸如[0466]在本文描述的方法的某些实施方案中，预期主题抗CD39抗体将与在肿瘤中诱导ATP的释放和/或引起肿瘤内CD39或CD73的上调的那些化学治疗剂一起具有更大的组合效达比星)、基于铂的药物(诸如顺铂、卡铂和奥沙利铂)和蛋白酶体抑制剂(诸如硼替佐米(bortezomib))。放射疗法和光动力疗法(PDT)还可导致ATP释放和/或CD39和/或CD73的肿瘤内水平的上调。抗(pertuzumab)(OMNITARG)、帕尼单抗(panitumumab)(VECTISiglec_15。共刺激分子的示例性活化剂包括以下中的一者或多者的激动剂：OX40、CD2、[0474]PD_1基因为55kDaI型跨膜蛋白，其为Ig基因超家族的一部分(们已显示在结合至PD_1后下调T细胞活化(Freeman等人(2000)JExpMed192：1027_34；PD_L1和PD_L2两者均为结合至PD_1但不结合至其他CD28家族成员的B7同源物。PD_Ll在各致肿瘤浸润淋巴细胞减少、T细胞受体介导的增殖减少和癌细胞的免疫逃避(Dong等人的(lwai等人(2002)Proc.Nat/l.Acad.Sci.USA99：12293_7；Brown等人(2003)以及与人PD_1具有至少一个共同表位的类似物。完整的人PD_1序列可在GenBank登录号的人PD_L1氨基酸序列_同工型a前体_可在GenBank登录号NP_054862.1下找到。完整的人PD_L1氨基酸序列_同工型b前体_可在GenBank登录号NP_001254635.1下找到。拮抗剂减少由或通过表达于T淋巴细胞上的通过PD_1信号传导介导的细胞表面蛋白介导的消除或干扰由PD_L1与其结合配偶体中的一者或多者(诸如PD_1、B7_1)的相互作用引起的胞上的通过PD_L1信号传导介导的细胞表面蛋白介导的负共刺激信号，以便使得功能障碍合拮抗剂抑制PD_L2与PD_1的结合。在一些实施方案中，所述PD_L2拮抗剂包括抗PD_L2抗一个实施方案中，PD_L2结合拮抗剂减少由或通过表达于T淋巴细胞上的通过PD_L2信号传PD_1途径抑制剂可为针对能够拮抗PD_1途径信号传导的PD_1途径的任何成员的任何抑制1但阻止PD_1信号传导，例如，通过抑制PD_1和B7_H1或B7_DL相互作用的氨基酸序列的核少或抑制一个或多个配体与PD_1受体的结合，或直接结合至所述PD_1受体而不参与通过与如上文提及的抗体竞争性结合至PD_L1上的相同表位和/或结合至PD_L1上的相同表位。在另一实施方案中，所述抗体与上文提及的抗体具有至少约90％可变区氨基酸序列同一MDX_1106_04、ONO_4538或BMS_936558。在一些实施方案中，所述抗PD_1抗体为纳武单抗单抗(克隆5C4)和特异性地结合至PDl的其他人单克隆抗体公开MK_3475或SCH_900475)为结合至PD1的人源化IgG4单克隆抗体。派姆单抗公开于例如[0490]在一些实施方案中，抗PD_1抗体为匹地利珠单抗。匹地利珠单抗(CT_011；CureTech)为结合至PD1的人源化IgGlk单克隆抗体。匹地利珠单抗和其他人源化抗PD_1单克隆抗体公开于WO2009/101611中。其他抗PDi抗体公开于US8,609,089、US2010028330和/或疫球蛋白序列的Fc区)的PD_L1或PD_L2的细胞外或PD_1结合部分的免疫粘附素。在一些实2007/005874中描述的抗PD_L1抗体。在一个实施结合至PD_L1的人Fc优化的IgGl单克隆抗体。MDPL3280A和针对PD_L1的其他人单克隆抗体027827(以引用的方式并入)和WO2011/066小分子拮抗剂包括结合至PD_1、PD_1L和/或PD_1L2中的一者或多者并抑制PD_1与PD_1L1[0509]L为选自_NH(CH2)nNH_、_NH(CH2)nCH(NH2)CO_、_OOC(CH2)mCOO_、_NH(CH2)n[0514]R4为Phe的苯基上的取代基，并且选自氢、氨基(C1_C20)烷基、_NHCOCH3或_包括曲美木单抗(Tremelimumab)(可从Pfizer获得的IgG2单克隆抗体，原名替奇木单抗[0530]用于本文提供的方法中的关于曲美木单抗(或其抗原结合片段)的信息可参见为对CTLA_4具有高度选择性并阻断CTLA_4与CD80(B7.1)和CD86(B7.2)的结合的人IgG2单[0531]用于本文提供的方法中的曲美木单抗包含重链和轻链或重链可变区和轻链可变本文上文显示的氨基酸序列的轻链可变区和含有本文上文显示的氨基酸序列的重链可变[0532]本发明还考虑利用CTLA_4的小分子抑制剂，诸如由Huxley等人，2004Cell干扰素基因刺激物(STING)的病原体识别受体(PRR)。STING为宿主哺乳动物细胞的细胞质烈活化先天免疫性的其他基因产物的诱导。现在认识到STING为宿主胞质监视途径的组分保护性病原体特异性免疫反应的发展，其由抗原特异性CD4+和CD8+T细胞和病原体特异性[0549]在另一优选实施方案中，本发明涉及抗CD39抗体与抗癌抗生素的组合以治疗癌他(panobinostat)、伏立诺他(vorinostat)、莫西司他(mocetinostat)、贝利司他[0553]在另一优选实施方案中，本发明涉及抗CD39抗体与氮芥烷化剂的组合以治疗癌[0556]在另一优选实施方案中，本发明涉及抗CD39抗体与mTOR抑制剂的组合以治疗癌直肠癌、肾癌和脑癌。此化学治疗剂组包括但不限于西罗莫司MAP激酶途径抑制剂或WNT途径抑制剂。[0561]在一些实施方案中，MEK抑制剂选自由以下组成的组：GSK1120212、司美替尼[0562]在一些实施方案中，WNT途径抑制剂为β_连环蛋白抑制剂或卷曲蛋白抑制剂给药时间表可从患者体内的药物积聚的测量值计算且将取决于个别剂的相对效能而变化。述抗CD39抗体的剂量为约1mg/kg体重。在一些实施方案中，所述抗CD39抗体的剂量为约始剂量的抗CD39抗体，并约每4周一次施用后续剂量的所述抗CD39抗体。在一些实施方案沙雷氏菌(serratia)、假单胞菌(pseudomonas)、军团菌(Legionella)、白喉棒状杆菌(Vibriocholerae)、破伤风梭菌(Clostridiumtetan)、肉毒梭菌(Clostridium麻风分枝杆菌(Mycobacteriumleprae)、弥漫型麻风分枝杆菌(Mycobacterium热带念珠菌(tropicalis)等)、新型隐球菌(Cryptococcusneoformans)、曲菌属(毛霉属(mucor)、犁头霉属(absidia)、根霉属(rhizopus))、申克孢子丝菌(Sporothrixbrasiliensis)、粗球孢子菌(Coccidioidesimmit虫感染：溶组织内阿米巴(Entamoebahistolytica)、结肠小袋纤毛虫(Balantidium(Giardialambia)、隐孢子虫(Cryptosporidium)、卡氏肺孢子虫(Pneumocystiscarinii)、间日疟原虫(Plasmodiumvivax)、小巴贝虫(Babesiamicroti)、布氏锥虫(Trypanosomabrucei)、克氏锥虫(Trypanosomacruzi)、利什曼原虫(Leishmaniadonovani)、弓形虫(Toxoplasmagondii)和巴西日圆线虫(Nippostrongylus述的方面或实施方案的抗CD39抗体缀合至治疗部分。示例性治疗部分包括细胞毒性部分、[0591]在某些实施方案中，抗CD39抗体能够通过内化缀合N细胞毒性部分或与细胞毒性胞菌外毒素、阿罗林(alorin)、皂苷(saporin)、蒴莲根毒素(modeccin)、白素毒素风树毒蛋白(curcin)、巴豆毒素(crotin)、皂苷抑制剂(sapaonariaofficinalis奥瑞斯他汀已显示干扰微管动力学、GTP水解以及核和细胞分裂(Woyke等人(2001)Antimicrob.AgentsandChemother.45(12)：3580_3584)并且具有抗癌活性(US5663149)[0599]在某些实施方案中，化学部分为增加抗体或片段在受试者体内的半衰期的聚合[0602]可采用用于将本发明所涵盖的抗体及其抗原结合片段缀合至各种部分的本领域约pH7至8.5。另外药物剂阐述于Remington’sPharmaceuticalSciences，第18版，[0606]组合物可呈液体形式或呈冻干或冷冻干煤形式并且可包括一种或多种冻干保护[0609]本文描述的药物组合物可被配制用于以在特定局部环境中提供产品的局部浓度物降解且可生物相容的。聚合物水凝胶(包括那些)和具有温度或pH敏感性质的水凝胶可因为捕获生物活性蛋白剂(例如，抗体)涉及的在正常动物中进行常规筛选确定。用于持续释放的重组蛋白的微囊化已用人生长激素795799(1996)；Yasuda，Biomed.Ther.，27：12211223(1993)；Hora等人，Bio/Technologv.8：755一758(1990)；Cleland，“DesignandProductionofSingleVaccineDesign：TheSubunitandAdju