CN119410577A 一种负载白藜芦醇的外泌体及其制备方法及其应用 （广州医科大学附属清远医院(清远市人民医院)）

一种负载白藜芦醇的外泌体及其制备方法本发明提供了一种负载白藜芦醇的外泌体发明所述负载白藜芦醇的外泌体的制备方法包面活性剂的白藜芦醇溶液与MSCs_Exos混合后，经共孵育、超滤，得到负载白藜芦醇的MSCs_Exos。本发明加入表面活性剂不仅大大提高了MSCs_Exos负载白藜芦醇的包载率和载药率，又载白藜芦醇的MSCs_Exos具有治疗糖尿病的效21.一种负载白藜芦醇的外泌体的制备方法，其特征在于，包括：在氧气浓度为2%~4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述表面活性剂的质量体积浓度为9.权利要求1～8任意一项所述方法得到的负载白10.权利要求1～8任意一项所述方法得到的负载白藜芦醇的MSCs_Exos或权利要求9所述MSCs_Exos在制备治疗糖尿病药物中的应34[0010]优选的，所述表面活性剂的质量体积浓度为0.5所述白藜芦醇溶液的浓度为5[0019]图1为本发明表面活性剂协同共孵育法制备负载白藜芦醇的外泌体MSCs_Exos&透射电子显微镜图像(标尺，100nm)，B为MSCs_Exos和MSCs_MSCs_Exos和MSCs_Exos&RSV标志物蛋白的免疫印[0021]图3为MSCs_Exos和MSCs_Exos&RSV中高丰度的miR_21_5p，miR_122_5p和miR_[0023]图5为MSCs_Exos&RSV治疗2型糖尿病的效果；其中A为食物摄入量，B为食物利用岛面积比率，I为II型糖尿病小鼠胰腺HE染色代表性图像；数据用平均值±SEM表示，*p<~10％的条件下3D培养人脐带或毛囊来源的间充质干细胞，收集上[0025]本发明表面活性剂能够增加Exos膜的透性，进而提高药物与Exos共孵育时进入[0026]本发明在孵育时加入表面活性剂不仅大大提高了MSCs_Exos负载白藜芦醇的包载[0027]本发明所述低氧的氧气浓度优选为210更优选为5％。6[0031]本发明所述表面活性剂的质量体积浓度优选为0.5所述白藜芦醇溶液的优选[0032]本发明所述MSCs_Exos的浓度优选为450μg/mL，所述含有表面活性剂的白藜芦醇[0033]本发明所述孵育的温度优选为36～38℃,更优选为37℃,转速优选为70～90rpm，~5次。7O2；22培养；[0072](3)每天镜下观察，待细胞融合度约80％左右，PBS漂洗1次，加入适量胰蛋白酶8O2。O2。O2。9[0108](4)150μg/mLMSCs[0114]采用透射电子显微镜观察实施例1中MSCs_Exos和MSCs_Exos&RSV的形态特征，结[0115]用NanoFCM纳米流式检测仪检测MSCs_Exos和MSCs_Exos&RSV的粒径分布，结果如[0117]由图2可知，负载白藜芦醇的MSCs_Exos(MSCs_Exos&RSV)与MSC直径约为30～150nm。纳米流式检测结果也表明MSCs_Exos和MSCs_Exos&RSV的粒径分布曲线均在30～150nm之间，均符合外泌体粒径分布，其中MSCs_Exos的平均粒径为70.9nm，蛋白标记CD63和CD81以及胞浆蛋白标记TS声法与共孵育法不到2表面活性剂协同共孵育法能显著提高MSCs_Exos负载白藜芦醇的对照组)、MC(生理盐水，2型糖尿病模型小鼠，阴性对照组)、Semaglutide(32RSV_H组对糖尿病小鼠的食物摄取量，空腹血糖水平都有显著性改善。结果表明，MSCs_[0140]胰岛素抵抗指数(HOMA_IR)的变化与胰岛素抵抗水平呈正相关，可用于评价个体