2025 化学农药环境安全评价试验准则 第2部分：水解试验

GB/T312702—2025

.

目次

前言

…………………………Ⅲ

引言

…………………………Ⅴ

范围

1………………………1

规范性引用文件

2…………………………1

术语和定义

3………………1

原理

4………………………1

试验条件

5…………………1

试剂和材料

6………………1

仪器设备

7…………………2

被试物和对照物

8…………………………2

试验步骤

9…………………2

试验数据处理

10……………3

质量控制

11…………………4

试验报告

12…………………4

附录资料性缓冲溶液的配制

A()………………………6

附录规范性试验流程

B()………………7

参考文献

………………………8

Ⅰ

GB/T312702—2025

.

前言

本文件按照标准化工作导则第部分标准化文件的结构和起草规则的规定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

本文件是化学农药环境安全评价试验准则的第部分已经发布了

GB/T31270《》2。GB/T31270

以下部分

:

第部分土壤代谢试验

———1:;

第部分水解试验

———2:;

第部分光解试验

———3:;

第部分土壤吸附解吸试验

———4:/;

第部分土壤淋溶试验

———5:;

第部分挥发性试验

———6:;

第部分生物富集试验

———7:;

第部分水沉积物系统代谢试验

———8:-;

第部分鸟类短期饲喂毒性试验

———9:;

第部分蜜蜂急性毒性试验

———10:;

第部分家蚕急性毒性试验

———11:;

第部分鱼类急性毒性试验

———12:;

第部分溞类急性活动抑制试验

———13:;

第部分藻类生长抑制试验

———14:;

第部分蚯蚓急性毒性试验

———15:;

第部分土壤微生物毒性试验

———16:;

第部分天敌赤眼蜂急性毒性试验

———17:;

第部分天敌两栖类急性毒性试验

———18:;

第部分非靶标植物影响试验

———19:;

第部分家畜短期饲喂毒性试验

———20:;

第部分大型甲壳类生物毒性试验

———21:;

第部分土壤表面光解试验

———22:;

第部分鸟类急性经口毒性试验

———23:。

本文件代替化学农药环境安全评价试验准则第部分水解试验与

GB/T31270.2—2014《2:》,

相比除结构调整和编辑性改动外主要技术变化如下

GB/T31270.2—2014,,:

更改了术语和定义见第章年版的第章

a)(3,20142);

更改了试剂和材料的要求见第章年版的

b)(6,20144.1.2);

更改了仪器设备的要求见第章年版的

c)(7,20144.1.3);

更改了被试物的要求见年版的

d)(8.1,20144.1.1);

更改了试验步骤见第章年版的

e)(9,20144.2);

更改了试验数据处理的要求见第章年版的

f)(10,20144.3);

更改了质量控制的要求见第章年版的

g)(11,20144.4);

增加了试验流程图见附录

h)(B)。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别专利的责任

。。

Ⅲ

GB/T312702—2025

.

本文件由中华人民共和国农业农村部提出

。

本文件由全国农药标准化技术委员会归口

(SAC/TC133)。

本文件起草单位农业农村部农药检定所

:。

本文件主要起草人单炜力周艳明汤涛刘新刚潘洪吉赵常升吴珉石凯威许振岚吴琼

:、、、、、、、、、、

韩平王晓环

、。

本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为

:

年首次发布为

———2014GB/T31270.2—2014;

本次为第一次修订

———。

Ⅳ

GB/T312702—2025

.

引言

为减少农药使用对生态环境的影响提供符合农药环境风险评估要求的数据需开展环境安全评价

,,

试验以明确农药在环境中的代谢降解吸附淋溶生物富集等特性及对非靶标生物的毒性

,、、、、。

化学农药环境安全评价试验准则是指导我国农药环境安全评价试验的试验方法标准旨

GB/T31270《》,

在规范农药环境安全评价试验工作提高农药环境安全评价试验的科学性和可比性由个部分构成

,,23。

第部分土壤代谢试验目的在于明确农药在土壤中的代谢途径和代谢速率

———1:。。

第部分水解试验目的在于明确农药水解途径和水解速率

———2:。。

第部分光解试验目的在于明确农药光解途径和光解速率

———3:。。

第部分土壤吸附解吸试验目的在于明确农药的土壤吸附特性

———4:/。。

第部分土壤淋溶试验目的在于明确农药的淋溶性

———5:。。

第部分挥发性试验目的在于明确农药的挥发性

———6:。。

第部分生物富集试验目的在于明确农药在鱼体内的生物富集性

———7:。。

第部分水沉积物系统代谢试验目的在于明确农药在水沉积物系统中的代谢途径和代

———8:-。-

谢速率

。

第部分鸟类短期饲喂毒性试验目的在于明确农药对鸟类的短期饲喂毒性

———9:。。

第部分蜜蜂急性毒性试验目的在于明确农药对蜜蜂的急性毒性

———10:。。

第部分家蚕急性毒性试验目的在于明确农药对家蚕的急性毒性

———11:。。

第部分鱼类急性毒性试验目的在于明确农药对鱼类的急性毒性

———12:。。

第部分溞类急性活动抑制试验目的在于明确农药对溞类的急性毒性

———13:。。

第部分藻类生长抑制试验目的在于明确农药对藻类的毒性

———14:。。

第部分蚯蚓急性毒性试验目的在于明确农药对蚯蚓的急性毒性

———15:。。

第部分土壤微生物毒性试验目的在于明确农药对土壤微生物的毒性

———16:。。

第部分天敌赤眼蜂急性毒性试验目的在于明确农药对赤眼蜂的毒性

———17:。。

第部分天敌两栖类急性毒性试验目的在于明确农药对两栖类的急性毒性

———18:。。

第部分非靶标植物影响试验目的在于明确农药对非靶标植物的毒性

———19:。。

第部分家畜短期饲喂毒性试验目的在于明确农药对家畜的饲喂毒性

———20:。。

第部分大型甲壳类生物毒性试验目的在于明确农药对大型甲壳类生物的毒性

———21:。。

第部分土壤表面光解试验目的在于明确农药在土壤表面的光解途径和光解速率

———22:。。

第部分鸟类急性经口毒性试验目的在于明确农药对鸟类的急性经口毒性

———23:。。

Ⅴ

GB/T312702—2025

.

化学农药环境安全评价试验准则

第2部分水解试验

:

警示———使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验本文件并未指出所有可能的安全问

。

题使用者有责任采取适当的安全和健康措施并保证符合国家有关法规规定的条件

。,。

1范围

本文件描述了化学农药水解试验的试验方法

。

本文件适用于为化学农药登记而进行的水解试验

。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款其中注日期的引用文

。,

件仅该日期对应的版本适用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于

,;,()

本文件

。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

农药登记环境降解动力学评估及计算指南

NY/T3150

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件

。

31

.

主要代谢物majormetabolites

水解试验中在任何一次检测时间点摩尔分数或放射性活度比例大于初始添加量的代谢物

,10%。

4原理

在不同为的灭菌缓冲溶液中加入被试物在恒温黑暗条件下培养定期取样检测

pH(pH4、7、9),、,

并计算降解时间使用14标记的被试物可获得质量平衡回收率确定主要代谢物试验

50%(DT50)。C,。

由多个阶段组成根据上一阶段的试验结果确定下一阶段试验设计

,。

5试验条件

51水解试验应在恒温黑暗条件下进行试验期间温度变化至少应控制在以内

.、,±0.5℃。

52应采取对试验溶液通或等措施避免氧化

.He、N2Ar5min。

6试剂和材料

61试剂

.

611有机溶剂如正己烷号二氯甲烷号

..,:[CH3(CH2)4CH3,CAS:110-54-3]、(CH2Cl2,CAS:75-09-

1

GB/T312702—2025

.

乙腈号丙酮号乙醇

2)、(CH3CN,CAS:75-05-8)、(CH3COCH3,CAS:67-64-1)、(CH3CH2OH,CAS

号等分析纯

:64-17-5),。

612为的缓冲溶液使用前应灭菌

..pH4、7、9,。

613规定的一级水

..GB/T6682。

62材料

.

试管烧瓶等玻璃容器使用前应灭菌被试物可能在玻璃表面吸附时可采用聚四氟乙烯等材料

、,。,

或采取以下措施以减轻在玻璃容器上的吸附

:

测定吸附于试验容器上的被试物和代谢物

a);

使用超声辅助提取

b);

每次采样时用溶剂清洗容器

c);

以制剂作为被试物

d);

增加助溶剂的用量但应确保其不与被试物反应

e),。

7仪器设备

71恒温水浴或恒温培养箱波动

.(±0.2℃)。

72计分辨率及以上

.pH(0.1)。

73气相色谱仪高效液相色谱仪薄层色谱仪质谱仪气相色谱质谱联用仪高效液相色谱质谱联

.、、、、-、-

用仪核磁共振波谱仪等定性定量分析仪器

、。

74液体闪烁计数仪

.。

75振荡器旋转蒸发仪等提取浓缩设备

.、、。

76温度记录仪灭菌设备

.、。

8被试物和对照物

81被试物

.

811仅测定水解速率时可使用同位素标记的被试物也可使用非标记的被试物需要确定水解途

..,,。

径和质量平衡时通常使用同位素标记的被试物宜使用14标记标记的位置应在化合物的最稳定部

,,C。

分对含有一个环状结构的化合物标记位点应选择在该环状结构对含有多个环状结构的化合物应

。,;,

在化合物不同环状位置分别标记分别开展试验以获得代谢物的信息使用同位素标记的被试物时其

、。,

化学纯度和放射化学纯度应大于或等于使用非标记的被试物时其纯度应大于或等于

95%;,95%。

812试验开始前宜了解被试物在水和有机溶剂中的溶解度饱和蒸气压亨利常数正辛醇水分配

..,、、、-

系数解离常数水中直接或间接光解速率被试物及其代谢物的定性和定量分析方法等方面的信息

、、、。

82对照物

.

母体和代谢物的标准样品标准物质不需同位素标记

/,。

9试验步骤

91缓冲溶液配制

.

911应使用为的缓冲溶液开展试验缓冲溶液的配制示例见附录应注意缓冲溶液可

..pH4、7、9,A。

2

GB/T312702—2025

.

能影响被试物的水解速率此时宜使用硼酸盐缓冲溶液或醋酸盐缓冲溶液不宜使用磷酸盐缓冲溶液

,,。

912试验开始前应测定缓冲溶液的

..pH。

92试验流程

.

试验的流程按附录的图操作

BB.1。

93被试物添加

.

931被试物应溶解后添加至缓冲溶液中必要时可使用乙腈丙酮乙醇等助溶剂助溶剂的用量尽

..,、、,

量小不宜超过试验溶液体积的需使用更多的助溶剂时应证明助溶剂对被试物的水解没有

,1%。,

影响

。

932不宜使用农药制剂作为被试物但对于在水中难溶解的被试物或易吸附在玻璃表面的被试

..,

物可使用制剂作为被试物

,。

933设置个试验浓度浓度不超过或饱和溶解度的

..1,0.01mol/L50%。

94第1阶段试验

.

第阶段试验应在恒温条件下在为缓冲溶液中进行每个条件至少

150℃±0.5℃、pH4、7、9,pH

设个重复用农药母体标准样品标准物质和合适的分析仪器检测若水解率小于则认为

2,/。5d10%,

被试物在水中稳定年不需进行后续试验第阶段试验中被试物在某个条件下不稳

(DT50>1),。1pH

定时应在该条件下开展第阶段试验如已知被试物在水中不稳定可直接进行第阶段试验

,pH2。,2。

95第2阶段试验

.

951第阶段试验可在至少个温度下进行其中至少个低于并根据阿伦

..210℃~70℃,3(125℃),

尼乌斯公式计算下的水解速率常数和也可直接在下进行试验并测定

(Arrhenius)25℃DT50。25℃,

水解速率常数和试验期间温度变化不超过

DT50。0.5℃。

952第阶段试验中应设置多个独立容器不应从同一容器内反复取样每种缓冲溶液至少应在

..2,。,

被试物水解率之间取样次每次至少取个样品用农药母体标准样品标准物质和合适

10%~90%6,2,/

的分析仪器检测

。

953试验结束时应验证试验体系的无菌性被试物未发生明显降解的除外

..,。

96第3阶段试验

.

通过代谢物标准样品标准物质和合适的分析仪器对主要代谢物定性定量

/。

97试验周期

.

971第阶段试验的试验周期为

..15d。

972第阶段试验应进行至被试物水解率大于如在个温度下进行试验周期最长如

..290%。3,30d;

在下进行试验周期最长

25℃,120d。

10试验数据处理

101每次采样检测的被试物代谢物的量可用初始添加量的比例或表示如使用同位素标记

.、mg/L。

的被试物还应计算质量平衡回收率

,。

102按的一级动力学模型计算被试物和代谢物在试验条件下的水解速率常数和

.NY/T3150DT50。

103第阶段试验在个温度下进行的先计算出每个温度下的水解速率常数k再根据公式

.23,(),(1)

3

GB/T312702—2025

.

阿伦尼乌斯公式的对数形式以k对试验温度的倒数T作图线性回归得出活化能E和指

(),ln(1/),(a)

前因子A按公式计算水解速率常数按中的一级动力学模型计算水

(),(2)25℃,NY/T315025℃

解

DT50。

E

k=-a×1+A

lnRTln……(1)

式中

:

k水解速率常数

———;

E活化能单位为焦耳每摩尔

a———,(J/mol);

R摩尔气体常数取焦耳每摩尔开尔文

———,8.314[J/(mol·K)];

T热力学温度单位为开尔文

———,(K);

A指前因子

———。

E

a

k=A-RT

e……(2)

式中

:

自然底数取

e———,2.71828。

11质量控制

111分析方法的回收率

.

使用同位素标记的被试物时添加被试物后应立即提取检测至少两个样品以验证分析方法的重现

,,

性和回收率质量平衡回收率应为使用非标记被试物时应进行添加回收试验添加回

;90%~110%。,,

收浓度应至少为被试物初始添加浓度及初始添加浓度的每个浓度次重复分析方法回收率应

10%,5,

为

70%~110%。

112分析方法的重现性

.

使用同位素标记的被试物时通过重复测定培养足够时间的缓冲溶液或其提取液的方式验证被试

,

物和代谢物定量分析方法的重现性使用非标记被试物时通过添加回收试验验证分析方法的重现性

。,。

113分析方法的灵敏度

.

母体和代谢物分析方法的定量限应低于被试物初始添加量的

(LOQ)10%。

12试验报告

试验报告至少应包括以下内容

。

被试物

a):

通用名称化学名称化学文摘登录号号结构式对于放射性标记的被试物应指

1)、、(CAS)、(,

出标记位置及相关的理化性质

);

纯度

2);

放射化学纯度和比活度对于放射性标记的被试物

3)()。

缓冲溶液

b):

配制时间和配制方法

1);

缓冲溶液的摩尔浓度和

2)pH。

试验条件

c):

4

GB/T312702—2025

.

试验时间

1);

被试物添加量

2);

所用溶剂及添加被试物的方法

3);

添加被试物的缓冲溶液的量

4);

所用培养装置的描述

5);

缓冲溶液和试验容器灭菌方法

6);

试验期间的和温度

7)pH;

采样次数

8);

提取方法

9);

缓冲溶液中被试物及其代谢物的定性定量方法

10);

重复数量

11)。

试验结果

d):

分析方法的重现性及灵敏度

1);

分析方法的回收率

2);

质量平衡回收率对于同位素标记被试物

3)();

以表格形式表示的各重复试验结果及平均值

4);

第阶段试验的结果

5)1;

对试验结果的讨论和解释

6);

原始数据和图

7);

试验过程中发生的可能影响结果的事件偏离试验准则的情况后果及相关解释与评价

8),、。

如开展了第阶段试验应提供以下资料

e)2,:

每个和温度下被试物及其代谢物的浓度时间图

1)pH-;

以表格形式给出下被试物的降解动力学被试物及其代谢物的

2)25℃、DT50、DT90;

水解途径

3)。

5

GB/T312702—2025

.

附录A

资料性

()

缓冲溶液的配制

常用缓冲溶液的配制示例见表也可使用市售浓缩缓冲溶液或缓冲试剂配制

A.1,。

表A1缓冲溶液的配制示例

.

缓冲溶液名称组成