CN119421900A 密封蛋白18.2抗体、其制备方法及其用途 （整体分子公司）

2024.12.23PCT/US2023/0677682023.06.01WO2023/235808EN2023.12.07本文提供了针对密封蛋白18.2的抗体和组2合片段包括：轻链可变(VL)区，所述轻链可变(VL)区包括轻链CDRl(LCDR1)、轻链CDR2IDNO:19的氨基酸序列。NO:13的氨基酸序列具有至少85％同源性的氨基酸序列。源性的氨基酸序列。NO:13的氨基酸序列。3NO:19的氨基酸序列。结合片段包括：重链可变(VH)区，所述重链可变(VH)区包括重链CDR1(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)，其中所述HCDR1具有氨基酸序列SEQIDIDNO:30或SEQIDNO:33的氨基酸序列。IDNO:12的氨基酸序列具有至少85％同源性NO:12的氨基酸序列。23.根据权利要求16_22中任一项所述的抗体或NO:22的氨基酸序列。24.根据权利要求16_22中任一项所述的抗体或4NO:27的氨基酸序列。25.根据权利要求16_22中任一项所述的抗体或NO:30的氨基酸序列。26.根据权利要求16_22中任一项所述的抗体或NO:33的氨基酸序列。列；和所述LCDR3具有SEQIDNO:19的氨基酸序列；以及(ii)VH区，所述VH区包括HCDRl、IDNO:33的氨基酸序列。LNO:22的氨基酸序列。LLH27的氨基酸序列。LL5LHLLNO:33的氨基酸序列。L37.根据权利要求27_36中任一项所述的抗体39.根据权利要求38所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述肽接头包括序列40.根据权利要求38所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述肽接头不包括序列41.根据权利要求1_40中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，额外包括结合不同靶42.根据权利要求41所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述不同靶蛋白是CD3或46.一种核酸分子，所述核酸分子编码前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结649.一种药物组合物，所述药物组合物包括权利要求1_45中任一项所述的抗体或其抗52.根据权利要求49_51中任一项所述的药物组53.一种治疗受试者中的肿瘤或胃肿瘤的方法，所述方法包括给药权利要求1_45中任一项所述的密封蛋白18.2抗体或其抗原结合片段、或者权利要求49_52中任一项所述的药56.一种检测样品中密封蛋白18.2的存在或不存在的方法，所述方法包括使所述样品测到与密封蛋白18.2的结合表明不存在57.一种在受试者中诱导针对密封蛋白18.2蛋白的免疫应答的方法，所述方法包括在59.一种生成与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包61.根据权利要求59或权利要求60所述的方法，进一步包括分离与所述密封蛋白18.262.根据权利要求59_61中任一项所述的方法，其粒的条件下用密封蛋白18.2蛋白和逆转录病毒gag蛋白转染或转78用途(CLAUDIN18.2ANTIBODIES,METHODSOFMAKINGTHESAME,ANDUSESTHEREOF)”的美国临时专利申请序列号63/347,647的优先权和权益，该申请通过援引以其全文并入本[0004]本申请包含序列表，其已以XML文件形式电子提交并特此通过引用以其全文并入抗体或其抗原片段是通过在鸡中诱导针对密封蛋白18.2的免疫SEQIDNO:17或SEQIDNO:23的氨基酸序列；所述LCDR2具有SEQIDNO:18或911或SEQIDNO:13的氨基酸序列具有至与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段包括VL区，所述VL区具有与SEQIDNO:酸序列。酸序列。在一些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包括V具有SEQIDNO:33的氨基酸序列。与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段包括VH区，所述VH区具有与SEQIDNO:酸序列。具有SEQIDNO:18或SEQIDNO:24的氨基酸序列；和所述LCDR3具有SEQIDNO:19的氨基体或其抗原结合片段包括肽接头，该肽接头包括序列GQSSRSSGGGGSSGGGGS(SEQIDNO:1_5。在一些实施方式中，与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段包括不含有GQSSRSSGGGGSSGGGGS(SEQIDNO:14)[0021]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段结合密封蛋白18.2蛋白的残基E56、白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段的方法进一步包括生成包括密封蛋白18.2蛋白段的方法进一步包括在足以产生包括密封蛋白18.2蛋白的病毒样颗粒的条件下用密封蛋节密封蛋白18.2活性的方法包括使表达密封蛋白18.2的细胞和与细胞表面上的密封蛋白18.2活性的方法包括使表达密封蛋白18.2的细胞和包括与细胞表面上的密封蛋白18.2结封蛋白18.2活性的方法包括向受试者给药与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合药包括与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段的药物组合物，如本文所提供[0034]图1示出了针对密封蛋白18.2的三种人源化抗体MAb1(IM_44_09B03_1HB)、MAb2(IM_44_01E10_1HA)和MAb3(IM_44_05H06_1HD)与表达密封蛋白18.2的细胞的结合。图1还[0036]图2B示出了MAb2(IM_44_01E10_1HA)对人、猕猴和小鼠形式的密封蛋白18.2的特[0037]图2C示出了MAb3([0038]图3A示出了人源化抗体MAb1(IM_44_09B03_1HB)针对密封蛋白18.2的特异性优于针对密封蛋白18.1的特异性。MAb1(IM_44_09B03_1HB)[0039]图3B示出了人源化抗体MAb2(IM_44_01E10_1HA)针对密封蛋白18.2的特异性优于针对密封蛋白18.1的特异性。MAb2(IM_44_01E10_1HA)针对密封蛋白18.1未显示出交叉反[0040]图3C示出了人源化抗体MAb3(IM_44_05H06_1HD)针对密封蛋白18.2的特异性优于针对密封蛋白18.1的特异性。MAb3(IM_44_05H06_1HD)针对密封蛋白18.1未示出交叉反应[0041]图4A描绘了用于测定人源化抗体MAb1(IM_44_09B03_1HB)针对密封蛋白18.2的解[0042]图4B描绘了用于测定人源化抗体MAb2(IM_44_01E10_1HA)针对密封蛋白18.2的解[0043]图4C描绘了用于测定人源化抗体MAb3(IM_44_05H06_1HD)针对密封蛋白18.2的解[0046]图5B示出了对于人源化抗体MAb2(IM_44_01E10_1HA)的结合至关重要的密封蛋白[0047]图5C示出了对于人源化抗体MAb3(IM_44_05H06_1HD)的结合至关重要的密封蛋白[0052]本文提供与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式段是在其天然环境或天然结构中识别密封蛋白18.2的构象MAb(单克隆抗体)。不受任何特与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段是指与质膜(细胞膜)或双层结构中的分是可以在其天然结构和/或其天然环境中与密封蛋白18.2结合而不与密封蛋白18.1交叉完整人细胞中存在的天然密封蛋白18.2上的构象表位。在一些实施方式中，与密封蛋白白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段是MAbsMAb1(IM_44_09B03_1最广泛的含义使用并且具体涵盖但不限于单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗得scFv能够形成抗原结合所需的结构。有关scFv的综述，参见Pluckthun(1994)ThePharmacologyofMonoclonalAntibodies,vol.113,RosenburgandMoore中，本文提供的变体抗体(或其抗原片段)或抗体的抗原结合片段保留至少20％、50％、它们以显著干扰本文所述的结合化合物的实验或治疗用途的量(多克隆)抗体制剂通常包括其可变结构域(特别是单克隆抗体可以通过Kohleretal.(1975)Nature256:495首次描述的杂交瘤方法制备，或可以通过重组DNA方法制备(参见，例如，美国专利号4,816,567)。还可以使用例如581_597中描述的技术从噬菌体抗体文库中分离“单克隆抗体”。另参见Presta(2005)J.AllergyClin.Immunol.定结构域的抗体，其中，该第一和第二抗体来自不同物种。(美国专利号4,816,567；和责抗原识别的约100至110或更多个氨基酸的可变区。重链的羧基_末端部分可以限定主要J.Biol.Chem.252:6609_6616；Chothia,etal.,(1987)JMol.Biol.196:901_917或Chothia,etal.,(1989)Nature342:878_24_34(CDRL1)、50_56(CDRL2)和89_97(CDRL3)以及重链可变结构域中的残基31_35(CDRH1)、50_65(CDRH2)和95_102(CDRH3)；Kabatetal.(1991)SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesof(CDRL1)、50_52(CDRL2)和91_96(CDRL3)以及重链可变结构域中的26_32(CDRH1)、53_55源的供体抗体相同的抗原结合特异性和/或原是在细胞或颗粒(诸如病毒样颗粒)表面上表达的密封蛋白18.2蛋白。在一些实施方式国专利号：8,377,691、7,763,258、8,158,130和美国专利申请公开号20050123563和足以产生包括密封蛋白18.2蛋白的病毒样颗粒的条件下用密封蛋白18.2蛋白和gag蛋白转染或转导细胞。VLP可以如本文和上述参考文献中所述生成。在一些实施方式中，细胞是或抗体片段与预定抗原(例如密封蛋白18.2)或抗原上存在的表位结合。在一些实施方式些实施方式中，所设想的方法的抗体或源自抗体的抗原结合位点的结合化合物与其抗原al.,Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.,1988),Colliganetal.,eds.,CurrentProtocolsinImmunology,GreenePublishingAssoc.andWileyInterscience,N.Y.,(1992[0082]术语“同源物”意指与参考序列具有40％至100％序列同源性或同一性的蛋白序列。两条肽链之间的同一性百分比可以使用VectorNTIv.9.0.0(InvitrogenCorp.,抗体或其抗原结合片段与本文所述的序列具有至少[0089]在一些实施方式中，编码非人抗体或其抗原结合片段的DNA来源包括产生抗体的[0090]杂交细胞通过非人抗体产生细胞通常是针对天然或重组抗原或抗原蛋白序列的[0091]提供永生化功能的第二融合配偶体可以是淋巴母细胞状细胞或浆细胞瘤或骨髓不应将抗体识别为外来物。非人IgG抗体向人IgG抗体的转化是熟知的，并且一旦已知天然如以下中：RiechmannL,ClarkM,WaldmannH,WinterG(1988).Reshapinghumanantibodiesfortherapy”.Nature332(6162):332–323；TsurushitaN,ParkM,PakabuntoK,OngK,AvdalovicA,FuH,JiaA,VásquezM,KumarS.(2004)；以及“Humanizationofachickenanti_IL_12monoclonalantibody”Immu chickenmonoclonalantibodyusingphagedisplaysystem”MolImmunol.43(6):634_[0093]贡献编码嵌合抗体的抗原结合区的核苷酸序列的抗体产生细胞也可以通过转化泼斯坦__巴尔病毒)感染和转化，以生产永生化的抗体产生细胞(Kozboretal.,转化基因产物来转化B淋巴细胞。参见例如下文的Ausubel、下文的Harlow和下文的程序完成细胞融合。用于融合和选择杂交瘤以及筛选mAb的融合配偶体细胞系和方法是本[0096]可以修饰抗体的序列以产生人IgG抗体。可以修饰本文提供的序列的转换以产生提供的CDR和抗体序列还根据已知方法人源化或制备成完全人的。还可以将序列制备成本[0098]如本文所述，具有已知序列的抗体的产生是常规的并且可以通过任何方法进[0100]由本文描述的Ab识别的这些抗原结合区和/或表位的鉴定提供了生成具有与本申请的实施方式相似的相似结合特征和治疗或诊断效用的额外单克隆[0101]编码本文所述抗体或其抗原结合片段的核酸序列可以是基因组DNA或cDNA，或编al.(Proc.Natl.Acad.Sci.,USA84:cDNA序列可以在缺乏适当RNA剪接系统的细菌或其XXX编码序列的概率可以通过考虑异常碱基配对关系和特定密码子在表达抗体或抗体片段由于H链同种型负责抗体的各种效应功能，因此CH区的选择将由期望的效应功能诸如补体[0104]编码人免疫球蛋白C区的基因可以通过标准克隆技术从人细胞获得(Sambrook,etal.(MolecularCloning:ALaboratoryManual,2ndEdition,ColdSpringHarborPress,ColdSpringHarbor,N.Y.(1989)以及Ausubeletal.,eds.CurrentProtocols的区域通过以下产生：克隆编码密封蛋白18.2抗原特异性抗体的H和L链抗原结[0108]如果连接导致连续可翻译的序列而不改变或中断三联体阅读框，则称两个编码抗体或其抗原结合片段可以用于任何装置或方法中以检测抗原的源自的细胞或组织的细胞物质或其他蛋白。该术语是指其中分离的蛋白足够纯以进行分文库成员,来鉴定和分离针对多肽的单克隆抗体。用于生成和筛选噬菌体展示文库的技术放射金属螯合剂(二亚乙基三胺五乙酸(DTPA))的PE125Th和40胞菌(Pseudomonasaeruginosa)外毒素A链、蓖麻毒蛋白A链、相思豆毒蛋白A链、莫迪素瓜(momordicacharantia)抑制剂、麻疯树毒蛋白、巴豆毒蛋白、肥皂草(saponaria[0117]可以采用将本公开的抗体或抗体分子与各种部分缀合的Biochemistry13:1014；Pain,etal.,(1981)J.Immunol.Meth.40:219和Nygren,J.,[0125]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有选自下表的氨基酸序列的[0127]在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段包括含有轻链CDRl(LCDRl)、轻链CDR2(LCDR2)和轻链CDR3(LCDR3)的轻链。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段包括含有[0128]在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段包括含有重链CDRl(HCDR1)、重链CDR2(HCDR2)和重链CDR3(HCDR3)的重链。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段包括含有[0129]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有以下氨基酸序列的轻链CDR氨基酸序列SEQIDNO:17或SEQIDNO:23；LCDR2具有SEQIDNO:18或SEQI列。[0133]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有LCDRl、LCDR2和LCDR3的轻[0134]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有LCDR1、LCDR2和LCDR3的轻[0135]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有LCDR1、LCDR2和LCDR3的轻[0136]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有LCDRl、LCDR2和LCDR3的轻[0137]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0138]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0139]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0140]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0141]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0142]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0143]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0144]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0145]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0146]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0147]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0148]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0149]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0150]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0151]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0152]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0153]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0154]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0155]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0156]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0157]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0158]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0159]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0160]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0161]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0162]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0163]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0164]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0165]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0166]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0167]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0168]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0169]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0170]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0171]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0172]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0173]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0174]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0175]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0176]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0177]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0178]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0179]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0180]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0181]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0182]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0183]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0184]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0185]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0186]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0187]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0188]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0189]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0190]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0191]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0192]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0193]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0194]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0195]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0196]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0197]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0198]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0199]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0200]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括具有HCDR1、HCDR2和HCDR3的重[0461]在一些实施方式中，与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段包括VL序列具有SEQIDNO:19的氨基酸序列。[0462]在一些实施方式中，与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段包括VLIDNO:13的氨基酸序列具有至少93％同源性的氨有氨基酸序列SEQIDNO:17或SEQIDNO:23；LCDR2具有SEQIDNO:18或SEQIDNO:11或SEQIDNO:13的具有SEQIDNO:18或SEQIDNO:24的氨基酸序列；以及LCDR3序列具有SEQIDNO:19的氨NO:19的氨基酸序列。[0463]在一些实施方式中，与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段包括VL[0464]在一些实施方式中，与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段包括VLIDNO:13的氨基酸序列具有至少93％同一性的氨有氨基酸序列SEQIDNO:17或SEQIDNO:23；LCDR2具有SEQIDNO:18或SEQIDNO:11或SEQIDNO:13的氨基具有SEQIDNO:18或SEQIDNO:24的氨基酸序列；以及LCDR3序列具有SEQIDNO:19的氨NO:19的氨基酸序列。[0465]在一些实施方式中，与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段包括VL氨基酸序列，或者具有1_10个置换、缺失或插入的其任何变体，条件是VL区包括LCDR1、[0466]在一些实施方式中，与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段包括VL氨基酸序列，或者具有1_10个保守置换的其任何变体，条件是VL区包括LCDR1、LCDR2和[0467]在一些实施方式中，与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段包括VL氨基酸序列。[0468]在一些实施方式中，与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段包括VLL区具有SEQIDNO:5的氨基酸序列，或其变体，条件是VL区包括LCDR1、LCDR2和以及LCDR3序列具有SEQIDNO:19的氨基[0469]在一些实施方式中，与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段包括VLNO:33的氨基酸序列。[0471]在一些实施方式中，与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段包括VH[0472]在一些实施方式中，与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段包括VH具有SEQIDNO:21、SEQIDNO:26、SEQIDNO:29或SEQIDNO:32的氨基酸序列；以及具有SEQIDNO:21、SEQIDNO:26、SEQIDNO:29或SEQIDNO:32的氨基酸序列；以及具有SEQIDNO:21、SEQIDNO:26、SEQIDNO:29或SEQIDNO:32的氨基酸序列；以及具有SEQIDNO:21、SEQIDNO:26、SEQIDNO:29或SEQIDNO:32的氨基酸序列；以及具有SEQIDNO:21、SEQIDNO:26、SEQIDNO:29或SEQIDNO:32的氨基酸序列；以及具有SEQIDNO:21、SEQIDNO:26、SEQIDNO:29或SEQIDNO:32的氨基酸序列；以及具有SEQIDNO:21、SEQIDNO:26、SEQIDNO:29或SEQIDNO:32的氨基酸序列；以及具有SEQIDNO:21、SEQIDNO:26、SEQIDNO:29或SEQIDNO:32的氨基酸序列；以及具有SEQIDNO:21、SEQIDNO:26、SEQIDNO:29或SEQIDNO:32的氨基酸序列；以及列。[0473]在一些实施方式中，与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段包括VH[0474]在一些实施方式中，与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段包括VH具有SEQIDNO:21、SEQIDNO:26、SEQIDNO:29或SEQIDNO:32的氨基酸序列；以及具有SEQIDNO:21、SEQIDNO:26、SEQIDNO:29或SEQIDNO:32的氨基酸序列；以及具有SEQIDNO:21、SEQIDNO:26、SEQIDNO:29或SEQIDNO:32的氨基酸序列；以及具有SEQIDNO:21、SEQIDNO:26、SEQIDNO:29或SEQIDNO:32的氨基酸序列；以及具有SEQIDNO:21、SEQIDNO:26、SEQIDNO:29或SEQIDNO:32的氨基酸序列；以及具有SEQIDNO:21、SEQIDNO:26、SEQIDNO:29或SEQIDNO:32的氨基酸序列；以及具有SEQIDNO:21、SEQIDNO:26、SEQIDNO:29或SEQIDNO:32的氨基酸序列；以及具有SEQIDNO:21、SEQIDNO:26、SEQIDNO:29或SEQIDNO:32的氨基酸序列；以及具有SEQIDNO:21、SEQIDNO:26、SEQIDNO:29或SEQIDNO:32的氨基酸序列；以及列。[0475]在一些实施方式中，与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段包括VH氨基酸序列，或者具有1_10个置换、缺失或插入的其任何变体，条件是VH区包括HCDR1、NO:33的氨基酸序列。[0476]在一些实施方式中，与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段包括VH氨基酸序列，或者具有1_10个保守置换的其任何变体，条件是VH区包括HCDR1、HCDR2和基酸序列。[0478]在一些实施方式中，与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段包括VHH区具有SEQIDNO:4的氨基酸序列，或其变体，条件是VH区包括HCDR1、HCDR2和和HCDR3序列具有SEQIDNO:22的氨[0479]在一些实施方式中，与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段包括VHH区具有SEQIDNO:6或SEQIDNO:8的氨基酸序列，或者其变体，条件是VH区包括[0480]在一些实施方式中，与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段包括VHH区具有SEQIDNO:10的氨基酸序列，或其变体，条件是VH区包括HCDR1、HCDR2和和HCDR3序列具有SEQIDNO:30的氨基酸序列。VHNO:30或SEQIDNO:33的氨基酸序列。NO:17_33中任一个所示的氨基酸序列的肽。[0523]VL和VH序列可以呈任何形式，包括但不限于其中VL和VH区与肽接头连接的scFv形而是用连续序列连接。可用于连接本文提供的各种肽的肽接头的实例包括但不限于：合的抗体或其抗原结合片段包括不含有GQSSRSSGGGGSSGGGGS(SEQIDNO:14)序列的肽接双特异性抗CD3x抗CLDN18.2[0526]在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段结合密封蛋白18.2蛋白的残基E56、受的载体或赋形剂共混。参见例如Remington'sPharmaceuticalSciencesandU.S.Pharmacopeia:NationalFormulary,MackPublishingCompany,干粉、浆液、水性溶液或混悬剂的形式进行制备(参见，例如，Hardman,etal.(20GoodmanandGilman’sThePharmacologicalBasisofTherapeutics,McGraw_Hill,NewYork,NY；Gennaro(2000)Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy,Lippincott,Williams,andWilkins,NewYork,NY；Avis,etal.(eds.)(1993)PharmaceuticalDosageForms:ParenteralMedications,MarcelDekker,NY；Lieberman,etal.(eds.)(1990)PharmaceuticalDosageForms:Tablets,MarcelDekker,NY；Lieberman,etal.(eds.)(1990)PharmaceuticalDosageForms:DisperseSystems,MarcelDekker,NY；WeinerandKotkoskie(2000)ExcipientToxicityand[0536]单独给药或与另一试剂联合给药的药物组合物的毒性和治疗功效可以通过细胞和ED50(50％群体的治疗有效剂量)。毒性作用与治疗作用之间的剂量比为治疗指数(LD50/乎无毒性或无毒性的ED50的循环浓度范围内。剂量可以根据所采用的剂型和给药途径在此[0537]在一些实施方式中，根据美国医师用药手册(Physicians'De(ThomsonHealthcare；57thedition(2002年11月1日))向受试者给药本公开的药物组合少一种额外的治疗剂诸如但不限于用于治疗肿瘤胃肿与至少一种额外的治疗剂诸如但不限于用于治疗癌症或与癌症相关的病症的治疗剂联合Emtansine)、阿霉素(Adriamycin)(盐酸多柔比星)、双马来酸盐阿法替尼(AfatinibDimaleate)、飞尼妥(Afinitor)(依维莫司(Everolimus))、奥康泽(Akynzeo)(奈妥匹坦莫德(Imiquimod))、阿地白介素(Aldesleukin)、安圣莎(Alecensa)(艾乐替尼罗巴(Aliqopa)(盐酸可泮利塞(CopanlisibHydrochloride))、注射用马法兰(Alkeran)帕鲁胺(Apalutamide)、阿瑞匹坦(Aprepitant)、Aranesp(达依泊汀α(DarbepoetinAlfa))、阿可达(Aredia)(帕米膦酸二钠)、瑞宁得(Arimidex)(阿那罗唑)、阿诺新抗(Atezolizumab)、安维汀(Avastin)(贝伐珠单抗(Bevacizumab))、阿维鲁单抗(Avelumab)、阿基仑赛(AxicabtageneCiloleucel)、阿昔替尼(Axitinib)，阿扎胞苷鲁单抗)、BEACOPP、Beleodaq(贝利司他(Belinostat))、贝利司他、盐酸苯达莫司汀加伊妥珠单抗(InotuzumabOzogamicin))、贝伐珠单抗(Bevacizumab)、贝沙罗汀酸博来霉素、兰妥莫单抗(Blinatumomab)、倍利妥(Blincyto)(兰妥莫单抗)、硼替佐米(Bortezomib)、Bosulif(波舒替尼(Bosutinib))、波舒替尼、Braftovi(康奈非尼(Encorafenib))、维布妥昔单抗(BrentuximabVedotin)、布加替尼、BuMel、白消安Carac(氟尿嘧啶一局部)、卡铂、卡铂一紫杉醇、卡非佐米(Carfilzomib)、卡莫司汀立滨(Cladribine)、氯法拉滨(Clofarabine)、Clolar(氯法拉滨)、CMF、考比替尼(Cobimetinib)、Cometriq(卡博替尼一S一苹果酸盐)、盐酸可泮利塞、COPDAC、克必妥(考比替尼)、克唑替尼(Crizotinib)、CVP、环磷酰胺、希冉择(Cyramza)(雷莫芦单抗(Ramucirumab))、阿糖胞苷、阿糖胞苷脂质体、Cytosar一U(阿糖胞苷)、达拉非尼苷钠)、地加瑞克(Degarelix)、地尼白介素(DenileukinDiftitox)、地舒单抗(Denosumab)、DepoCyt(阿糖胞苷脂质体)、地塞米松(Dexamethasone)、盐酸右雷佐生(DexrazoxaneHydrochloride)、地努图希单抗(Dinutuximab)、多西他赛(Docetaxel)、(Elotuzumab)、Eloxatin(奥沙利铂(Oxaliplatin))、艾曲波帕乙醇胺(Eltrombopag瑞匹坦)、Empliciti(依妥组单抗)、甲磺酸恩西地平(Enasiden洛替尼(ErlotinibHydrochloride)、Erwinaze(天冬酰胺酶菊欧氏杆菌)、Ethyol(氨磷(盐酸多柔比星脂质体)、依维莫司(Everolimus)、易维特(Evista)(盐酸雷洛昔芬(帕比司他(Panobinostat))、芙仕得(Faslodex)(氟维司群(Fulvestrant))、FEC、弗隆(Femara)(来罗唑(Letrozole))、非格司亭(Filgrastim)、费蒙格(Firmagon)(地加瑞克维司群(Fulvestrant)、Fusilev(甲酰四氢叶酸钙)、伽蜜芬(Gamifant)(依帕伐单抗一酸格拉司琼、Granix(非格司亭(Filgrastim))、海乐卫(Halaven)(甲磺酸艾日布林)、Hemangeol(盐酸普萘洛尔(PropranololHydrochloride))、赫赛汀Hylecta(Herceptin羟基脲、Hyper_CVAD、Ibrance(哌柏西利(Palbociclib))、替伊莫单抗(IbritumomabTiuxetan)、依鲁替尼(Ibrutinib)、ICE、Iclusig(盐酸泊那替尼(Ponatinib马替尼、亿珂(Imbruvica)(依鲁替尼(Ibrutinib))、英飞凡(Imfinzi)(度伐利尤单抗(卡巴他赛(Cabazitaxel))、赫塞莱(Kadcyla)(恩特曲妥珠单抗(Ado_TrastuzumabEmtansine))、Kepivance(帕利夫明(Palifermin))、可瑞达(Keytruda)(帕博利珠单抗(Pembrolizumab))、凯丽隆(Kisqali)(瑞波西利(Ribociclib))、Kymriah(替沙仑赛磺酸拉帕替尼(LapatinibDitosylate)、硫酸拉罗替尼(LarotrectinibSulfate)、Lartruvo(奥拉单抗(Olaratumab))、来那度胺(Lenalidomide)、甲磺酸乐伐替尼抗_tdfk(moxetumomabpasudotox_tdfk))、Lupron(乙酸亮脯利特(LeuprolideMatulane(盐酸丙卡巴肼)、盐酸氮芥、醋酸甲地孕酮、迈吉宁(Mekinist)(曲美替尼C、盐酸米托蒽醌(MitoxantroneHydrochloride)、莫格利珠单抗_kpkc(mogamulizumab_kpkc)、帕西妥莫单抗_tdfk(MoxetumomabPasudotox_tdfk)、Mozobil(普乐沙福妥珠单抗奥唑米星(Gemtuzumabozogamicin))、保津(Neupogen)(非格司亭(Filgrastim))、多吉美(Nexavar)(甲苯磺酸索拉非尼鲁米特、恩莱瑞(Ninlaro)(柠檬酸伊沙佐米(IxazomibCitrate))、甲苯磺酸尼拉帕利(NiraparibTosylate)一水合物、纳武利尤单抗(Nivolumab)、Nplate((罗米司亭(OmacetaxineMepesuccinate)、Oncaspar(培门冬酶)、盐酸昂丹司琼(Ondansetron)、琼、盐酸帕洛诺司琼和奈妥匹坦、帕米膦酸二钠、帕木单抗(Panitumumab)、帕比司他Portrazza(奈妥木单抗(Necitumumab))、Poteligeo(莫格利珠单抗_kpkc)、普拉曲沙(Pralatrexate)、泼尼松(Prednisone)、盐酸丙卡巴肼、Procrit(依泊汀α(Epoetin尼(Regorafenib)、Relistor(人透明质酸酶)、利妥昔单抗、利妥昔单抗和人透明质酸酶、盐酸罗拉匹坦(RolapitantStivarga(瑞戈非尼)、苹果酸舒尼替尼(SunitinibMalate)、Sustol(格拉司琼(Granisetron))、Sutent(苹果酸舒尼替尼)、Sylatr(Osimertinib))、甲苯磺酸他拉帕尼(TalazoparibTosylate)、滑石、拉合他莫基PFS(阿糖胞苷)、特罗凯(Tarceva)(盐酸厄洛替尼(ErlotinibHydrochloride))、Targretin(贝沙罗汀(Bexarotene))、达希纳(Tasigna)(尼罗替尼(Nilotinib))、利度胺)、硫鸟嘌呤、噻替派(Thiotepa)、Tibsovo(艾伏尼布(Ivosidenib))、替沙仑赛(TopotecanHydrochloride)、托瑞米芬(Toremifene)、Torisel(坦罗莫司嘧啶(TipiracilHydrochloride)、Trisenox(三氧化二砷)、Tykerb(二甲苯磺酸拉帕替万珂(Velcade)(硼替佐米)、维莫非尼(Vemurafenib)、唯可来(Venclexta)(维奈克拉雷佐生)、阿柏西普(Ziv一aflibercept)、枢复宁(Zofran)(盐酸昂丹司琼)、诺雷得(唑来膦酸)、Zydelig(伊德利塞(Idelalisib))、赞可达(Zykadia)(塞瑞替尼)、泽珂统中(例如在涂有组织特异性抗体的脂质体中)给药抗体或其抗原结合片段或其药物组合Oxfordshire,UK；Kresina(ed.)(1991)MonoclonalAntibodies,CytokinesandPeptideTherapyinAutoimmuneDisal.(20003)CancerIm的症状的发展和/或降低此类疾患的症状的严重程度。这些术语进一步包括改善现有不受断量度或参数改善至少10通常至少20优选至少约30更优选至少40和最优选蛋白上的表位，并展示体外和/或体内密封蛋白18.2抑制或治疗活性，能够抑18.2功能的抗体或其抗原结合片段均适合作为治疗人和动物中密封蛋白18.2相关病症的的免疫应答不会导致不可接受的短循环半衰期或在受试者中诱导对MAb的免疫应答。在一如本文提供的)混合使用或给药。在向患者提供能够与密封蛋白18.2结合的抗体或其抗原供能够治疗与密封蛋白18.2活性相关的病症或用于治疗密封蛋白18.2相关病理的抗体或剂盒包括容纳与密封蛋白18.2蛋白的表位结合的一种或多种抗体或其抗原结合片段的容或闭合)具有特异性。在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段与细胞膜中的密封蛋白定包括确定测试抗体或其抗原结合片段是否与蛋白结合并被包括本文提供的序列的抗体法包括在足以诱导免疫应答的条件下向受试者给药密封蛋白18.2抗原。在一些实施方式施方式中，对通过使用表达密封蛋白18.2蛋白的VLP生成的抗体或其抗原结合片段进行分因此，可以通过检测密封蛋白18.2VLP与文库的蛋白成员之一的结合来鉴定抗体或其抗原18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段的方法进一步包括在足以产生包括密封蛋白18.2蛋白的病毒样颗粒的条件下用密封蛋白18.2蛋白和逆转录病毒gag蛋白转染或转导细胞。节密封蛋白18.2活性的方法包括使表达密封蛋白18.2的细胞和与细胞表面上的密封蛋白18.2活性的方法包括使表达密封蛋白18.2的细胞和包括与细胞表面上的密封蛋白18.2结封蛋白18.2活性的方法包括向受试者给药与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合药包括与密封蛋白18.2蛋白结合的抗体或其抗原结合片段的药物组合物，如本文所提供原结合片段包括：轻链可变(VL)区，所述轻链可变区包括轻链CDRl(LCDR1)、轻链CDR2序列；所述LCDR2具有SEQIDNO:18或SEQIDNO:24的氨基IDNO:13的氨基酸序列具有至少85％同源性的氨基酸序列。99％同源性的氨基酸序列。NO:19的氨基酸序列。IDNO:30或SEQIDNO:33的氨基酸序列。SEQIDNO:12的氨基酸序列具有至少85％同源性的氨基酸IDNO:33的氨基酸序列。L酸序列SEQIDNO:20；所述HCDR2具有SEQIDNO:21的氨基酸序列；IDNO:22的氨基酸序列。LL酸序列SEQIDNO:25；所述HCDR2具有SEQIDNO:26的氨基酸序列；IDNO:27的氨基酸序列。LLLH酸序列SEQIDNO:28；所述HCDR2具有SEQIDNO:29的氨基酸序列；LLH酸序列SEQIDNO:31；所述HCDR2具有SEQIDNO:32的氨基酸序列；IDNO:33的氨基酸序列。L[0609]39.根据实施方式38所述的抗体或其抗原[0611]41.根据实施方式1_40中任一项所[0616]46.一种核酸分子，所述核酸分[0618]48.一种细胞，所述细胞包括实施方式4[0619]49.一种药物组合物，所述药物组合物包括实[0623]53.一种治疗受试者中的肿瘤或胃肿瘤的中任一项所述的密封蛋白18.2抗体或其抗原结合片段、或者实施方式4未检测到与密封蛋白18.2的结合表明不存在密封蛋白18括在足以诱导免疫应答的条件下向所述受试者给药包括所述密封蛋白18.2蛋白的病毒样[0631]61.根据实施方式59或样颗粒的条件下用密封蛋白18.2蛋白和逆转录病毒gag蛋白转染或转[0635]65.根据实施方式63或实施方式64所述的方[0641]将DNA和VLP用于免疫和噬菌体展示以分蛋白的天然结构对于引发功能相关的MAb至关重要，其通常识别细胞外膜蛋白表面上的构象结构。质粒DNA可用于诱导完整的多跨膜蛋白以其天然拓扑和构象在免疫宿主细胞表面呈现(EdenT,MenzelS,WesolowskiJ,BergmannP,NissenM,DubberkeG,SeyfriedF,AlbrechtB,HaggF,&Koch_NolteF(2018)AcDNAimmunizationstrategytogeneratenanobodiesagainstmembr