DB44-T 2887-2026饲料中致病微生物的基因筛查技术规程

44CodeofpracticeforgenescreeningofpathogenicmicroorganismsinfeedsI 2 2 5 6本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定1饲料中致病微生物的基因筛查技术规程GB4789.6食品安全国家标准食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌GB4789.8食品安全国家标准食品微生物学检验小肠结肠炎耶尔森氏菌GB4789.9食品安全国家标准食品微生物学检验空肠弯曲菌GB4789.10食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄GB4789.11食品安全国家标准食品微生物学检验β型溶血性链球菌GB4789.30食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏GB4789.44食品安全国家标准食品微生物学检验创伤弧GB/T26426饲料中副溶血性弧菌的GB/T26427饲料中蜡样芽孢杆菌的GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物GB/T42959饲料微生物检验采样25试剂和材料5.2商用试剂商用试剂主要有TaqDNA聚合酶、10×PCR缓冲液（含MgCl₂)、dNTPs混合液、6×上样缓冲入冰乙酸57.1mL，用水定容至1L。用时以水稀释至1×使用。标准菌株主要有金黄色葡萄球菌GDMCC1.441、蜡样芽孢杆菌GDMCC1.3589、副溶血性弧菌致病微生物的基因筛查试验流程包括样品采样、36.2采样6.3样品制备、增菌培养和分离4），5——水 压电泳20min～40min，凝胶成像分析系统分析结果并保存记录。6.6.2如空白对照、阴性对照出现与阳性对照预期相应大小的扩增条带，或阳性对照未出现预期大小检测过程中防止交叉污染按照GB/T2746普通PCR检测的引物、扩增条带、反应参数femA5’-aaaaaagcacataacaagcg-3’5’-gataaagaagaaaccagcag-3’5’-aacagcgttgaaacgagtgg-3’5’-atttggtggaagagggattac-3’（Streptococcuspyogenes）5’-ccccracagatacacggcta-3’5’-ggggttccatctcgtatgaa-3’rfbE5’-attgcgctgaagcctttg-3’5’-cgagtacattggcatcgtg-3’5’-aataccgcataacgtcttcg-3’5’-cttcttctgcgagtaacgtc-3’7（Klebsiellapneumoniae）phoE5’-tggcccgcgcccagggttcgaaa-3’5’-gatgtcgtcarcgttgatgccgag-3’ompW5’-caccaagaaggtgactttattgtg-3’5’-gaacttataaccacccgcg-5’-ccgcggtacaggttggcgca-3’5’-cgccacccactttcgggcc-3’（Vibrioparahaemolyticus）5’-aaagcggattatgcagaagcactg-3’5’-gctactttctagcattttctctgc-3’prfA5’-gatacagaaacatcggttggc-3’5’-gtgtaatcttgatgccatcag-3’（Campylobacterjejuni）5’-ga