GBT 47386-2026 肥料中芸苔素内酯的测定 高效液相色谱法标准立项发展报告

肥料中芸苔素内酯的测定高效液相色谱法标准立项发展报告StandardizationDevelopmentReport:DeterminationofBrassin内酯inFertilizersbyHighPerformanceLiquidChromatography摘要关键词：芸苔素内酯；肥料检测；高效液相色谱法；国家标准；方法标准；质量控制1引言1.1研究背景芸苔素内酯（Brassinolide，BR）是继生长素、赤霉素、细胞分裂素、脱落酸和乙烯之后被发现的第六大类植物激素，于1979年由美国农业部科学家从油菜花粉中首次分离鉴定。其在极低浓度下即表现出显著的生理活性，能够促进细胞伸长与分裂、提高光合作用效率、增强作物抗逆性能、改善果实品质。经多年研究证实，芸苔素内酯及其类似物（如24-表芸苔素内酯、28-高芸苔素内酯等）在提高作物产量、改善农产品品质以及增强作物对干旱、盐碱、低温等逆境的耐受性方面效果显著，已被广泛应用于粮食作物、经济作物和蔬菜水果的生产实践。近年来，含芸苔素内酯的功能性肥料产品（包括水溶肥料、复合肥料、有机肥料等）在市场上大量涌现。据行业统计，截至2025年底，我国取得登记的含芸苔素内酯肥料产品已超过300个，市场规模以年均超过15%的速度增长。此类产品兼具肥料营养供给与植物生长调节的双重功能，在化肥减量增效行动中发挥着日益重要的作用。然而，肥料中芸苔素内酯含量测定方法标准的缺失已成为制约行业发展的突出瓶颈。目前，现行有效的国家标准和行业标准中尚无针对肥料基质中芸苔素内酯检测的统一方法。这一情况导致不同企业生产的同类型产品在有效成分标注、质量承诺等方面缺乏可比性，监管执法部门在开展市场抽检与质量监督时也面临"无标可依"的困境。部分企业存在虚标含量、偷减有效成分等行为，严重损害了规范经营企业和广大农民用户的合法权益。1.2标准立项的必要性（1）响应国家标准化战略与政策导向（2）填补检测方法标准空白经全国标准信息公共服务平台检索核实，截至本报告编制之时，我国尚无肥料中芸苔素内酯检测的国家标准或行业标准。现有的芸苔素内酯检测标准主要面向原药、制剂或植物样品（如NY/T3659-2020《农作物中芸苔素内酯的测定》等），其前处理方法和基质适配性均不适用于成分复杂的肥料样品，亟需根据肥料这一特殊基质建立专门的方法标准。（3）迫切的市场与监管需求含芸苔素内酯肥料的登记管理需要有效的检测技术作为支撑。根据《肥料登记管理办法》的规定，含植物生长调节剂的肥料产品在登记时需要提供有效成分含量检测方法，而生产企业自行制定的方法在规范性、科学性和重现性方面差异显著。制定统一的国家标准方法，是保障登记管理规范性和公平性的必要条件。同时，在历年农业农村部组织的肥料质量监督抽查中，含芸苔素内酯肥料产品的质量合格率明显低于普通肥料平均水平，建立健全检测标准体系的紧迫性日益凸显。2标准研制技术路线与核心内容2.1标准适用范围与总体技术思路本标准规定了采用高效液相色谱法（HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC）测定肥料中芸苔素内酯含量的方法。适用于水溶肥料、复合肥料、掺混肥料、有机肥料等含芸苔素内酯的固体和液体肥料产品中芸苔素内酯含量的测定。标准制定遵循以下总体技术思路：通过优化样品提取、净化、色谱分离和检测条件，建立适用于不同肥料基质的高灵敏度、高选择性检测方法；通过全面的方法学验证，确认方法的准确性、精密度和适用性；最终形成科学、规范、易于推广的标准文本，为行业监管和产品质量控制提供统一的技术依据。2.2方法原理本标准所确立的检测方法基于以下原理：试样中芸苔素内酯经有机溶剂提取、固相萃取柱净化后，采用反相高效液相色谱柱进行分离，以紫外检测器（或二极管阵列检测器）在特定波长下进行检测，以色谱保留时间定性、外标法定量。芸苔素内酯分子结构中包含多个羟基和羰基官能团，在200~230nm紫外波段具有较强的吸收特征，方法具有足够的灵敏度和选择性。2.3关键技术要点（1）样品前处理考虑到肥料样品基质复杂、芸苔素内酯含量低的特点，样品前处理是整个检测流程的关键环节。标准对液体肥料和固体肥料分别规定了差异化的样品制备方法。液体肥料经稀释或直接提取后进行固相萃取净化；固体肥料经粉碎、过筛、均质后，采用合适的提取溶剂进行振荡提取或超声辅助提取。研究中系统考察了提取溶剂的种类（甲醇、乙腈、乙酸乙酯等）、用量和提取时间对回收率的影响，最终确定了最优化的提取方案。净化步骤采用混合型固相萃取柱（如HLB或C₁₈小柱），有效去除肥料中大量存在的无机盐、腐殖酸、表面活性剂等基质干扰物。通过对上样流速、淋洗液比例和洗脱溶剂等条件的系统优化，确保目标分析物在净化过程中实现良好的回收率（>85%）和基质效应消除效果。（2）色谱分离条件标准对液相色谱条件给出了明确规定：采用C₁₈反相色谱柱（推荐规格：250mm×4.6mm，粒径5μm），柱温控制在30~35℃；流动相采用甲醇-水或乙腈-水体系，梯度洗脱程序经过系统优化，确保芸苔素内酯与肥料中可能存在的其他植物生长调节剂、杂质峰实现良好分离；流速为1.0mL/min；检测波长设定于200~210nm区间。（3）方法验证结果遵循GB/T27417-2017《合格评定化学分析方法确认和验证指南》和《农药残留分析质量控制指南》等文件的技术要求，标准研制过程中开展了系统的方法学验证。结果表明：方法的检出限（LOD）为0.05mg/kg，定量限（LOQ）为0.2mg/kg，满足现行肥料产品中芸苔素内酯标识含量通常在1~100mg/kg范围的检测需求；在三个添加水平（0.2、1.0、10.0mg/kg）下，五种典型肥料基质（大量元素水溶肥、含腐殖酸水溶肥、复合肥、有机肥、液体肥）的平均加标回收率处于88.6%~104.2%之间，相对标准偏差（RSD，n=6）为1.8%~6.5%，各基质间的回收率差异无统计学意义。方法在0.2~50mg/L浓度范围内线性关系良好，相关系数r＞0.999。2.4与国内外相关标准的技术比对当前，国际上尚缺乏专门针对肥料中芸苔素内酯检测的标准方法。国内已有的相关检测标准主要聚焦于不同基质和应用场景，如GB23200.109-2018《植物源性食品中芸苔素内酯类农药残留量的测定液相色谱-质谱联用法》针对植物源性食品基质，NY/T3659-2020《农作物中芸苔素内酯的测定》面向农作物样品。这些标准虽涉及同一目标分析物，但样品基质与前处理方法与本标准的差异显著。植物源性食品和农作物基质以前处理净化去除色素、糖类等内源性干扰为主，而肥料基质则需着重消除高浓度的无机盐、螯合剂以及多种肥料添加剂的干扰。此外，液相色谱-质谱联用法仪器成本高、操作要求高，难以在基层检测机构和生产企业普遍推广。本标准以高效液相色谱-紫外检测法为技术手段，兼顾了灵敏度、选择性和经济性，更适应我国各级检测机构的装备水平，具有良好的可操作性和普及推广前景。3标准主要参与起草单位介绍本标准由全国肥料和土壤调理剂标准化技术委员会（SAC/TC105）归口管理。该委员会成立于1984年，是经国家标准化管理委员会批准设立的全国性肥料领域标准化专业技术组织，负责全国肥料产品、肥料原料、肥料检测方法等领域的标准化技术归口工作。委员会秘书处设于上海化工研究院有限公司。上海化工研究院有限公司（以下简称"上海化工院"）创建于1956年，是我国化学化工领域具有重要影响力的综合性研究开发机构。作为全国肥料和土壤调理剂标准化技术委员会秘书处承担单位，上海化工院始终以标准化科研为立院之本，迄今已主导或参与制修订国际标准、国家标准和行业标准400余项，其中肥料领域标准占国内现行有效标准的百分之六十以上。在肥料与植物生长调节剂分析检测领域，上海化工院具备深厚的研究积累，建有国家化肥质量检验检测中心（上海）、国家认定企业技术中心等高水平科研与检测平台。近年来，该院围绕含功能型肥料中的植物生长调节剂检测技术持续开展系统性研究，先后承担并完成了芸苔素内酯、吲哚乙酸、赤霉素等多项检测方法的研究课题，在高效液相色谱法测定复杂肥料基质中微量活性成分方面积累了丰富的实践经验，为本标准的研制提供了强有力的平台和技术支撑。标准起草组核心成员由该院分析化学、肥料工艺和标准化等专业方向的技术骨干组成，长期从事肥料分析方法研究和标准制修订工作。4标准预期的应用与实施效益4.1在市场监管中的应用标准发布实施后，将成为各级农业农村行政主管部门和市场监管部门开展含芸苔素内酯肥料产品质量监督抽查的执法依据。通过统一检测方法，可以有效解决当前不同检测机构因采用不同方法导致的检测结果不可比、判定结论不一致等问题，进一步提高监管的科学性和公信力。4.2在行业管理中的应用在肥料登记环节，标准的实施为登记评审提供了统一的检测依据，有利于不同企业产品间的横向比较和公平审查。在证后监管中，依据该标准开展的跟踪检测将有助于及时发现和纠正产品有效成分含量与登记指标不符等问题，推动登记管理制度落地见效。4.3在质量控制和国际贸易中的作用标准的发布为企业产品质量内控提供了明确的技术参照，有利于规范含芸苔素内酯肥料产品的生产。与此同时，统一的检测方法也有助于破除国际贸易中的技术性贸易壁垒，对我国含芸苔素内酯肥料产品的出口形成积极的技术支撑。5结论与展望GB/T47386-2026《肥料中芸苔素内酯的测定高效液相色谱法》是我国肥料领域植物生长调节剂检测方法标准化建设的一项重要成果。该标准首次以国家标准的形式确立了肥料基质中芸苔素内酯含量检测的统一技术方法，填补了该领域长期以来的标准空白。标准采用的样品前处理方案充分考虑了不同剂型肥料产品的基质差异性，技术路线科学合理、方法学验证数据翔实可靠，方法的灵敏度、准确度和精密度均能满足现行肥料产品监管的实际需求，居国内领先水平并具有与国际接轨的适用性。展望未来，随着生物刺激素类肥料产业的持续壮大和芸苔素内酯类产品应用场景的不断拓展，建议有关方面以本标准为基础，逐步建立健全覆盖吲哚乙酸、赤霉酸、胺鲜酯等常用植物生长调节物质的系列检测方法标准，构建系统完善的肥料功能性成分检测标准体系。同时，应适时跟踪液相色谱-串联质谱等高通量、高灵敏度技术的发展趋势，研究建立多组分同时测定的方法标准，以适应行业快速发展和监管能力不断提升的需求。标准的有效实施还需要各级标准化主管部门、行业协会和检测机构的协同推动，通过系统化的宣贯培训推动标准在行业的落地应用，使标准的技术价值切实转化为产品质量提升和行业规范发展的实际效能。参考文献[1]国家标准化管理委员会.GB/T47386-2026肥料中芸苔素内酯的测定高效液相色谱法[S].北京:中国标准出版社,2026.[2]中共中央,国务院.国家标准化发展纲要[Z].2021-10-10.[3]农业农村部."十四五"全国农业农村科技发展规划[Z].2022-01-06.[4]国家市场监督管理总局,国家标准化管理委员会.GB/T27417-2017合格评定化学分析方法确认和验证指南[S].北京:中国标准出版社,2017.[5]农业农村部.NY/T3659-2020农作物中芸苔素内酯的测定[S].北京:中国农业出版社,2020.[6]国家卫生健康委员会,农业农村部,国家市场监督管理总局.GB23200.109-2018植物源性食品中芸苔素内酯类农药残留量的测定液相色谱-质谱联用法[S].北京:中国标准出版社,2018.[7]GroveMD,SpencerGF,RohwedderWK,etal.Brassinolide,aplantgrowth-promotingsteroidisolatedfromBrassicanapuspollen[J].Nature,1979,281(