ISO 21872-12017Amd 12023 食物链微生物学.弧菌的水平测定方法.第1部分潜在的肠致病性副溶血性弧菌、霍乱弧菌和创伤弧菌的检测.修改件1包括培养基和试剂的性能测试标准立项发展报告

ISO21872-1:2017/Amd1:2023标准立项发展报告StandardizationDevelopmentReport:MicrobiologyoftheFoodChain—HorizontalMethodfortheDeterminationofVibriospp.—Part1:DetectionofPotentiallyEnteropathogenicVibrioparahaemolyticus,VibriocholeraeandVibriovulnificus—Amendment1:InclusionofPerformanceTestingofCultureMediaandReagents摘要随着全球食品安全问题日益严峻，食源性致病菌的精准检测已成为国际食品贸易和公共卫生防控的关键环节。副溶血性弧菌、霍乱弧菌和创伤弧菌作为三类主要的潜在肠道致病性弧菌，广泛分布于海水、海产品及养殖环境中，对公众健康构成持续威胁。国际标准ISO21872-1:2017规定了食品链中弧菌水平检测的方法框架，而2023年发布的修改件Amd1则针对培养基和试剂的性能测试进行了重要补充，填补了原标准在该领域的空白。本报告全面梳理了该修改件的立项背景、技术内容、核心修订要点及其行业影响，重点分析了培养基性能测试的引入对实验室质量控制体系的强化作用，并对标准参与单位的工作机制进行了介绍。报告指出，该修改件的发布顺应了国际食品微生物检测从“结果导向”向“过程控制”转变的技术趋势，有力促进了全球食品检测方法的一致性和结果互认性。未来，该标准的持续优化将在分子生物学技术融合、快速检测方法验证及智能化质量控制等方面进一步拓展。关键词：弧菌检测；食物链微生物学；培养基性能测试；国际标准修订；食品微生物学；质量控制；ISO21872；副溶血性弧菌Keywords:Vibriodetection;Foodchainmicrobiology;Culturemediaperformancetesting;Internationalstandardamendment;Foodmicrobiology;Qualitycontrol;ISO21872;Vibrioparahaemolyticus1引言弧菌属（*Vibrio*）细菌广泛存在于海洋和河口环境中，其中副溶血性弧菌（*Vibrioparahaemolyticus*）、霍乱弧菌（*Vibriocholerae*）和创伤弧菌（*Vibriovulnificus*）是导致人类食源性疾病的重点病原体。副溶血性弧菌是亚太地区食源性腹泻的主要病原菌之一，常与生食或未充分煮熟的海产品相关；霍乱弧菌的某些血清型（尤其是O1和O139）可引发烈性肠道传染病，具有暴发流行风险；创伤弧菌则可通过伤口感染或生食海产品引发严重的败血症，致死率在免疫低下人群中极高。三类弧菌的致病性和流行特征各有不同，但都对食品安全检测提出了严格要求。在全球贸易日益频繁的背景下，食品中弧菌的检测方法亟需国际统一，以确保不同国家和地区实验室检测结果的可比性和互认性。国际标准化组织（ISO）下属的ISO/TC34/SC9（食品微生物学分技术委员会）负责制定食品链微生物检测相关国际标准。ISO21872-1:2017即为该技术委员会发布的关于弧菌水平检测方法的核心文件。然而，在ISO21872-1:2017的实践应用中，ISO/TC34/SC9逐渐认识到原标准缺少对培养基和试剂质量的系统性能验证要求。培养基作为弧菌分离和鉴定的核心耗材，其质量直接决定检测结果的准确性和可靠性。不同厂商生产的培养基在批间差异、选择性、促生长能力等方面存在显著差异，若缺乏统一的性能评价标准，将直接影响不同实验室间的检测结果一致性。因此，2021年ISO/TC34/SC9正式启动了对ISO21872-1:2017的修改工作，经过WG2工作组（食品中致病菌检测方法工作组）多次讨论和草案审议，最终于2023年2月正式发布了ISO21872-1:2017/Amd1:2023修改件。本报告旨在全面介绍该修改件的立项背景、技术内容及行业意义，为食品微生物检测领域的科研人员、实验室管理人员及标准化工作者提供系统的参考依据。2标准修订背景与需求分析2.1原标准实施中的技术缺口ISO21872-1:2017《食物链微生物学——弧菌的水平测定方法——第1部分：潜在的肠致病性副溶血性弧菌、霍乱弧菌和创伤弧菌的检测》于2017年正式发布，为全球食品链中弧菌检测提供了统一的水平方法框架。该标准涵盖了样品制备、增菌培养、分离鉴定以及生化确认等一系列操作流程，适用于鱼类、贝类及其他水产品中三类目标弧菌的检测。然而，随着标准在全球范围内的推广应用，实施过程中暴露出若干技术空白。其中最为突出的是：原标准虽然对培养基的配方和培养条件作出了规定，但缺乏对培养基和关键试剂性能的系统性验证要求和验收标准。这意味着各实验室在采购不同批次、不同品牌的培养基时，无法以统一的标准评价其适用性。实际工作中，部分培养基可能因选择性不足导致假阳性率偏高，或因促生长能力欠佳导致目标菌回收率低下，这些差异并不容易被常规的质量控制程序察觉。2.2培养基质量差异的现实挑战培养基是微生物检测中最基础也最关键的要素之一。对于弧菌这类对环境条件敏感的菌种，培养基的质量波动对检测结果的影响尤为显著。同一种配方，不同生产厂家的产品在pH值、渗透压、营养配比及抑制剂浓度等方面可能存在的细微差异，均可能改变目标菌的生长表现。国际食品微生物标准化咨询组织曾在多项技术报告中指出，培养基的性能差异是造成不同实验室间检测结果偏差的重要系统性因素。部分实验室使用自配培养基时，由于原料来源不同或配制工艺控制不严，也可能引入不可控变量。此外，选择性添加剂的活性和稳定性在不同批次之间存在天然波动，这也是培养基质量面临的重要挑战之一。2.3国际标准化趋势的推动近年来，国际食品微生物检测标准的修订呈现出从“规定配方”向“规定性能”转变的显著趋势。ISO16140系列标准（微生物方法验证）和ISO11133标准（培养基的制备、生产、性能和质量管理办法）的相继更新，为这一转变提供了方法学支撑。ISO11133:2014及其后续修订版明确提出了培养基性能测试的分类方法和验收标准，要求对培养基的选择性、产率（促生长能力）和特异性等指标进行系统评价。在此背景下，ISO/TC34/SC9决定将培养基性能测试的要求纳入ISO21872-1:2017，以保持标准体系的内在一致性和协调性。这一修改不仅符合国际食品微生物检测标准的发展方向，也与世界卫生组织（WHO）和联合国粮农组织（FAO）对食源性致病菌检测质量保证的要求相呼应。3修改件的主要内容与技术要点3.1修订范围与总体框架ISO21872-1:2017/Amd1:2023修改件对原标准的内容进行了补充和调整，其核心目标是引入培养基和试剂性能测试的系统性要求，以确保检测方法在不同实验室间的可重复性和结果可比性。修改件延续了原标准“水平方法”的技术定位，不改变原有检测流程的基本框架，而是以附加条款的形式补充了质量控制的维度。3.2培养基性能测试的引入修改件明确要求实验室在以下情形下对培养基进行性能测试：①启用新的培养基品牌或新批次的培养基；②更改培养基的配制工艺或灭菌条件；③按照ISO11133规定的周期进行常规性能监控。性能测试涵盖两个基本维度——目标菌生长情况（产率）和非目标菌抑制情况（选择性），通过半定量或定量的方法进行评价。对于增菌培养基，修改件要求使用目标菌株进行生长促进试验，确认接种后目标菌能够正常增殖至预期浓度；对于选择性分离培养基，则需使用目标菌株和非目标菌株分别进行产率系数和抑制系数的测定。性能测试所用的参考菌株包括标准菌株（如ATCC、CIP等保藏编号明确的菌株）以及经过验证的实验室内部对照菌株。3.3试剂质量要求的补充除培养基外，修改件还对检测过程中使用的关键试剂——尤其是生化鉴定试剂盒、特异性抗血清和PCR反应体系中的引物与探针等——提出了性能验证建议。该部分内容要求实验室建立试剂批次接收检验制度，记录每批试剂的关键性能参数（如灵敏度、特异性等），并建立可追溯的档案系统。这一补充条款的意义在于：分子生物学检测手段已在弧菌鉴定中得到广泛应用，试剂的质量直接关系到鉴定结果的准确性。通过纳入试剂性能测试要求，修改件将质量控制从“培养基环节”延伸至“全检测流程”，形成更加完整的质量保障链条。3.4质量控制的附加要求修改件进一步明确了实验室内部质量控制的具体操作规范，包括：每批样品检测时设置阳性对照和阴性对照；定期参加能力验证计划（如FAPAS、CNAS组织的能力验证项目）；对检测人员进行弧菌检测技能的定期考核与培训等。这些新增条款将ISO21872-1:2017的质量控制要求提升到了与ISO17025《检测和校准实验室能力的通用要求》更为匹配的水平。4标准修订的意义与行业影响4.1提升检测结果的可靠性与可比性修改件的直接贡献在于系统性地提升了弧菌检测结果的可靠性。通过对培养基和试剂提出明确的性能测试要求，实验室可以更加客观地评估所用耗材的适用性，及时发现潜在的质量问题，从而降低因培养基质量波动导致的假阴性或假阳性风险。与此同时，统一的性能测试要求也增强了不同实验室间检测结果的可比性，为国际食品贸易中的检测结果互认提供了更加坚实的基础。4.2推动实验室质量管理的规范化升级从实验室管理的角度来看，修改件要求实验室建立更加完善的培养基和试剂质量监控体系，这对实验室的质量管理工作提出了更高要求。实验室需要建立培养基性能测试的标准操作程序（SOP），配备相应的标准菌株和检测记录系统，并对相关人员进行针对性培训。这些要求与ISO17025实验室认可体系注重“全流程质量控制”的理念高度协同，促使实验室在标准化管理的轨道上持续提升。4.3对食品贸易和公共卫生监管的技术支撑在全球海产品贸易量持续增长的背景下，弧菌检测标准的完善对国际食品贸易具有重要的技术支撑作用。统一的检测标准和质量控制要求能够有效减少因检测方法差异引发的贸易争端，为进出口食品的检验检疫提供更加可靠的技术依据。在公共卫生层面，更精准的弧菌检测能力有助于及早发现受污染的海产品，预防弧菌引起的食源性疾病暴发，保护消费者健康。5主要参与单位介绍5.1ISO/TC34/SC9食品微生物学分技术委员会ISO21872-1:2017/Amd1:2023由国际标准化组织ISO/TC34/SC9（食品微生物学分技术委员会）归口管理，其秘书处由法国标准化协会（AFNOR）承担。该分技术委员会汇集了来自全球30余个参与成员国和20余个观察成员国的微生物学专家、食品科学家和标准化工作者，其工作范围涵盖食品链中微生物检测方法、微生物风险分析和微生物生态学等相关国际标准的制修订，在食品微生物检测领域具有极高的技术权威性和广泛的国际影响力。5.2标准起草工作组在标准修订过程中，ISO/TC34/SC9下属的WG2工作组（食品中致病菌检测方法工作组）承担了主要的技术起草工作。该工作组的召集人由荷兰国家公共卫生与环境研究所的资深专家担任，成员包括来自各国标准化机构、政府实验室、学术机构及行业协会的代表。工作组先后召开了多次线下和线上技术会议，就培养基性能测试的分类方式、参考菌株的选择、验收标准的设定等技术细节进行了深入讨论，并通过多轮草案投票最终完成了修改件的制定。5.3中国参与情况中国作为ISO/TC34/SC9的积极成员，在该标准的修订过程中发挥了重要作用。中国检验检疫科学研究院和中国海关科学技术研究中心等单位派出专家参与了修改件草案的技术讨论，结合国内弧菌检测实践的丰富经验，提出了多项建设性意见。中国专家特别关注了培养基性能测试方法在不同实验室条件下的适用性和可操作性，建议在测试流程中兼顾方法灵活性和结果可比性的平衡，相关建议在标准的最终文本中得到了一定程度的体现。6结论与展望ISO21872-1:2017/Amd1:2023修改件的发布，标志着国际食品链弧菌检测标准化工作进入了一个新的发展阶段。通过引入培养基和试剂性能测试的系统性要求，该修改件有效弥补了原标准在质量控制维度上的不足，使ISO21872-1在方法学的完整性和科学严谨性方面得到了显著提升，与国际食品微生物检测标准体系的发展趋势保持了高度一致。展望未来，弧菌检测标准化工作仍面临诸多值得深入探索的方向。首先，随着分子生物学技术的快速发展，以实时荧光定量PCR、等温扩增（LAMP）以及宏基因组测序为代表的新一代检测技术正逐步从研究走向应用，如何将这些新技术与传统的培养检测方法有机融合，在保持水平方法通用性的同时兼顾技术创新，将是标准修订面临的持续性挑战。其次，快速检测方法与传统培养方法的等效性验证需要更加完善的评价体系，修改件中建立的培养基和试剂性能测试框架可以为这一工作提供方法参考。第三，随着人工智能和大数据技术的兴起，实验室质量控制有望实现数字化和智能化转型，未来标准中或有纳入自动化数据记录和智能预警系统的可能。在全球食品安全治理日益强调科学性和协同性的时代背景下，ISO21872-1:2017/Amd1:2023的发布不仅为弧菌检测提供了更加可靠的技术规范，也为其他食源性致病菌检测标准的修订提供了可资借鉴的范式。我国应积极参与后续标准修订工作，在国际标准制定中贡献更多中国智慧和实践经验，同时加快国内相关标准的对标和转化工作，推动我国食品微生物检测整体水平迈上新台阶。参考文献[1]ISO21872-1:2017Microbiologyofthefoodchain—HorizontalmethodforthedeterminationofVibriospp.—Part1:DetectionofpotentiallyenteropathogenicVibrioparahaemolyticus,VibriocholeraeandVibriovulnificus.Geneva:InternationalOrganizationforStandardization,2017.[2]ISO21872-1:2017/Amd1:2023Microbiologyofthefoodchain—HorizontalmethodforthedeterminationofVibriospp.—Part1:DetectionofpotentiallyenteropathogenicVibrioparahaemolyticus,VibriocholeraeandVibriovulnificus—Amendment1:Inclusionofperformancetestingofculturemediaandreagents.Geneva:InternationalOrganizationforStandardization,2023.[3]ISO11133:2014Microbiologyoffood,animalfeedandwater—Preparation,production,storageandperformancetestingofculturemedia.Geneva:InternationalOrganizationforStandardization,2014.[4]ISO17025:2017Generalrequirementsforthecompetenceoftestingandcalibrationlaboratories.Geneva:InternationalOrganizationforStandardization,2017.[5]ISO16140-2:2016Microbiologyofthefoodchain—Meth