抗凝血酶活性检测标准化中国专家共识总结2026

抗凝血酶活性检测标准化中国专家共识总结2026抗凝血酶（AT）又称AT-Ⅲ，是血浆中最重要的生理性抗凝蛋白，可抑制活化的凝血因子Ⅱ（FⅡa）及其他多种活化的凝血因子，在体内抗凝系统中发挥重要作用（占70%～80%）[1]。血浆AT活性的参考区间为80～120IU/dL（即80%～120%），个体内生理波动范围相对有限。AT活性检测可应用于多种临床场景，如获得性或遗传性AT缺乏症的诊断、血栓栓塞高风险人群的筛查[2]、靶向AT治疗的疗效监测及肝素类药物的治疗监测等。近年来，随着对AT研究的不断深入以及相关药物的出现，AT活性检测（尤其是低值水平检测，即≤40%）在不同检测系统间差异显著、准确性不足及实验室间可比性较差[3]等问题日益凸显，导致遗传性AT缺乏症漏诊、药物干扰误判及剂量管理不当等风险增加。目前，国内外尚无AT活性检测标准化的相关共识或指南。鉴于此，中华医学会检验医学分会临床血液体液学组联合中国血友病协作组、上海市医学会检验医学专科分会临床检验学组以及中国医药卫生文化协会实验诊断与社会化服务分会，共同组织国内血栓与止血领域的检验专家及临床专家，制定了《抗凝血酶活性检测标准化中国专家共识（2026版）》[已在国际实践指南注册与透明化平台注册，注册号为PREPARE-2025CN1517，以下简称“共识”]，旨在指导和规范AT活性检测技术体系，提高实验室检测质量，并为建立个体化治疗新标准奠定基础。1、共识制订的方法和过程1.1共识的提出AT活性检测虽已在国内广泛开展，但在检测流程、质量控制及适宜性评价等方面缺乏统一的行业标准。专家组（由全国21位检验专家和19位临床专家组成）经充分讨论后，决定启动AT活性检测标准化中国专家共识的制订工作，并在9家医疗机构开展前期基线调查。评估结果[4]显示，各机构的AT活性检测的精密度和正确度方面存在较大的实验室间变异（在低值水平样品的检测中尤为明显），且检测流程、质量控制及评价体系亦不完善。因此，亟需制定涵盖AT活性检测全过程的技术规范与质控措施，形成专家共识。1.2共识的形成本共识由专家组依据Delphi法共同讨论制订。专家组在梳理关键问题的基础上，通过PubMed、中国期刊全文数据库、中文科技期刊数据库和中国学术期刊数据库中检索相关文献，建立共识文献库。随后结合前期基线调查结果、国内外血栓与止血领域相关行业标准及工作经验，在共识启动会上确定了共识的总体框架和核心信息。专家分组为共识各部分查证相关文献，形成初稿，并通过两轮专家函询（同意率≥75%表示获得一致意见，未获得一致意见的问题进入第二轮函询）及定稿会多轮讨论修订，最终在全体专家成员一致同意下，形成本共识。2、AT活性检测的临床用途临床上，获得性AT活性降低较遗传性AT活性降低更常见。AT活性检测不仅是遗传性或获得性AT缺乏症诊断的标准之一，也是评估血栓形成、肝功能障碍、肾病综合征、孕期并发症及脓毒症等病理状态的重要指标。随着精准医学的发展，AT活性检测标准化在遗传性AT缺乏症的精准识别、获得性AT缺乏症的动态管理、抗凝治疗干扰因素鉴别以及创新药物疗效监测和剂量优化等方面的临床意义日益凸显。在血友病治疗领域，降低AT可提高患者的凝血酶生成水平，改善出血表型[13-17]。一类血友病非因子治疗药物通过靶向降低AT来增强凝血功能，重建止血平衡[18]，已展现出显著的临床优势[9,11-12]。然而，该治疗需将AT活性精准控制在15%～35%范围内，对检测技术提出了更高要求。AT活性检测（尤其是低值水平检测）标准化不仅有助于优化药物疗效，还可通过动态监测控制血栓风险，实现最佳获益-风险平衡[9-10]，为血友病个体化治疗提供关键依据。3、AT活性检测的现状及挑战目前，临床上主要采用发色底物法检测AT活性[2]，但其检测性能受检测系统（包括试剂、仪器和体系等）影响，且检测结果的离散程度在低值水平样品中尤为显著[2,19]。研究显示，不同试剂间正常水平的AT活性检测结果可比性良好；但随着样品中AT活性的降低，试剂间变异明显增大[20]。荟萃分析表明，在Ⅱ型AT缺乏症（活性水平多为40%～60%）诊断中，不同试剂的灵敏度存在差异。与基于人源活化的凝血因子Ⅹ（FⅩa）的发色底物法相比，基于牛源FⅩa或FⅡa检测的AT活性显著更高[21]。国际多中心研究亦发现，当AT活性≤36%时，相同试剂的室间差异明显[变异系数（CV）＞20%]，多数检测方法难以准确检测，且并不适用于低值水平检测[20,22]。此外，对国内194家实验室开展的全国性调查显示，在抗凝蛋白活性检测的性能验证、定标、室内质控和参考区间设置等方面缺乏统一规范，实验室间结果可比性较差[3]。国内9家医疗机构开展的AT活性检测现状前期基线调查[4]结果进一步证实，尽管多数试剂检测结果重复性较好，但不同检测系统间低值水平（≤40%）检测结果差异大，存在严重低估、高估或无法检出的情况；而在采用低值定标曲线后，低值水平样品检测能力显著提升，表明亟需建立规范的AT活性检测，尤其是低值水平检测的技术体系。共识建议1：实验室应建立并持续完善质量管理体系，以确保AT活性检测结果的准确性和可比性。共识建议2：实验室应重点关注AT活性低值水平（≤40%）区间。参加覆盖低值水平的室间质量评价（EQA）有助于评估实验室间的检测一致性，并为减少结果差异、提高准确性提供依据，进而保障临床决策的科学性。4检测方法4.1检测原理发色底物法检测AT活性的原理是在待测血浆中加入FⅡa或FⅩa，在肝素的作用下，AT与其形成稳定复合物（1∶1结合）并发挥抑制作用，而剩余的FⅡa/FⅩa作用于显色底物，裂解出显色基团。反应体系的显色强度与剩余的FⅡa/FⅩa的活性呈正相关，与血浆中AT活性呈负相关，通常在405nm波长下进行动力学监测。该方法在特定检测区间内灵敏度高、准确性好、检测时间短，适用于多种自动化分析仪器，已在临床中广泛应用。4.2定标4.2.1正常值定标曲线按照全自动凝血分析仪生产厂商预先设定的定标血浆的稀释比例，并使用配套定标血浆制作定标曲线。在试剂批号更换、仪器设备调整等情况下，应重新建立定标曲线。4.2.2低值定标曲线针对低值水平样品（AT活性≤40%）宜建立低值定标曲线。建议设置不少于5个定标点（可根据检测系统是否包含零点进行设置），且各定标点均在低值水平区间内，以覆盖目标区间，并保证良好线性。预稀释比例可根据实际情况进行调整。其他要求参照正常值定标曲线的制备方法执行。4.3复溶试剂的复溶方法（如需）、储存条件和有效期应遵循厂家提供的说明书。4.4检测实验室应使用全自动凝血分析仪与配套试剂（包括检测试剂和定标血浆等）来检测AT活性。检测时按照厂家提供的说明书执行。应对异常结果的反应曲线进行审核，以排除检测过程中的各种干扰，确保检测结果的可靠性。共识建议3：实验室应优先采用全自动凝血分析仪及配套的发色底物法试剂进行AT活性检测，以确保检测性能。共识建议4：在低值水平相关的临床应用中，应选用经低值水平性能验证的检测系统，以规范诊疗和确保患者用药安全。共识建议5：实验室在AT活性检测中应建立覆盖常规活性水平区间的正常值定标曲线，以确保检测结果的准确性和可比性。共识建议6：实验室宜在正常值定标曲线基础上，增加低值定标曲线，用以检测预期可能处于低值水平（AT活性≤40%）的样品，以降低检测误差。共识建议7：实验室可结合自身情况，通过优化检测条件（如调整预稀释比例）提升检测性能。但须注意，任何对配套检测系统默认参数的修改，均需在投入临床使用前完成严格的性能确认，以确保检测结果的准确性和可比性。5标本处理与分析影响因素AT活性检测受众多因素影响，遇到可疑或与患者临床表现不相符的结果时，应综合考虑检验前、中、后的潜在影响因素。5.1标本采集依照WS/T359-2024[23]的要求采集标本。推荐使用含109mmol/L（3.2%）的枸橼酸钠抗凝剂的采血管采集全血标本，血液与抗凝剂的体积比为9∶1[24-25]。5.2标本运送和处理标本采集后应确认无血凝块存在，依照WS/T359-2024的要求，在常温（18～24℃）下进行标本运送。对于新鲜标本，推荐在常温下2000×g离心不少于10min，以得到乏血小板血浆（血小板计数＜10×109/L）[23-24,26]。由于不同研究所使用的检测方法可能存在差异，将单一研究的结果推广至其他实验室可能并不完全适用。故本共识根据既往AT活性的稳定性报道[24,27-32]，结合临床诊疗需求，建议尽快完成检测（如4h以内），以减少样品稳定性对结果的影响；或在分离血浆后转移至洁净干燥的低接触激活材料的试管中，加可螺旋封口的盖子[26]，将其冷冻保存，冰冻血浆样品在-20℃及以下条件下至少可稳定保存24个月[24]；或遵循厂家提供的说明书进行操作。对于冰冻血浆样品，检测前需置于37℃水浴中复融4～5min或直至完全解冻，缓慢充分混匀后立即检测[24,33-34]。融化后的样品如不能及时检测，推荐置于4℃条件下暂存，并于2h内完成检测[34]。尽管美国临床和实验室标准协会报道，血浆样品经7次冻融循环后，其AT活性检测结果与基线相比，差异无统计学意义[24]，但临床检测中仍不建议反复冻融。5.3分析干扰物质需要注意的是，标本采集前患者的病理生理状态（如妊娠）、用药史（如应用抗凝药物）和其他影响因素（如溶血、脂血和黄疸，年龄，采血时间）等情况均可能影响AT活性检测的结果。因此，应记录患者近期用药史与临床背景，临床医生应谨慎解读报告结果，必要时与检测人员共同分析[1-2]。此外，不同试剂对药物产生的干扰方向和程度不同，需按所在实验室使用的试剂进行具体判定与记录。6、质量要求与性能评价不同实验室间的低值水平检测结果缺乏可比性，即便基于相同检测原理的不同试剂间也存在差异。因此，试剂应明确反应物来源（种属、FⅡa或FⅩa），无论液体或冻干形式，均需通过性能评价。系统间差异主要来自反应物类型（FⅡa法灵敏度高，但易受肝素辅助因子Ⅱ干扰；FⅩa法抗干扰性强，但对部分Ⅱ型遗传性AT缺乏症检测敏感性可能不足[2]）及校准策略[36]，实验室应依据方法学特点优化质控方案，确保结果可比性。6.1性能验证与确认仪器与试剂配套的新检测系统在用于临床检测前，应依据厂家提供的说明书要求进行校准和性能验证。若厂家提供的说明书未明确相关要求，可参照本共识及国际血液学标准化委员会指南[25,37-38]开展性能评价。对于非配套系统，实验室应在投入临床使用前完成充分的性能确认，以确保检测结果满足临床应用要求。6.1.1批内精密度批内精密度又称重复性，以连续检测结果的CV为评价指标。AT活性检测的批内精密度要求：正常水平样品的CV应≤10%[39]，低值水平样品的CV应≤15%[20]。验证时，对于正常水平，取至少2个不同活性水平的样品或质控血浆（可使用配套商业质控血浆），分别按常规方法至少重复检测10次，记录检测结果并计算CV[20,40-42]；对于低值水平，应检测至少2个不同活性水平的样品或质控血浆，且水平间需有一定间隔（如30%~40%水平和15%~25%水平），具体验证方法同正常水平，记录检测结果并计算CV。6.1.2批间精密度批间精密度以室内质控检测结果的CV为评价指标。AT活性检测的批间精密度要求为：正常和低值水平样品的CV均应≤15%[4,41-42]。验证时，至少使用2个浓度水平（包含正常和低值水平）的样品或质控血浆，在检测当天至少进行一次室内质控。连续检测至少20d，剔除失控数据后（失控结果已得到纠正）计算CV[40-42]。此外，国内外亦有采用4个不同活性水平的样品（覆盖AT正常和低值水平）进行验证的报道，其方法为，在3d内独立检测样品，每天检测3次，记录检测结果并计算CV[4,20]，若CV≤20%则判定合格。鉴于目前缺乏低值水平相关数据，该验证方法及判定标准亦可作为可接受的参考方案。6.1.3正确度正确度以国际标准物质或商业标准物质实际检测结果与理论值的偏倚为评价指标。AT活性检测的正确度要求为：正常水平标准物质的允许百分偏倚应≤15%，低值水平标准物质的允许百分偏倚应≤20%。该标准为阶段性建议，未来将持续收集多中心数据并结合EQA结果，进一步优化分段标准。验证时，对于正常水平，应检测至少2个不同活性水平的标准物质，对每种标准物质进行至少10次重复检测，检测可在一批或多批实验中完成[43]，计算检测结果的均值与理论值的百分偏倚；对于低值水平，应检测至少2个不同活性水平的标准物质，且水平间需有一定间隔（如30%~40%水平和15%~25%水平），具体验证方法同正常水平，并计算检测结果的均值与理论值的百分偏倚。此外，国内外亦有采用4个不同活性水平的样品（覆盖AT正常和低值水平）进行验证的报道，其方法为：在3d内独立检测样品，每天检测3次，计算均值并与理论值比较，若百分偏倚≤20%则判定合格[4]。鉴于目前缺乏低值水平相关数据，该验证方法及判定标准亦可作为可接受的参考方案。对于开展靶向AT的血友病非因子药物治疗监测的实验室，建议应至少检测医学决定水平（如15%和35%）的标准物质，并以百分偏倚≤20%为判定标准。6.2室内质量控制6.2.1质控血浆的选择实验室应开展覆盖低值水平（AT活性≤40%）区间的室内质量控制。推荐使用配套商业质控血浆，且至少使用2个水平（正常水平和低值水平）的质控血浆[26]。对于已提供低值水平商业质控血浆的检测系统，可按厂家提供的说明书直接用于室内质控。若系统仅提供中高水平区间的质控血浆，实验室可在完成性能评价的前提下，通过适当稀释获得低值水平质控血浆，用于低值水平区间的质控；稀释后质控水平宜覆盖临床关注的AT低值区间。采用此方法的实验室，应对质控血浆进行性能评估并记录，建立相应操作规程。6.2.2质控频率实验室应根据检测样品量或检测批次确定频率，保证每天或每次开机检测样品前至少进行1次室内质控。此外，更换试剂批号、定标曲线或仪器有任何波动等情况时，应及时进行质控检测。6.2.3质控均值和允许范围的确定每个批号质控血浆在使用前，应由实验室通过检测确定均值和允许范围，制造商规定的“标准值”和“允许范围”仅作为参考[36]。质控均值和标准差的具体确定方法和要求参考WS/T641-2018[44]。建议采用Westgard多规则，至少包括13S和22S规则，其余可根据实验室实际情况酌情选用。6.2.4质控检测结果和质控数据管理应记录结果并统计均值与标准差，绘制质控图。若发现结果失控应按步骤分析查找原因（检查试剂、质控血浆及仪器等），待各因素排查后再进行质控血浆的检测，确认在控后方可进行待测样品的检测。同时，应记录失控原因分析及相应纠正措施。实验室应定期（每月）统计室内质控结果。6.3室间质量评价开展AT活性检测的EQA对于评价和提高实验室间检测结果的可比性具有十分重要的作用。实验室每年应至少参加2次省级及以上临床检验中心组织的EQA活动，以保证采用相同或相近检测系统的实验室之间的结果可比性。对于开展靶向AT的血友病非因子药物治疗监测的实验室，建议应参加包含预期值≤35％的能力验证物品的EQA活动，以确保满足临床应用中对低值水平检测能力的要求。6.4检验结果的可比性若同一实验室内使用2台及以上仪器检测AT活性，每6个月应进行至少1个轮次的结果比对，每轮次使用至少20份临床样品（所选样品的活性水平应符合表4的要求）[40]。比对可分次进行，按照常规操作流程进行检测。符合要求的样品比例应≥90%，且不符合要求的样品不可在同一水平区间内。实验室应对发现的问题或不足采取措施，并保存实施措施的记录。共识建议8：对于AT活性检测的批内精密度，正常水平样品CV应≤10%，低值水平样品CV应≤15%；对于批间精密度，正常与低值水平样品CV均应≤15%；对于正确度，正常水平标准物质的百分偏倚应≤15%，低值水平标准物质的百分偏倚应≤20%。共识建议9：实验室应开展覆盖低值水平（AT活性≤40%）区间的室内质量控制，推荐使用商业质控血浆，且至少使用2个水平（正常水平和低值水平）的质控血浆；保证每天或每次开机检测样品前至少进行1次室内质控。共识建议10：实验室每年应至少参加2次省级及以上临床检验中心组织的EQA活动；对于开展靶向AT的血友病非因子药物治疗监测的实验室，建议应参加包含预期值≤35％的能力验证物品的EQA活动，以确保满足临床应用中对低值水平检测能力的要求。7结果报告的要求7.1报告方式AT活性检测结果通常以百分比（%）形式报告。实验室应保持同一实验室报告格式的一致性，确保检测结果的可比性，便于临床开展随访工作。当更换试剂或仪器后，应评估检测结果可比性及参考区间的适用性；如发生变化，应提前与临床科室沟通，必要时在报告中加以说明。7.2参考