CN119487029A N6-腺苷-甲基转移酶protac及其使用方法 （苏黎世大学）

PCT/EP2022/0633502022.052024.12.30PCT/EP2023/0632542023.05.17WO2023/222762EN2023.11.23N6-腺苷-甲基转移酶PROTAC及其2别地5至20个原子质量≥12的原子或基本上由3至50个原子质量≥12的原子，特别地4至302.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述E3连接酶结合剂具34.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可47.根据权利要求1_4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述柄为式9.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或10.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述接头511.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述接头6715.根据前述权利要求1至6中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述所述接头具有权利要求11或12所述的定义。所述接头具有权利要求13或14所述的定19.根据前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合8920.根据前述权利要求1至19中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中21.根据前述权利要求1至19中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中22.根据前述权利要求1至19中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中25.根据前述权利要求1至23中任一项所述的化合物或26.根据权利要求25所述的用于使用的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述癌症[0002]本申请要求2022年11月16日提交的欧洲专利申请号22207794.3和2022年5月17日[0004]基因的表达通过动态水平的mRNA修饰而在转录组(通过基因组的转录所获得的信6A水平可能在不同的组织、发育状态中或应答于细胞应6A参与控制胚胎发育过程[0005]m6A的动态水平通过擦除分子(erasers)和写入蛋白(writerproteins)的相互作6A写入分子已为人知二十年，但m6A特异性擦除蛋白FTO(ALKBH9)和ALKBH5和RBM15。METTL3一METTL14复合物将甲基从S一腺苷甲硫氨酸(SAM)转移至共有序列5'一[0006]基于上文提及的现有技术，本发明的目的是提供使用PROTAC治疗药征来调节m6A双官能化合物与METTL14结合。在一些实施方案中，双功能化合物调节、抑制和/或降解基于时间分辨福斯特(Firster)共振能量转移(TR_FRET)的生物化学测定。B)化合物1(灰具有相关残基(灰色的碳原子)的抑制剂5(青色)。展示了主要的分子间相互作用(黄色虚互作用。B)抑制剂21的氟原子与Ser511和Tyr406(PDB代码：7O2E)侧链之间的范德华(Van[0018]图6显示热位移测定结果。显示抑制剂22或SAH的METTL1的熔解曲线的一阶导[0021]图9显示用2μM浓度的各种PROTAC分子处理24h后，用蛋白质印迹测量的METTL3蛋[0022]图10显示用2μM浓度的各种PROTAC分子处理24h后，用蛋白质印迹测量的METTL14[0023]图11显示通过蛋白质印迹测量的各种PROTAC分子的METTL3和METTL14降解之间的事项不意味这样一个或多个事项的详尽列举，也不意味着仅限于所列的一个或多个事项。义。将标准技术用于分子、遗传和生物化学方法(大体上参见Sambrook等人,MolecularCloning:ALaboratoryManual,第2版.(1989)ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.和Ausubel等人,ShortProtocolsinMolecularBiology[0030]本说明书上下文中的术语METTL14涉及N6一腺苷一甲基转移酶非催化性亚基或6个碳原子的饱和直链或支3C7环烷基部分的非限制性实例包环丁基(C4H7[0037]术语未取代的Cn烷基和取代的Cn烷基包括包含环状结构或连接至CH2CH32)3CH3[0039]术语取代的烷基在其最广泛的意义上是指如上文在最广泛的意义上所定义的烷3H23R23H2和OPO3R222团是指被一个或若干个氨基NH2修饰的基团。术语羧基取代的基团是指被一个或若干个羧)3NH2)32CH(NH2)(CH2NHMe)2和_CH2CH(CH2NHEt)2，其用于末端部分；以及_CH2CHNH2_、_CH2CHNHMe_、_2)4)2[0042]卤代烷基是指被一个或多个卤代基团取代的如上文所定义的烷基，例如三氟甲[0043]术语磺酰基取代的基团是指被一个或若干个磺酰基_SO2R或其衍生物修饰的基[0044]术语磺酰胺取代的基团是指被一个或若干个磺酰胺基团_SO2NHR或_[0053]术语氟取代的烷基是指被一个或若干个氟基团F修饰的根据上文所定义的烷基。2)3333F72)444F和_C4F9。)32OH)CHFCH3和_CF(CH2OH)CHFCF3。[0055]本说明书上下文中的术语芳基表示环状芳族C5_C10烃。芳基的实例包括但不[0056]本说明书上下文中的烷基芳基涉及被芳基部分取代的烷基。具体实例是乙基苯(如果化学上可行的话)或在芳基部分上被基还涵盖双环杂芳基。本说明书上下文中的芳基或杂芳基还可以被一个或多个烷基取代。个实施方案中是指改善疾病或病症(例如，减[0060]在一个方面，本文公开了抑制和/或降解异二聚体复合物METTL3_METTL14的上由3至50个原子质量≥12的原子组成；[0078]_接头为包含3至50个原子质量≥12的原子或基本上由3至50个原子质量≥12的原2322F；[0090]_U和V独立地选自_CH2_和–(CH2)2_，或者U和V中的一个为_CH2_并且另一个为–[0092]_接头为包含3至50个原子质量≥12的原子或基本上由3至50个原子质量≥12的原者R31和R32独立地选自氢和未取代的或羟基和/或卤素取代的烷每个R2为质量≥12的原子或基本上由5至20个原子质量≥12的原子组成的接48个原子质量≥12的原子或基本上由4至8个原子质量≥12的原子组成的连接部分。在某些含4至30个原子质量≥12的原子或基本上由4至30个原子质量≥12的原子组成的接头部分。或基本上由10至15个原子质量≥12的原子组成的[0142]在某些实施方案中，如组合的接头和柄为包含5至25个原子质量≥12的原子或基柄为包含4至35个原子质量≥12的原子或基本上由4至35个原子质量≥12的原子组成的接为包含15至25个原子质量≥12的原子或基本上由15至25个原子质量≥12的原子组成的接和柄为包含16至22个原子质量≥12的原子或基本上由16至22个原子质量≥12的原子组成磺酰胺的化学部分组成，其中化学部分各自独立2322F；[0310]_U和V独立地选自_CH2_和_(CH2)2_，或者U和V中的一个为_CH2_并且另一个为_)2_。F；和n具有与上文所定义相同的定义；和n具有与上文所定义相同的定义；和n具有与上文所定义相同的定义；[0377]化合物的用途本公开的第三方面涉及根据第一或第二方面的化合物，其用作药[0381]技术人员知道任何明确提及的药物都可以呈所述药物的药学上可接受的盐而存施方案中，本文所述的化合物可以被人工富集一种或多种不主要在自然界中发现的同位35或相互转化产生的对映异构体和/或非对映异构体的混合物可用于本文所述的应用。在一的外消旋混合物与光学活性拆分剂反应以形成一对非对映异构化合物，分离非对映异构化的任何实用手段回收光学纯对映异构体以及拆提供易于控制的药物剂量并且给予患者精致且易于操作的产品的药组合物的许多此类程序和方法是本领域已知的，参见例如L.Lachman等人TheTheorya上可接受的盐在制造用于治疗或预防癌症的药物述方法需要向患者施用有效量的如本文详细指定的本文所鉴定的化合物或其药学上可接[0396]无论什么情况下单个可分开的特征(例如配体类型或医学适应症)的替代方案在C＝O；2322F；[0408]_U和V独立地选自_CH2_和_(CH2)2_，或者U和V中的一个为_CH2_并且另一个为_宽信号(bs)。通过液相色谱法_高分辨率电喷雾电离质谱法(LC_HR_ESI_MS)得到纯度：AcquityUPLC(Waters，Milford，USA)连接到Acquityeλ二极管阵列检测器和SynaptG2℃；分辨率模式下的质量分析器：质量范围100_2000m/z，扫描速率为1Hz；将质量用5mM[0456]在氮气气氛下，向搅拌的对应卤化物(1当量)[0460]向搅拌的对应的胺(1当量)或胺的盐酸盐(1当量)在iPrOH(0.3M)中的溶液中添加将反应混合物于微波中在130℃下搅拌3h(MeNH2)或在140℃下搅拌8h(BnNH2)。将粗残余物[0465]此抑制剂系列的一个显著特征是其线性形状与sp3无环原子接头的偶联使其具有明人设法浸泡METTL3与5和7，并且X射线分析显示很强的结构重叠。嘧啶部分与Asn549和解度和代谢稳定性是显著改善的(分别为108μM和107min)，并且LE和LLE值是显著改善的较低的渗透性和较大的外排比(表6)。N3嘧啶原子与Asn549氮主链之间的相互作用几何结[0468]因为螺支架和嘧啶部分已经被优化，所以发明人考虑将苯环作为下一个目标区6cm_1)以及有利的LE和LLE值(分别为0.3和5.3)，以及可接受的代谢稳定性(t1/2=鸟苷标志物的写入分子并且充当代表性的密切相关的蛋白质。发明人采用S_腺苷_L_高半定中研究其细胞靶标接合。在InCELLPulse测定中评估了22的结合，其中增强的proLabele(ePL)酶片段与截短的METTL3的N末端(残基354_580)的融合物在HEK293T细物处理16小时之后测量了两种不同的癌细胞系MOLM_13(AML)和PC_3(前列腺癌)细胞中聚腺苷酸化的RNA中的m6A/A比率。发明人发现的10_20并且在两个细胞系之间具有一定程度的选择性(对于MOLM_13和PC_3分别为EC50[0470]发明人通过蛋白质晶体学指导的药物化学成功地提高了一些列METTL3抑制剂的置使用氟原子而实现了刚性化。最有效的抑制剂(化合物22)在TR_FRET测定中显示IC50为[0474]1：时间分辨福斯特共振能量转移(TR_FRET)测定(μM)。2：g/mol。3：配体效率_132O22O42_2CO3N223N3N233DCM/H2O22O4222322CO32CO323N基)苯基)1,4,9三氮杂螺[5.5]十一合物在回流下搅拌直至完成(通过TLC监测)[0498]13CNMR(101MHz,DMSO)δ167.6,163.7,162.1,157.8,148.6,130.1,129.2,114.7,65.4,62.4,53.3,52.9,51.9,49.7,38.8,38.0,37.9,34.8,29.6,2[0505]按照一般酰胺偶联程序1，使用胺3(159mg，0.306mmol)和对应的泊马度胺羧酸[0507]13CNMR(126MHz,DMSO)δ172.8,172.1,170.1,170.1,169.0,167.3,167.1,163.3,161.7,157.4,148.2,146.4,136.3,132.1,129.7,128.6,117.5,114.3,110.7,109.3,69.7,基)1,3二氧代异吲哚啉4基)氨基)乙氧基[0510]按照一般酰胺偶联程序1，使用胺3(69mg，0.13mmol)和对应的泊马度胺羧酸[0512]13CNMR(126MHz,DMSO)δ172.8,170.1,170.1,169.0,167.3,167.1,163.3,161.7,157.4,148.1,146.4,136.3,132.1,129.7,128.7,117.5,114.3,110.7,109.3,69.8,69.7,3二氧代异吲哚啉4基)氨基)3,6,9,12四氧杂十五烷15[0516]按照一般酰胺偶联程序1，使用胺3(50mg，0.096mmol)和对应的泊马度胺羧酸[0518]13CNMR(126MHz,DMSO)δ172.8,172.1,170.1,170.1,169.0,167.3,167.1,163.3,51.4,49.2,48.6,41.7,38.3,38.0,36.3,36.2,34.3,31.0,3二氧代异吲哚啉4基)氨基)3,6,9,12,1[0522]按照一般酰胺偶联程序1，使用胺3(51mg，0.098mmol)和对应的泊马度胺羧酸[0524]13CNMR(126MHz,DMSO)δ173.3,172.6,170.6,170.5,169.4,167.8,167.6,163.7,49.7,49.1,49.0,42.2,38.8,38.4,36.8,36.7,34.8,31.5,29.5,28.7,22(2,6二氧代哌啶3基)4(丙2炔1基氨基)异吲哚啉1,3二酮下搅拌直至完成(通过TLC监测)。将反应混合物通过添加饱和的NaHCO3水溶液淬灭并萃取132.43,117.17,112.77,111.42,79.11,72.所得反应混合物在40℃下搅拌直至完成(通过TLC监测)，然后将其蒸发并将粗产物使用快TLC监测)。将反应混合物蒸发并将粗产物使用快速[0535]1HNMR(600MHz,MeOD)δ8.0[0536]13CNMR(151MHz,MeOD)δ176.55,174.75,171.72,170.93,170.55,169.20,164.62,163.44,163.31,163.08,162.85,158.30,150.59,147.53,147.48,146.62,137.15,137.00,133.96,132.70,128.76,124.10,118.38,118.20,115.82,112.52,112.43,112.28,112.05,[0542]按照一般酰胺偶联程序2，使用胺3(63mg，0.12mmol)和对应的羧酸(50mg，)。[0544]13CNMR(151MHz,MeOD)δ176.53,174.82,172.54,172.46,170.82,164.62,163.41,163.31,163.08,158.30,150.81,145.26,132.93,132.90,130.63,128.03,115.77,113.78,28.12,27.04,27.01,24.29,23.77,17.62,17.37,14[0548]按照一般酰胺偶联程序2，使用胺3(47mg，0.090mmol)和对应的来那度胺[0549]13CNMR(126MHz,DMSO)δ172.95,172.16,171.27,168.94,166.91,163.23,161.64,158.00,157.75,157.32,143.80,132.04,129.23,126.46,118.54,116.15,113.76,111.71,4基)1,4,9三氮杂螺[55]十一烷2酮(化合物2搅拌直至完全完成(通过TLC监测)。将CNMR(101MHz,[0570]随后向压力瓶中的化合物23一2(1当量)在EtOH(0.5M)中的溶液中添加胺(1.5当(SiO2；DCM/MeOH＝90:10)纯化提供280mg的所需产物(71％)。1HNMR(400MHz,DMSO)δ8.18CNMR(101MHz,DMSO)δ代1,4,9三氮杂螺[5.5]十一烷9基)嘧啶4基)氨基)甲基)苄基柱色谱法(SiO2；DCM/MeOH＝90:10)纯化提供51mg的所需产物(71％)。1HNMR(400MHz,CNMR1,4,9三氮杂螺[5.5]十一烷9基)嘧啶4基)氨基)甲基)哌啶1甲酸叔丁酯(化合物(SiO2；DCM/MeOH＝90:10)纯化提供55mg的所需产物(79％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)[[0582]随后向搅拌的对应的叔丁酯(1当量)[0583]向搅拌的对应的甲苯磺酰化的叔丁酯在DMF(05M)中的溶液中添加邻苯二甲酰亚物在真空中去除并将产物未经进一步纯化即下搅拌直至完全完成(通过TLC监测)。向所得混合物添加DCM并将形成的沉淀通过过滤去酯(1当量)和DIPEA(2当量)。将所得反应混合物在0.3mmol)制备化合物29一1。然后将挥发物在真空中去除并将粗产物使用快速柱色谱法(SiO2；EtOAc/庚烷＝从80:20至90:10)纯化提供64mg的所需产物(57％)。1HNMR(400MHz,0.25mmol)制备化合物30一1。然后将挥发物在真空中去除并将粗产物使用快速柱色谱法(SiO2；EtOAc/庚烷＝从80:20至90:10)纯化提供52mg的所需产物(39％)。1HNMR(400MHz,9,12四氧杂十五烷15酸叔丁酯(化合物0.2mmol)制备化合物31一1。然后将挥发物在真空中去除并将粗产物使用快速柱色谱法(SiO2；EtOAc/庚烷＝从80:20至90:10)纯化得到64mg的所需产物(57％)。1HNMR(400MHz,9,12,15五氧杂十八烷18酸叔丁酯(化合物0.2mmol)制备化合物32一1。然后将挥发物在真空中去除并将粗产物使用快速柱色谱法(SiO2；EtOAc/庚烷＝从80:20至90:10)纯化得到61mg的所需产物(49％)。1HNMR(400MHz,[0599]随后向搅拌的来那度胺(1当量)在NMP(0.5M)中的溶液中添加对应的叔丁酯(1当量)和DIPEA(10当量)。将所得反应混合物在110℃(油浴温度)下搅拌直至完全完成(通过9((2(2,6二氧代哌啶3基)1氧代异吲哚啉4基)氨基)壬酸叔丁[0602]按照一般程序3，使用来那度胺(267mg，1.03mmol)和对应的叔丁酯(303mg，1.03mmol)制备化合物34一1。然后将挥发物在真空中去除并将粗产物使用快速柱色谱法(SiO2；EtOAc/庚烷＝70:30)纯化提供200mg的所需产物(41％)。1HNMR(400MHz,DMSO)δ13CNMR(101MHz,CDCl3)δ173.9,172.2,170.2,166.3,147.5,131.6,129.8,125.72,116.7,[0605]按照一般程序3，使用来那度胺(245mg，0.95mmol)和对应的叔丁酯(304mg，0.95mmol)制备化合物35一1。然后将挥发物在真空中去除并将粗产物使用快速柱色谱法(SiO2；EtOAc/庚烷＝70:30)纯化提供125mg的所需产物(26％)。1HNMR(400MHz,DMSO)δ[0608]按照一般程序3，使用来那度胺(264mg，1.02mmol)和对应的叔丁酯(432mg，1.02mmol)制备化合物36一1。然后将挥发物在真空中去除并将粗产物使用快速柱色谱法(SiO2；EtOAc/庚烷＝70:30)纯化得到125mg的所需产物(22％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ得反应混合物在室温下搅拌直至完全完成(通过1HNMR监测)。然后将挥发物在真空中去[0615]按照一般程序4，使用化合物12一9(80mg，0.26mmol)和对应的叔丁酯(73mg，0.26mmol)制备化合物38一1。然后将挥发物在真空中去除并将粗产物使用快速柱色谱法(SiO2；EtOAc/庚烷＝从40:60至50:50)纯化提供85mg的所需产物(55％)。1HNMR(400MHz,CNMR(101MHz,CDCl3)δ173.2,172.5,171.0,164.9,163.4,142.7,140.8,132.5,131.6,122.7,121.8,119.8,113.4,82.3,9(4(((2(2,6二氧代哌啶3基)1,3二氧代异吲哚啉4基)氨基)[0618]按照一般程序4，使用化合物12一9(85mg，0.27mmol)和对应的叔丁酯(70mg，0.27mmol)制备化合物39一1。然后将挥发物在真空中去除并将粗产物使用快速柱色谱法(SiO2；EtOAc/庚烷＝从40:60至50:50)纯化得到73mg的所需产物(47％)。1HNMR(400MHz,酯(1当量)和DIPEA(3当量)。将所得反应混合物在130℃(油浴温度)下搅拌直至完全完成0.93mmol)制备化合物41一1。然后将挥发物在真空中去除并将粗产物使用快速柱色谱法(SiO26((2(2,6二氧代哌啶3基)1,3二氧代异吲哚啉4基)氨基)己酸1.9mmol)制备化合物42一1。然后将挥发物在真空中去除并将粗产物使用快速柱色谱法4((2(2,6二氧代哌啶3基)1,3二氧代异吲哚啉4基)氨基)丁酸0.2mmol)制备化合物43一1。然后将挥发物在真空中去除并将粗产物使用快速柱色谱法(SiO2；EtOAc/庚烷＝2:3)纯化提供80当量)和DIPEA(2当量)。将所得反应混合物在85℃(油浴温度)下搅拌直至完全完成(通过[0633]将哌嗪衍生物(1当量)添加至预先制备的iPrOH(0.5M)和Pd/C(0.5当量)的混合物中，然后添加甲酸铵(6当量)。将所得反应混合物在40℃(油浴温度)下搅拌直至完全完成0.2mmol)制备化合物45一1。然后将挥发物在真空中去除并将粗产物使用快速柱色谱法(SiO2CNMR(101MHz,49.3,40.7,40.6,40.4,35.2,31.[0640]向搅拌的对应的叔丁酯(1当量)在DCM(0.5M)中[0643]将Boc保护的胺(1当量)溶解在MeOH(0.25M)中，然后向搅拌的溶液中添加含HCl4M的二噁烷(10当量)。将所得反应混合物在室温下搅拌直至完成(通过TLC监测)并将其蒸基)2氧代1,4,9三氮杂螺[5.5]十一烷9基)嘧啶4基)氨基)甲基)哌啶1基)9氧MeOH＝从85:15至80:20)纯化提供65mg的所需产物(62％)。1HNMR(400MHz,MeOD)δ7.99(s,CNMR(101MHz,MeOD)δ173.2,117.5,115.1,58.3,53.9,53.2,52.8,52.3,50.1,49.1,45.9,45.7,41.6,40.3,37.6,36.2,一烷9基)嘧啶4基)氨基)甲基)苄基)9((2(2,6二氧代哌啶3基)1氧代异吲哚MeOH＝从90:10至80:20)纯化提供25mg的所需产物(61％)。1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.01126.5,126.0,125.5,125.5,111.7,109.8,69.8,59.8,54.7,52.8,52.6,51.5,49.0,45.8,[0654]按照一般程序9(COMU)，使用对应的胺(18.6mg，0.04mmol)和羧酸(26mg，0.04mmol)制备化合物51一1。将反应混合物在真空中浓缩并将粗产物使用快速柱色谱法(SiO2；DCM/MeOH＝从90:10至80:20)纯化提供32mg的所需产物(73％)。1HNMR(400MHz,128.5,126.6,126.1,125.9,125.8,112.4,110.4,54.4,53.0,52.2,51.9,48.6,46.1,44.6,26.8,25.6,22.9,17.3,15.9,11.8。LRMS(ESI)m/z:C58H76F2N11O5的[M+H]+计算值氧代哌啶3基)1,3二氧代异吲哚啉4基)氨基)甲基)1H1,2,3三唑1基)壬酰胺[0657]按照一般程序9(COMU)，使用对应的胺(18.2mg，0.03mmol)和羧酸(15mg，0.03mmol)制备化合物52一1。将反应混合物在真空中浓缩并将粗产物使用快速柱色谱法(SiO2；DCM/MeOH＝从90:10至80:20)纯化提供10mg的所需产物(31％)。1HNMR(500MHz,36.6,35.0,31.9,31.5,30.0,29.7,29.33,29.0,29.0,29.0,28.6,28.3,27.2,26.2,25.6,22.8,22.7,14.1。LRMS(ESI)m/z:C59H73F2N14O6的[M+H]+计算值1111.580，实测值6二氧代哌啶3基)1,3二氧代异吲哚啉4基)氨基)甲基)1H1,2,3三唑1基)十一=从90:10至80:20)纯化提供12mg的所需产物(37％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.08(bs,28.6,28.3,27.2,26.2,25.三氮杂螺[5.5]十一烷9基)嘧啶4基)氨基)丙基)15((2(2,6二氧代哌啶3基)0.224mmol)制备化合物54一1。将反应混合物在真空中浓缩并将粗产物使用快速柱色谱法(SiO2；DCM/MeOH＝从90:10至80:20)纯化提供所需产物(120mg，53％)。1HNMR(400MHz,171.0,150.2,143.8,132.3,131.6,129.2,126.6,119.0,114.3,112.4,110.4,59.6,52.6,MeOH＝从90:10至80:20)纯化提供100mg的所需产物(72％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.14代1,4,9三氮杂螺[5.5]十一烷9基)嘧啶4基MeOH＝从90:10至80:20)纯化提供37mg的所需产物(56％)。1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.00[0671]按照一般程序9(HATU)，使用对应的胺(67mg，0.13mmol)和对应的羧酸(66mg，0.13mmol)制备化合物57一1。将反应混合物在真空中浓缩并将粗产物使用快速柱色谱法(SiO2；DCM/MeOH＝从90:10至80:20)纯化提供100mg的所需产物(76％)。1HNMR(400MHz,111.1,110.6,60.0,54.4,52.9,52.5,50.5,49.9,40.2,38.2,37.5,36.5,35.7,35.5,34.1,[0674]按照一般程序9(COMU)，使用对应的胺(34.9mg，0.063mmol)和羧酸(32.0mg，0.063mmol)制备化合物58一1。将反应混合物在真空中浓缩并将粗产物使用快(SiO213CNMR(101MHz,CDCl3)δ207.1,173.8,29.5,29.3,28.8,28.4,28.4,26.2,25.6,23.0。LRMS(ESI)m/z:C54H71F2N14O6的[M+H]+计基)2,5二氟苯基)2氧代1,4,9三氮杂螺[5.5]十一烷9基)嘧啶4基)氨基)丙基)[0676]按照一般程序9(COMU)，使用对应的胺(33.08mg，0.059mmol0.059mmol)制备化合物59一1。将反应混合物在真空中浓缩并将粗产物使用快(SiO2；DCM/MeOH＝从100:10至100:20)纯化提供14mg的所需产物(21％)。1HNMR(400MHz,13CNMR(101MHz,CDCl3)δ207.1,173.9,145.1,137.8,136.3,132.5,121.7,118.8,118.6,117.3,112.4,110.9,105.9,105.6,63.9,MeOH中)中的溶液中分[0683]向搅拌的对应的胺(100mmol)在二氯甲烷(130mL)中的溶液中添加K2CO3(2当量，2逸出快速柱色谱法(DCM/MeOH/NH4OH＝100:0:0至100:3:0至100:3:1至100:5:1至100:10:1至100:15:1)纯化，以得到呈白色固体的所需产物(11.7g，历经三个步骤32％产率)。LRMS364.3[0687]向搅拌的对应的Cbz保护的胺(40mmol)在iPrOH(400mL)中的溶液中分批添加Pd/C[0688]N苄基6(4(6((4,4二甲基哌啶1基)甲基)吡啶3基)1氧杂4,9二氮[0690]按照布赫瓦尔德一哈特维希偶联的一般程序获得对应的Boc保护的胺(色谱法：[0691]向搅拌的对应的胺(1当量)在iPrOH(0.3M)中的溶液中添加29(1.5当量)和Et3N(4压浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(DCM/MeOH＝100:5至100:8至100:10至100:13至220.1[0697]按照以氯嘧啶衍生物的SNAr的一般程序获得化合物8(色谱法：DCM/MeOH＝100:5555.3554。[0701]按照以氯嘧啶衍生物的SNAr的一般程序获得化合物9(色谱法：DCM/MeOH＝100:0554.3602。[0706]4(4((4,4二甲基哌啶1基)甲基)苯基)9(7H吡咯并[2,3d]嘧啶4基)添加RuphosPdG4(5mol0.011mmol，8.9mg)、Ruphos(5mol0.011mmol，5.1mg)和506.3602。[0720]按照二甲基哌啶烷基化的一般程序获得中间体23(色谱法：EtOAc/庚烷＝0:[0723]向搅拌的(5氯吡啶2基)甲醇(2.43g，17mmol)在DCM(40mL)中的溶液中添加和DMF(1滴)。将反应混合物在25℃下搅拌2h并减压浓239.2[0727]按照布赫瓦尔德一哈特维希偶联的一般程序获得对应的Boc保护的胺(色谱法：[0728]按照以4,6二氯嘧啶的SNAr的一般程序获得中间体34(柱色谱法：DCM/MeOH=100:2至100:5至100.8至100:10至100:15至100:20)，以得到呈黄色固体的所需产物[0730]按照布赫瓦尔德一哈特维希偶联的一般程序获得中间体35(色谱法：DCM/MeOH=371.3。483.3。至100:8(在20min内)，100:8(持续5min)，100:8至100:12(在10min内)，100:12(持续5min))。黄色固体，69％产率。Mp：210一211℃；HRMS(ESI)m/z[C27H39FN7O]+的计算值：[0745]按照布赫瓦尔德一哈特维希偶联的一般程序获得对应的Boc保护的胺(色谱法：DCM/MeOH＝100:3至100:5至100:8)。不纯的所需产物未经进一步纯化即直接用于下一步[0746]按照Boc基团脱保护的一般程序获得对应的胺。不纯的所需产物未经进一步纯化[0748]按照以氯嘧啶衍生物的SNAr的一般程序获得UZH2(色谱法：DCM/MeOH＝100:0至[0754]按照布赫瓦尔德一哈特维希偶联的一般程序获得对应的Boc保护的胺(色谱法：DCM/MeOH＝100:3至100:5至100:8)。不纯的所需产物未经进一步纯化即直接用于下一步[0755]按照Boc基团脱保护的一般程序获得对应的胺。不纯的所需产物未经进一步纯化[0756]按照以4,6二氯嘧啶的SNAr的一般程序获得中间体48(柱色谱法：DCM/MeOH=100:3至100:5至100.8至100:10)，以得到呈白色固体的所需产物(历经三个步骤15％产501.3。[0759]按照二甲基哌啶烷基化的一般程序获得中间体49。无色液体，99％产率。LRMS二甲基哌啶1基)甲基)3氟苯基)2氧代1,4,9三氮杂螺[5.5[0761]按照布赫瓦尔德一哈特维希偶联的一般程序获得中间体50(色谱法：DCM/MeOH=[0764]按照Boc基团脱保护的一般程序获得对应的胺。不纯的所需产物未经进一步纯化[0768]向搅拌的对应的醇(789mg，3.54mol)在DCM(10mL)中的溶液中添加SOCl2(