CN119487050A 用于提高病毒转导的组合物和方法 （唐纳森公司）

2024.12.31PCT/US2023/0700442023.07.12WO2024/015853EN2024.01.1824.根据权利要求1_3中任一项所述的融合蛋白，其中，所述具有相行为的多肽包括与5.根据权利要求1_4中任一项所述的融合蛋白6.根据权利要求1_5中任一项所述的融合蛋白，包括在所述具有相行为的多肽和所述9.一种提高慢病毒转导效率的方法，包括用慢病毒转导细胞并施用权利要求1_8中任所述慢病毒和所述融合蛋白的细胞的慢病毒转导得10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述慢病毒转导效率提高了至少20％、至少3NO:42的氨基酸序列的具有相行为的多肽。14.根据权利要求9_13中任一项所述的方法，其中，所述LDLR的CR3结构域是SEQIDNO:14的多肽。16.根据实施方式9_15中任一项所述的方法，其中，所述慢病毒转导效率提高了至少其中，所述具有相行为的多肽的氨基酸序列与SEQIDNO:12至少80％、至少81％、至少施用所述慢病毒和所述具有相行为的多肽的细胞的慢病毒转导18.根据权利要求17所述的方法，其中，所述慢病毒转导效率提高了至少20％、至少20.根据权利要求17_19中任一项所述的方法，其中，所述具有相行为的多肽具有SEQ4[0002]本申请要求于2022年7月12日提交的美国临时申请号US63/388,544的权益，其全括LDLR的CR3结构域和具有相行为的多肽的融合蛋白，以及使用其来提高慢病毒转导效率本领域需要用于提高慢病毒转导效率的组合物和方法以降低CART治疗成本。本公开解决的CR3结构域和具有相行为的多肽。本文所述的组合物出乎意料地提高或阻断了慢病毒转多肽位于LDLR的CR3结构域的N末端(例如，具有相行为的多肽附着在LDLR的CR3结构域的N5蛋白。在实施方式中，方法包括施用融合蛋白，该融合蛋白具有与SEQIDNO:5具有至少有相行为的多肽；其中，具有相行为的多肽的氨基酸序列与SEQIDNO:2至少80％、至少6不包括向用慢病毒转导的细胞施用具有相行为的多肽)的慢病毒转导效率相比提高了慢病至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列。在实施方式中，融合蛋白具有与SEQID的细胞的慢病毒转导得到提高。在实施方式中，慢病毒转导效率提高了至少20％、至少高至约100％、从约30％提高至约100％、从约40％提高至约100％、从约50％提高至约7高至约300％、从约40％提高至约300％、从约50％提高至约300％、从约60％提高至约高至约500％、从约40％提高至约500％、从约50％提高至约500％、从约60％提高至约8[0013]在实施方式中，方法包括施用融合蛋白，该融合蛋白包括与SEQIDNO病毒转导效率从约10％提高至约100％、从约20％提高至约100％、从约30％提高至约至约200％、从约100％提高至约200％、从约110％提高至约200％、从约120％提高至约提高至约200％、从约20％提高至约300％、从约30％提高至约300％、从约40％提高至约9至约300％、从约120％提高至约300％、从约130％提高至约300％、从约140％提高至约高至约400％、从约30％提高至约400％、从约40％提高至约400％、从约50％提高至约至约400％、从约130％提高至约400％、从约140％提高至约400％、从约150％提高至约肽具有SEQIDNO:12的氨基酸序导效率，试剂3显著地阻断了慢病毒转导。对照表示掺入了慢病毒颗粒但未添加试剂的样液中的慢病毒相关p24的量。所有样品的上清液中的慢病毒颗粒具有与对照相比相似或更共孵育的用表达GFP的慢病毒转导的HEK293T细胞中的GFP表达(通过流式细胞术测定)。慢用表达GFP的慢病毒转导的HEK293T细胞中的GFP表达(通过流式细胞术测定)。慢病毒在含表达GFP的慢病毒转导的HEK293T细胞中的GFP表达(通过流式细胞术测定)。慢病毒在含血孵育的用表达GFP的慢病毒转导的HEK293T细胞中的GFP表达(通过流式细胞术测定)。慢病毒在含血清的贴壁培养基中产生。对照表示掺入了慢病毒颗粒但未添加试剂的样品。*p<[0024]图7A_7B示出了用表达GFP的腺病毒转导并与试剂1或2孵育的HEK293T细胞中的[0029]除非上下文另有说明，特别地旨在本文描述的各种特征可以以任何组合方式使约99％的氨基酸。LDLR的CR3结构域的片段可以含有LDLR的全长CR3结构域的约20％、约氨基酸序列)进行比对来确定LDLR的CR3结构域内的[0036]包括融合蛋白的组合物，所述融合蛋白包括LDLR的CR3结构域和具有相行为的多肽[0037]本公开提供了包括融合蛋白的组合物，所述融合蛋白包括LDLR的CR3结构域和具[0039]在实施方式中，具有相行为的多肽包括SEQIDNO:1的氨基酸的氨基酸序列。包括SEQIDNO:42的具有相行为的多肽和LDLR的CR3结构域(供了编码本文所述的具有相行为的多肽的核酸。在实施方式中，具有相行为的多肽由SEQ[0045]在实施方式中，融合蛋白包括在具有相行为的多肽和LDLR的CR3结构域之间的接[0047]在一些实施方式中，接头具有KESGSVSSEQLAQFRSLD(SEQIDNO:25)的氨基酸序选自由以下组成的组的二肽：丙氨酸_丝氨酸(AS)、亮氨酸_谷氨酸(LE)和丝氨酸_精氨酸[0050]在一些实施方式中，接头选自GKSSGSGSESKS(SEQIDNO:28)、GSTSGSGKSSEGKG式中，2A肽是具有EGRGSLLTCGDVEENPGP(SEQIDNO:35)的氨基酸序列的T2A肽，具有ATNFSLLKQAGDVEENPGP(SEQIDNO:36)氨基酸序列的氨基酸序列的P2A肽，具有QCTNYALLKLAGDVESNPGP(SEQIDNO:37)的氨基酸序列的E2A肽，或具有的常规方法的实例包括在凝聚胺或慢病毒增强剂TRANSDUXTM[0059]在实施方式中，用于提高慢病毒转导效率的方法包括施用具有与SEQIDNO:2至[0060]在实施方式中，用于提高慢病毒转导效率的方法包括施用具有与SEQIDNO:5至至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列的融合蛋白将慢病毒转导效率提高了至少胞施用本文所述的具有相行为的多肽或融合蛋白的慢病毒转导方法的慢病毒转导效率降基酸序列。[0065]在实施方式中，稳定慢病毒的方法包括将慢病毒与本文所述的融合蛋白一起孵的融合蛋白一起孵育时，慢病毒在最高达约1.5MNaCl存在下稳定1至约6小时、1至[0082]目的：评估了具有相行为的多肽或包括具有相行为的多肽和低密度脂蛋白受体[0091]方法–慢病毒产生：使用含血清培养基中的贴壁细胞或无血清培养基中的悬浮细病毒和试剂4或5的组合物加入至每个孔中。将未与试剂4或5孵育的用慢病毒转导的[0096]图4A和4B示出了通过GFP+细胞百分比测量的慢病毒颗粒在4_8℃下2个月的稳定[0097]图5A和5B示出了通过GFP+细胞百分比测量的慢病毒颗粒在37℃下6小时的稳定12照。将腺病毒与细胞一起孵育24小时。使用[0109]1.一种融合蛋白，其包括与SEQIDNO:14的多肽至少80％相同的低密度脂蛋白[0110]2.根据实施方式1所述的融合蛋白，其中，所述LDLR的CR3结构域包括与SEQID相同的多肽。[0118]9.根据实施方式1_6中任一项所述的融