CN119488577A 一种改善全身慢性炎症的乳酸菌发酵板栗蛋白后生元的制备方法及其应用 （南开大学）

一种改善全身慢性炎症的乳酸菌发酵板栗种改善全身慢性炎症的乳酸菌发酵板栗蛋白后菌混合进行有氧发酵，得到板栗蛋白后生元产有效抑制巨噬细胞及肠道上皮细胞促炎介质分2将脱脂板栗粉按照脱脂板栗粉：蒸馏水的比例g：mL为1:15重悬于蒸馏水中，用杆菌、干酪乳杆菌、乳酸片球菌中的任意一种，所述乳酸菌的有效活菌数为(1_10)x4.根据权利要求1至3任一项所述的制备方法，其特征在于6.如权利要求5所述的板栗蛋白后生元在制备慢肠道上皮细胞促炎介质分泌，改善机体慢性炎症相关的糖脂代谢紊乱及肠道屏障功能受8.如权利要求5所述的板栗蛋白后生元在制备抑制巨噬细胞及肠道上皮细胞促炎介质9.如权利要求5所述的板栗蛋白后生元在制备改善机体慢性炎症相关的糖脂代谢紊乱3重要作用，因此本发明拟充分利用乳酸菌及植物蛋白在改善慢性炎症相关疾病中的优势，酸菌发酵板栗蛋白后生元的制备方法及其应用。[0007]一种改善全身慢性炎症的乳酸菌发酵板栗蛋白后生元的制备方法，包括如下步[0009]将脱脂板栗粉按照脱脂板栗粉：蒸馏水的比例g：mL为1:15重悬于蒸馏水中，用[0010]将上述混合物进行固液分离，保留上清液并4[0014]将所述板栗蛋白发酵底物与乳酸菌混合进行有氧发酵，得到板栗蛋白后生元产[0020]进一步地，所述板栗蛋白后生元能够抑制巨噬细胞及肠道上皮细胞促炎介质分[0021]如上所述的板栗蛋白后生元在制备抑制巨噬细胞及肠道上皮细胞促炎介质分泌[0022]如上所述的板栗蛋白后生元在制备改善机体慢性炎症相关的糖脂代谢紊乱和/或[0024]1、本发明方法制备得到的板栗蛋白后生元中所含有的生物活性肽均具有潜在的[0025]2、本发明板栗蛋白后生元可以通过食疗的方式显著降低机体血清促炎细胞因子5[0034]图7为本发明中板栗蛋白后生元产物对低度炎症小鼠血清促炎介质含量的影响[0039]一种改善全身慢性炎症的乳酸菌发酵板栗蛋白后生元的制备方法，包括如下步[0041]将脱脂板栗粉按照脱脂板栗粉：蒸馏水的比例g：mL为1:15重悬于蒸馏水中，用[0042]将上述混合物进行固液分离，保留上清液并[0046]将所述板栗蛋白发酵底物与乳酸菌混合进行有氧发酵，得到板栗蛋白后生元产[0052]较优地，所述板栗蛋白后生元能够抑制巨噬细胞及肠道[0053]如上所述的板栗蛋白后生元在制备抑制巨噬细胞及肠道上皮细胞促炎介质分泌[0054]如上所述的板栗蛋白后生元在制备改善机体慢性炎症相关的糖脂代谢紊乱和/或6[0057]一种改善全身慢性炎症的乳酸菌发酵板栗蛋白后生元的制备方法，包括如下步[0060](3)称取(2)所述方法得到的板栗蛋白粉5g与2g葡萄糖粉(购买于北京索莱宝科技[0061](4)鼠李糖乳杆菌的菌液制备如下：将鼠李糖乳杆菌在MRS培养基中(购买于北京箱中，发酵24h，将不同菌量发酵得到板栗蛋[0065]利用全自动pH测量仪评估实施例1中的发酵过程中样本酸度变化，取样本1g复溶量浓度0.1％三氟乙酸及45％乙腈的H2O溶液。取样本1g复溶于10mL蒸馏水中，匀浆后7而过大的菌量则使得发酵进程加快，产生较多的有机酸从而抑制乳酸菌的蛋白代谢活动，10)×107CFU/g板栗蛋白粉之间具有协同作用，能够协同提高发酵所制得的后生元产物的<0.45kDa[0072]利用OrbitrapFusion_Lumos进行UPLC_MS/MS分析。使用C18柱(3μm，75μm×鉴定出1585和1172个肽序列。利用PeptideRanker评分和BIOPEP蛋白数据库预测板栗蛋白[0075]根据反相高效液相色谱结果(图2)，CNP和CNPL中主要的游离氨基酸是丝氨酸89[0081]利用RAW264.7细胞株建立炎性巨噬细胞模型，将细胞以3×105个/孔接种至24孔分别降低47％和90％的NO分泌量，8％和21％的TNF_α分泌量，29％和31％的[0085]利用Caco_2细胞株建立炎性肠道上皮细胞模型，将细胞以2×105个/孔接种至12紧密连接蛋白ZO_1及Claudin_[0086]炎性肠道上皮细胞模型结果表明，LPS处理后小肠上皮细胞中ZO_1，Occludin及栗蛋白(CNP)及板栗蛋白后生元产物(CNPL)干预处栗蛋白后生元产物能够最为显著地缓解LPS诱导的肠上皮细组外，干预组和模型组均提供400μg/Kg的LPS饮水和含有总质量60％脂肪的高脂饲料饮食组(NC)小鼠(21.77±1.925g)相比显著降低。而FCPL(24.23±3.317g)和FCPH(24.48±[0096]结果发现，HFL组小鼠体内TNF_α含量(104.8±8.106pg/mL)明显高于NC组小鼠(119.2±9.828pg/mL)(P<0.05)。而灌胃不同浓度的发酵板栗蛋白均能抑制小鼠体内的TNF_α水平(FCPL:100.5±7.411pg/mL,FCPH:103.9±4.582pg/mL)，且具有显著效果(P<mL)板栗蛋白后生元都能抑制HFD+LPS诱导的IL_1β的异常升高，但只有低剂量干预组抑制小鼠体内的IL_6水平也明显增加(P<0.01)，而FCPL组(122.0±4.513pg/mL)和FCPH组的LPS水平较NC组(163.2±9.790EU/L)明显增加(P<0.001)，而板栗蛋白后生元(FCPL:143.5±6.510EU/L,FCPH:139.9±8.413EU/L)能显著抑制小鼠体内内毒素水平(P<0.01,P<ALT和AST试剂盒货号分别为C009_2_1和C01[0100]葡萄糖耐量测定结果如图8A_B所示，通过曲线下面积(AUC)栗蛋白后生元(FCPL:3.295±0.3169mmol/L,FCPH:2.503±0.6627mmol/L)能够抑制血清胆固醇含量的异常增加，其中FCPH组的抑制作用显著(P<0.01)。此外，与HFL组(1.741±1.474±0.2770mmol/L)的小鼠血清中甘油三酯含量有所降低，其中FCPL组较为显著(P<0.3771±0.1067mmol/L)小鼠的低密度脂蛋白含量明显低于HFL模型组(P<0.0001,P<0.7804U/L,AST:16.70±5.050U/L)相比，HFL组(ALT:8.233±2.106U/L,AST:24.60±L,AST:11.73±2.101U/L)[0104]在实施例6中的16周干预结束后收集小鼠结肠和小肠组织，观察结肠形态并对肠道组织中炎症因子(TNF_α和IL_1β)进行测定。TNF_α和IL_1β试剂盒购买自酶蛋白后生元均能不同程度缓解结肠受损情况(FCPL:7.300±0.3950cm,FCPH:7.500±[0105]结肠组织图9C_E炎症因子测定的结果表明，与NC组(50.77±0.7115ng/L)相比，栗蛋白后生元(FCP)能够抑制结肠和小肠组织中促炎细胞因子(TNF_α和IL_1β)的释放与NC组(7.679±1.331ng/L)相比其含量显著升高(P<0.