CN119488598A 治疗阿尔茨海默病的组合物和方法 （健艾仕生物医药有限公司）

201880045403.42018.05.09室本发明公开了通过靶向AD发病机理中的STAT1CH25H新通路来治疗或预防或延迟受试者22.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述STA5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述STAT1抑制剂是减少STAT1磷酸化的制3[0003]随着人口寿命的增加，阿尔茨海默病(AD)成为全球范围内普遍存在的健康问为是AD发展的主要诱因(Selkoe2001)。Aβ是在AD患者的老年斑中鉴定出的蛋白质组分或免疫疗法消除Aβ的策略(Tabira2011，Huang和Mucke2012，Ozudogru和Lippa2012，4[0007]一方面，本发明是通过向受试者施用药学有效量的STAT1抑制剂来治疗受试者的[0008]另一方面，本发明是通过向受试者施用药学有效量的CH25H抑制剂来治疗受试者的阿尔茨海默病(AD)的方法。在一个实施方案中，所述25_OHC抑制剂是CH25H抑制剂或[0010]在另一方面，本发明是通过向受试者施用药学有效量的STAT1抑制剂来预防或延迟受试者的阿尔茨海默病(AD)发作的方法。在一个实施方案中，所述STAT1抑制剂是针对[0011]在另一方面，本发明是通过向受试者施用药学有效量的CH25H抑制剂来预防或延迟受试者中阿尔茨海默病(AD)的发作的方法。在一些实施方案中，所述CH25H抑制剂是STAT1抑制剂是抑制JAK1和JAK3的制剂。在另一个实施方案中，所述STAT1抑制剂是减少实施方案中，所述25_OHC抑制剂是3_羟基_3_甲基_戊二酰辅酶A(HMG_CoA)还原酶抑制剂，5启动子区域或STAT1基因的SH2结构域来编辑STAT1基因以治疗受试者的阿尔茨海默病(AD)区域或STAT1基因的SH2结构域来编辑STAT1基因以预防或延迟受试者的阿尔茨海默病(AD)子区域来编辑CH25H基因以预防或延迟受试者的阿尔茨海默病(AD)发作的方法。在一些实提供带有彩色附图的本专利或专利申请公开文[0018]图1A和1B显示了在阿尔茨海默病患者中检测到磷酸化STAT1水平升高。图1A示出[0019]图2A_2E显示了STAT1基因缺陷减弱了脑内淀粉样β沉积。图2A显示了在AD的小鼠模型(APP/PS1小鼠)和具有STAT1缺陷的AD小鼠(APP/PS/STAT1_/_)中淀粉样蛋白β(Aβ)的2D显示了分别从3个月大的野生型、APP/PS1和APP/PS1/STAT1_/_小鼠获得的脑组织的TBSPS1和APP/PS1/STAT1_/_小鼠的脑中CH25HmRNA水平的实时定量PCR结果。数据代表3个独6[0023]图6A和6B显示了STAT1缺乏导致脑中25_OHC降低。具体地，图6A显示APP图6A中的胆固醇测量的相同小鼠中测量25_OHC水平的[0024]图7显示了全长APP蛋白在STAT1_/_小鼠的外泌体级分中减少。将来自APP/PS1和自通过收集纯化后的外泌体并将其裂解得到的样品。图8B展示了APP的Western印迹结果，25_OHC处理的细胞中表面APP的FACS分析[0026]图9显示了用25_OHC处理后外泌体中Aβ42增加。用不同浓度的25_OHC处理的细胞[0027]图10A_10C展示了用25_OHC处理后的细胞内APP滞留时间的增加。图10A显示了通对淀粉样蛋白β的脑组织切片。每隔一天给2个月大的小鼠注射25_OHC或作为对照的盐水，或25_OHC的小鼠。图11B和11C分别为从盐水对照和25_OHC小鼠获得的全脑(图11B)和海马显示了在CH25H敲除型小鼠中CH25H基因的缺失。图12D分别展示了WT(534bp)和KO(488bp)带的基因分型结果。图12E分别展示了在WT和CH25HKO小鼠中CH25HRNA水平的实时PCR结[0030]图13A和13B展示了在CH25HKO小鼠中Aβ斑块沉积减少。图13A显示了在AD的小鼠个脑部以及海马区的淀粉样蛋白β染色。图13B和13C显示了分别从3个月大的小鼠的APP/7PS1和APP/PS1/CH25H_/获得的全脑(图13B)和海马体(图13C)的5个连续部分中的Aβ斑块[0031]图14显示了CH25H基因的缺陷改善了APP/PS1小鼠的学习和记忆。对AP11)小鼠和APP/PS/CH25H_/_(n＝8)小鼠进行水迷[0032]图15显示了在用25_OHC以及不同剂量的泼尼松龙三甲基乙酸酯或辛伐他汀处理[0034]图17A和17B表明WT和STAT1缺陷型小鼠之间的小胶质细胞的吞噬能力是相似的。图17A显示了将来自WT或STAT1缺陷型小鼠的小胶质细胞与荧光微珠一起孵育。孵育5分钟基。图17B显示了内化微珠的定量结果。图17C展示了WT和STAT1缺陷型小鼠中SV2A的实时脑组织中CH25H(图18A)和其他已知的胆固醇羟化酶Cyp46al(图18B)、Cyp7bl(图18C)和Cyp7al(图18D)的实时定量PCR结果。结果显示，其他胆固醇羟化酶Cyp46al、Cyp7b1和[0036]图19A_19F显示了STAT1的缺乏不影响一般脂质代谢。图19A为3个月大时APP/PS1和APP/PS1/STAT1_/_小鼠的体重图，每组分别为n＝5。图19B分别显示了APP/PS1和APP/P[0038]本公开内容部分基于STAT1调节的CH25H表达影响阿尔茨海默病(AD)发病机理的AD发展过程中促进了Aβ沉积。在AD患者中检测到的较高量的磷酸化STAT1(pSTAT1)是AD发展的原因，因为STAT1的基因缺失延迟了脑中的Aβ沉积。CH25H是一种将胆固醇转换为25_8[0039]本文描述了用于治疗或预防至少部分与STAT1_CH25H轴相关的疾病或医学症状的[0040]本发明提供了用于治疗与受试者脑细胞中的Aβ沉积有关的疾病或医学症状的方[0044]在另一方面，本发明涉及通过抑制STAT1、其下游靶标CH25H或25_羟基化胆固醇[0045]在另一方面，本发明涉及通过抑制STAT1、其下游靶标CH25H或25_羟基化胆固醇[0046]在一个实施方案中，在上述方法中对STAT1的抑制是通过向受试者施用药学有效是指一种或多种在与本发明组合物或配方的其他成分相容的意义上可接受的成分或组分，9可以是一日内施用的单剂量或两个或多个亚剂量的STAT1抑制剂，也可以在一段时间内例[0053]剂量和间隔可以分别调节至足以诱导或抑制生物学作用的活性成分的血液水平治疗时的有效量可以比使用STAT1抑制剂预防或延迟Aβ沉积常，这样的使用或治疗导致例如(1)被治疗的病症或症状得到可检测的改善或缓解；(2)相等是指在受试者或至少少数受试者中发生可检测的改善种增加或减少。这样的增加或减少可以是至少约251015202530%,40506070758085％在这些值中的任何两个之间的任何范围内，约9095981001502002503004005001000％或更大。调节可方法是封闭的，它们将不包括或解读为具有可观量的附加组分或附加步骤的那些组合物或方法。抑制作用。选其对IL_6R的抑制作用。化的制剂可以是据报道可抑制STAT磷酸化基因的SH2结构域。基因组编辑工具可以是任何基因组编辑工具，只要它可以用于靶向STAT1基因的特定区域并可以传递到目标细胞即可。这种基因组编辑工具的一个例子是Ran,F等人所描述的CRISPR_CAS9系统。使用葡萄球菌[0071]在其他实施方案中，以上方法中对CH25H的抑制是通过向受试者施用药学有效量且STAT1的抑制导致STAT1不能激活CH25H。STAT1抑制剂可以是本申请中公开的任何STAT1用于删除整个CH25H基因、CH25H基因的组氨酸簇区域或所述启动子区域或神经细胞中的的特定区域并可以被传递到目标细胞即可。这种基因组编辑工具的一个例子是Ran,F等人基因组编辑工具的另一个例子是CRISPR_Cpf1系统，如Zetsche等人所述，Cpf1是2类[0074]在某些情况下，25_OHC抑制剂可以是CH25H抑制剂或STAT1抑制剂，因为CH25H和种特征也可以单独地或以任何合适的子组合或在本发明的任何其他所述的实施例中合适得新加坡国立大学机构动物护理和使用委员会的批准(InstitutionalAnimalCareand钟。将上清液作为核后级分。将核后级分小心地置于5％_45％的蔗糖梯度中，并在4℃以[0088]使用由MolecularGenomics提供的affymetrix微阵列系统(Affymetrix)进行微[0092]根据制造商的说明书，用Trizol试剂(Invitrogen)从细胞中提取总RNA。用Superscript逆转录酶(Invitrogen)合成互补DNA(cDNA)。通过使用SYBRqPCR试剂盒[0096]将来自APP/PS1或APP/PS1/STAT1_/_小鼠的一半脑半球在9倍体积的TBS中匀浆以预先清除，然后在4℃下用抗STAT1抗体(SantaCruz)或常规的兔IgG(SantaCruz)沉淀过对CH25H启动子有特异性的引物进行RT_P值<0.05被认为是显著的。临床的p值是通过单向方差多范围分析(ANOVA)进行多次比较确[0100]我们证明了在AD病例中STAT1的表达高于老年匹配对照病例(图1A和1B)。在图1ASTAT1_/_小鼠与APP/PS1小鼠杂交以产生具有STAT1_/_背景的AD小鼠。将APP/PS1/查。出乎意料的是，我们发现Stat1_/_小鼠的Aβ数量以及Aβ占据的面积持续减少(图2A和降低不是由于APP表达水平的改变或分泌酶[0105]通过蔗糖梯度分级分离小鼠脑匀浆以检查APP蛋白的细胞定位。简而言之，在5XFAD和5XFAD/STAT1_/_小鼠之间，APP的分布模式相似，除了具有最高密度的外泌体、[0106]我们使用APP过表达的SH_SY5Y细胞系来进一步检查外泌体APP的差异是否归因于[0113]我们研究了CH25HKO在AD发病机理中的作用。设计靶向CH25H的SgRNA，其中crisher/cas9方法敲除CH25H的CH25H基因，而534bp是野生型基因。CH25HKO小鼠中CH25HmRNA的表达显著降低(图[0115]一旦与5XFAD小鼠杂交，CH25HKO表现出与STAT1KO相似的表型。在免疫染色和与吞噬过程的关键基因SV2a和CCR2的mRNA。它们的表达水平在APP/PS1和APP/PS1/APP/PS1和APP/PS1/STAT1_/_小鼠之间的体重没有显著差异。如图19B所示，在APP/PS1和[0127]培养来自WT或STAT1_/_小鼠的原代海马神经元，然后用50mMKCl处理。通过RT_G.D.YancopoulosandM.E.Greenberg(1997)."RegulationofgliogenesisinthecentralnervoussystembytheJAK_STATsignalingpathway."S477_483.bytheE3ligasePIAS1enhancesspatialmemory."JNeurosci34(29):9574_[0131]Citron,M.(2010)."Alzheimer'sdisease:strategiesfordiseasemodification."NatRevDrugDiscov9(5):387_398.[0132]DeStrooper,B.,R.VassarandT.Golde(2010)."Thesecretases:enzymeswiththerapeuticpotentialinAlzheimerdisease."NatRevNeurol6(2):99_107.[0133]Delrieu,J.,P.J.Ousset,T.VoisinandB.Vellas(2014)."AmyloidbetapeptideimmunotherapyinAlzheimerdisease."RevNeu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