局方至宝丹检验规范

局方至宝丹检验规范1范围本规范规定了局方至宝丹的检验项目、检验方法、检验规则、判定规则、包装与贮存要求，适用于按《太平惠民和剂局方》处方及工艺生产的局方至宝丹成品的质量检验，也适用于其原料药材、中间产物的质量控制环节，药品生产企业质量检验部门、药品监督检验机构开展局方至宝丹相关检验工作时需严格遵循本规范要求。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。《中华人民共和国药典》2025年版一部《中华人民共和国药典》2025年版四部通则《药品生产质量管理规范》（2010年修订）《中药成方制剂质量标准制定技术指导原则》《毒性中药材管理规范》3处方与制法3.1处方水牛角浓缩粉300g，牛黄50g，玳瑁粉100g，人工麝香10g，朱砂100g，雄黄100g，琥珀100g，安息香150g，冰片10g。以上九味，朱砂、雄黄分别水飞成极细粉；琥珀粉碎成细粉；水牛角浓缩粉、玳瑁粉、牛黄、人工麝香、冰片分别研细，与上述粉末配研，过筛，混匀。安息香加乙醇溶解后，滤过，滤液浓缩至适量，与上述粉末泛丸，低温干燥，即得。3.2性状本品为朱红色至黑褐色的大蜜丸或水丸；气芳香浓郁，味微苦、辛。4检验项目与方法4.1性状检查取供试品10丸，置自然光下目视观察：大蜜丸应圆整均匀，色泽一致，无皱皮、变形、空心现象，表面无肉眼可见的异物；水丸应大小均匀，表面光滑，色泽均一，无粘连、脱壳、霉变现象。嗅闻气味应具有冰片、人工麝香的特异芳香，无酸败、异臭等异常气味。取1丸切开，观察断面应呈棕褐色至黑褐色，色泽均匀，无明显药粉结块。4.2鉴别4.2.1显微鉴别取供试品，研细，置显微镜下观察：不规则细小颗粒暗棕红色，有光泽，边缘暗黑色（朱砂）。不规则碎块金黄色或橙黄色，有光泽（雄黄）。不规则碎块近无色或淡黄绿色，透明，具玻璃样光泽，有时可见细密波状纹理（琥珀）。不规则碎片灰白色或灰黄色，稍具光泽，表面有灰棕色色素颗粒，并有不规则纵长裂缝（水牛角浓缩粉）。不规则碎块无色或淡黄色，半透明，具光泽，有时可见细密的纵纹理（玳瑁）。草酸钙簇晶大小不一，直径约15~50μm，存在于薄壁细胞中，或散在（牛黄）。无定形团块淡黄棕色，埋有细小方形结晶（人工麝香）。升华物呈不规则片状结晶，无色，加香草醛浓硫酸溶液即显紫红色（冰片）。4.2.2薄层色谱鉴别4.2.2.1冰片鉴别取本品2g，研细，加乙醚20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液挥至约1ml，作为供试品溶液。另取冰片对照品，加乙醚制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2025年版四部通则0502）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60~90℃）-乙酸乙酯（19:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点。4.2.2.2牛黄鉴别取本品3g，研细，加三氯甲烷30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸对照品、去氧胆酸对照品，加乙醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸（15:7:5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点。4.2.2.3人工麝香鉴别取本品5g，研细，加无水乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液。另取麝香酮对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60~90℃）-乙醚（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点。4.2.3特征图谱鉴别采用高效液相色谱法建立特征图谱：取本品约2.5g，研细，加甲醇50ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取安息香对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照高效液相色谱法（《中国药典》2025年版四部通则0512）试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.1%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml；柱温为30℃；检测波长为228nm。理论板数按苯甲酸峰计算应不低于5000。|时间（分钟）|流动相A（%）|流动相B（%）||--------------|--------------|--------------||0~10|10→20|90→80||10~25|20→40|80→60||25~40|40→70|60→30||40~50|70→10|30→90|分别精密吸取对照药材溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品特征图谱应呈现5个共有峰，其中与安息香对照药材色谱中苯甲酸峰相对应的峰为S峰，各共有峰的相对保留时间应在规定值的±5%范围之内，规定值为：峰1（相对保留时间0.42）、峰2（相对保留时间0.68）、峰3（S峰，1.00）、峰4（相对保留时间1.25）、峰5（相对保留时间1.62）。4.3检查4.3.1水分大蜜丸照水分测定法（《中国药典》2025年版四部通则0832第一法）测定，不得过15.0%；水丸照水分测定法第二法测定，不得过9.0%。取供试品切碎，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，精密称定，在100~105℃干燥5小时，将瓶盖好，移至干燥器中冷却30分钟，精密称定重量，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止，根据减失的重量计算供试品中含水量。4.3.2重量差异取供试品10丸，分别精密称定重量，求得平均丸重，再将每丸重量与平均丸重相比较。大蜜丸重量差异限度为±6%，水丸重量差异限度为±8%，超出重量差异限度的不得多于2丸，并不得有1丸超出限度1倍。包衣丸应在包衣前检查丸芯的重量差异，符合规定后方可包衣，包衣后不再检查重量差异。4.3.3崩解时限照崩解时限检查法（《中国药典》2025年版四部通则0921）检查，大蜜丸在人工胃液中，不加挡板，应在2小时内全部崩解；水丸应在1小时内全部崩解。如有1丸不能完全崩解，应另取6丸复试，均应符合规定。4.3.4微生物限度照微生物限度检查法（《中国药典》2025年版四部通则1105、1106、1107）检查，需氧菌总数每1g不得过10000cfu，霉菌和酵母菌总数每1g不得过100cfu，不得检出大肠埃希菌；每10g不得检出沙门菌。含原药材粉的丸剂还不得检出耐胆盐革兰阴性菌。4.3.5重金属及有害元素照铅、镉、砷、汞、铜测定法（《中国药典》2025年版四部通则2321）测定，本品每1g含铅不得过5mg，镉不得过0.3mg，砷不得过2mg，汞不得过0.2mg，铜不得过20mg。4.3.6朱砂、雄黄限量检查取本品约1g，精密称定，置250ml凯氏烧瓶中，加硫酸10ml与硝酸钾1.5g，加热使溶解，放冷，加水50ml，滴加1%高锰酸钾溶液至显粉红色，再滴加2%硫酸亚铁溶液至红色消失，加硫酸铁铵指示液2ml，用硫氰酸铵滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml硫氰酸铵滴定液（0.1mol/L）相当于11.63mg的硫化汞（HgS）或5.348mg的二硫化二砷（As₂S₂）。本品每1g含朱砂以硫化汞计，应为80~120mg；含雄黄以二硫化二砷计，应为75~115mg，且不得检出游离砷。4.4含量测定4.4.1冰片含量测定照气相色谱法（《中国药典》2025年版四部通则0521）测定。色谱条件与系统适用性试验：以聚乙二醇20000（PEG-20M）为固定相，涂布浓度为10%；柱温为140℃；理论板数按龙脑峰计算应不低于2000。校正因子测定：取水杨酸甲酯适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每1ml含5mg的溶液，作为内标溶液。另取龙脑对照品适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每1ml含4mg的溶液。精密量取对照品溶液与内标溶液各2ml，置10ml量瓶中，加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，吸取1μl注入气相色谱仪，计算校正因子。测定法：取本品细粉约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙酸乙酯25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）20分钟，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液2ml与内标溶液2ml，置10ml量瓶中，加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，吸取1μl注入气相色谱仪，测定，即得。本品每1g含冰片以龙脑（C₁₀H₁₈O）计，不得少于8.0mg。4.4.2牛黄中胆酸含量测定照高效液相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液（75:25）为流动相；检测波长为210nm；柱温为30℃；流速为每分钟1.0ml。理论板数按胆酸峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备：取胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品细粉约2.5g，精密称定，加甲醇50ml，称定重量，加热回流1.5小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣加20%氢氧化钠溶液10ml，加热回流2小时，冷却，加稀盐酸19ml调节pH至1~2，用乙酸乙酯振摇提取4次（20ml、20ml、15ml、15ml），合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每1g含牛黄以胆酸（C₂₄H₄₀O₅）计，不得少于6.0mg。4.4.3麝香酮含量测定照气相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验：以苯基（50%）甲基硅酮（OV-17）为固定相，涂布浓度为2%；柱温为200℃；检测器为氢火焰离子化检测器，温度为250℃；进样口温度为230℃。理论板数按麝香酮峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备：取麝香酮对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品细粉约5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率300W，频率50kHz）40分钟，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μl，注入气相色谱仪，测定，即得。本品每1g含人工麝香以麝香酮（C₁₆H₃₀O）计，不得少于0.8mg。5检验规则5.1批次划分同一生产周期内、同一批原料、同一生产线生产的均质产品为一批，每批产品最大批量不超过10万丸。5.2取样每批产品按批包装量的0.1%随机取样，小批量产品取样量不得少于30丸，取样时应具有代表性，同时抽取留样样品，留样量不少于全检量的3倍，留样保存至有效期后1年。5.3全检要求每批产品出厂前必须进行全项检验，所有检验项目符合本规范要求后方可放行。委托检验项目需由具备相应资质的药品检验机构承担，并提供正式检验报告。5.4复验规则检验结果不合格时，应重新从原批次中加倍量取样，对不合格项目进行复验，复验结果为最终判定依据。涉及微生物限度、毒性成分超标的项目不得复验。6判定规则全部检验项目符合本规范要求的产品，判定为合格；有任何一项不符合本规范要求的产品，判定为不合格。不合格产品不得放行上市，需按《不合格药品处理管理制度》进行销毁或无害化处理，处理记录需保存至少5年。7包装与贮存检验7.1包装检查药品包装应采用药用蜡壳或药用塑料球壳，密封严密，无破损、漏药现象。标签印刷应清晰，标注药品名称、规格、生产企业、批准文号、产品批号、生产日期、有效期、功能主治、用法用量、注意事项等内容，标识信息应与国家药品监督管理部门核准的内容一致。每盒内应附带药品说明书，说明书内容