鹿茸精注射液检验规范

鹿茸精注射液检验规范1范围本规范规定了鹿茸精注射液的质量要求、检验方法、检验规则、标志、包装、运输与贮存等内容。本规范适用于以梅花鹿或马鹿的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角为原料，经提取、精制、配制、灭菌等工艺制成的鹿茸精注射液的全项质量检验，涵盖原料检验、中间品检验及成品检验全流程。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。《中华人民共和国药典》2025年版一部、四部；《药品生产质量管理规范》（2010年修订）及后续修订版；《国家药品标准工作管理办法》；《中药注射剂安全性再评价技术要求》。3原料检验3.1基原鉴定供试品鹿茸基原应符合《中华人民共和国药典》2025年版一部“鹿茸”项下规定，采用DNA条形码鉴定法进行基原确认：取供试品0.5g，加液氮研磨成细粉，采用植物基因组DNA提取试剂盒提取总DNA，以COI基因通用引物进行PCR扩增，扩增产物经纯化后测序，所得序列与GenBank中梅花鹿（登录号：JN632611.1）、马鹿（登录号：JN632609.1）对应序列相似度不得低于98%，严禁混入其他鹿科动物或非鹿科动物角类原料。3.2性状检查鹿茸原料呈圆柱状分枝，表面密生红黄色或棕黄色细茸毛，上端较密，下端较疏；锯口面黄白色，中部密布细孔，外围无骨质。气微腥，味微咸。不得有虫蛀、霉变、腐烂、枯梢等现象，含水量不得过12.0%（照《中华人民共和国药典》2025年版四部通则0832第二法测定），总灰分不得过5.0%（照通则2302测定），酸不溶性灰分不得过1.0%（照通则2302测定）。3.3有害残留物限量检查原料中铅不得过5mg/kg、镉不得过0.3mg/kg、砷不得过2mg/kg、汞不得过0.2mg/kg、铜不得过20mg/kg（照通则2321原子吸收分光光度法或电感耦合等离子体质谱法测定）；有机氯农药残留量照通则2341测定，六六六（总BHC）不得过0.1mg/kg、滴滴涕（总DDT）不得过0.1mg/kg、五氯硝基苯不得过0.1mg/kg；黄曲霉毒素B₁不得过5μg/kg，黄曲霉毒素G₂、G₁、B₂、B₁总量不得过10μg/kg（照通则2351免疫亲和柱净化-高效液相色谱法测定）。4中间品检验4.1提取液相对密度测定鹿茸经水提、醇沉、浓缩后所得提取液，25℃时相对密度应控制在1.05~1.10之间（照通则0601比重瓶法测定）。取提取液10ml，置于已恒重的比重瓶中，精密称定重量，减去比重瓶重量得到供试品重量，除以同温度下水的重量即得相对密度，每批提取液平行测定2次，相对偏差不得过0.2%。4.2中间品总多肽含量测定采用福林酚比色法测定总多肽含量：精密量取中间品1ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，加福林酚试剂甲液5ml，混匀，于25℃放置10分钟，再加福林酚试剂乙液0.5ml，摇匀，于25℃放置30分钟，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在650nm波长处测定吸光度，以牛血清白蛋白为对照品绘制标准曲线计算含量，中间品总多肽含量不得低于1.0mg/ml。4.3有关物质检查采用高效液相色谱法（通则0512）测定有关物质：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，0.1%三氟乙酸溶液为流动相B，梯度洗脱（0~30分钟，流动相A比例5%→20%；30~45分钟，流动相A比例20%→40%），检测波长280nm，理论板数按次黄嘌呤峰计算应不低于5000。供试品色谱图中各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的2.0倍（2.0%），单个最大杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍（0.5%）。5成品检验5.1性状本品为无色或略带淡黄色的澄明液体。取本品5支，在自然光下目视观察，色泽应均匀一致，无浑浊、沉淀、絮状物，无可见异物；包装安瓿应无裂纹、破损，封口严密，印字清晰。5.2鉴别5.2.1化学鉴别取本品2ml，加茚三酮试液2~3滴，摇匀，水浴加热5分钟，应显蓝紫色；另取本品2ml，加碱性酒石酸铜试液1ml，水浴加热5分钟，应生成砖红色沉淀。5.2.2薄层色谱鉴别取本品10ml，加水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取鹿茸对照药材1g，加水50ml，煎煮30分钟，滤过，滤液同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4:1:5）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。5.3检查5.3.1pH值取本品，照通则0631pH值测定法测定，pH值应为5.5~7.0，每批供试品平行测定3次，读数偏差不得过0.1pH单位。5.3.2可见异物取本品20支，照通则0904可见异物检查法，分别在避光条件下用目力检视（光照度1000~1500lx），不得检出金属屑、玻璃屑、长度或最大粒径超过2mm的纤维、块状物等明显外来可见异物，检出细小絮状物或2mm以下的纤维、白点的支数不得过1支，如超过应另取20支复试，复试均不得检出。5.3.3不溶性微粒取本品，照通则0903不溶性微粒检查法，采用光阻法测定，每1ml中含10μm及10μm以上的微粒不得过25粒，含25μm及25μm以上的微粒不得过3粒。5.3.4热原取本品，按家兔体重每1kg注射2ml，照通则1142热原检查法，符合规定，家兔体温升高均应低于0.6℃，且3只家兔体温升高总和低于1.4℃。5.3.5异常毒性取本品，按小鼠体重每1g注射0.5ml，照通则1141异常毒性检查法静脉注射给药，给药后观察7天，小鼠应全部健存，无异常反应，体重增加。5.3.6过敏反应取本品，照通则1147过敏反应检查法，以豚鼠为试验动物，隔日腹腔注射本品0.5ml，连续3次，于第一次注射后第14天及第21天分别静脉注射本品1ml激发，观察30分钟，不得出现过敏反应症状，如竖毛、呼吸困难、抽搐、休克甚至死亡。5.3.7溶血与凝聚取本品，照通则1148溶血与凝聚检查法，2%兔红细胞混悬液与本品在37℃保温3小时，不得出现溶血或红细胞凝聚现象。5.3.8装量差异取供试品5支，照通则0102注射剂项下装量差异检查法，每支装量应为标示量的95.0%~105.0%，超出装量差异限度的不得多于1支，并不得有1支超出限度1倍。5.3.9无菌取本品，照通则1101无菌检查法，经薄膜过滤法处理，分别接种于硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基中，培养14天，应无菌生长。5.4含量测定5.4.1总多肽含量照中间品总多肽含量测定方法，本品每1ml含总多肽以牛血清白蛋白计，不得少于0.5mg。5.4.2次黄嘌呤含量采用高效液相色谱法测定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液（5:95）为流动相，检测波长254nm，理论板数按次黄嘌呤峰计算应不低于2000。精密称取次黄嘌呤对照品适量，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml含10μg的溶液，作为对照品溶液。精密量取本品20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，本品每1ml含次黄嘌呤应为0.2~0.4mg。6检验规则6.1批次划分同一批原料、同一配制罐、同一生产工艺、同一灭菌批次生产的产品为同一检验批，每批产品最多不超过10000支。6.2取样规则成品检验按批随机抽样，每批取样量至少为全项检验用量的3倍，其中1/3用于检验，1/3用于留样，1/3用于复验。原料取样按每批原料重量的0.1%抽取，不足100kg的至少抽取1个完整样品单元。6.3判定规则所有检验项目全部符合本规范规定时，判定为合格产品；如有不符合规定项目，应从同一批次中加倍取样对不合格项目进行复验，复验结果符合规定的判定为合格，若仍有项目不符合规定则判定为不合格。微生物限度、无菌、热原、异常毒性等安全性项目不合格的不得复验，直接判定为不合格。7留样管理每批检验合格产品应按批留样，留样数量至少为全项检验用量的2倍，留样贮存条件与产品贮存条件一