PCR实验室管理制度与程序2026版

XX市中心医院PCR实验室管理制度与程序（2026版）文件编号：XXSZXYY-PCRCZCX-（2-0）发放号：XXSZXYY-PCRCZCX-（2-0）F-持有者：副本控制：eq\o(□,√)受控£非受控批准日期：2026年07月10日发布日期：2026年07月10日实施日期：2026年08月01日７８十一快速肺炎支原体核酸检测标准操作程序1承担部门XX中心医院检验科PCR组2检验目的用于辅助诊断是否感染肺炎支原体。3原理和方法试剂盒中的MP-检测管，管内设置多个疏水分隔层，将管内的裂解液、清洗液和反应液进行隔离。通过外部仪器的加热控制，提取液在高温下化学裂解检测样本并释放出核酸。通过外部仪器磁导作用，使得检测用的样本核酸分别穿过不同液体层，最后核酸在管腿中被洗脱下来，发生扩增反应，从而实现“一管式”的全自动核酸分析即在一个密闭检测管内完成裂解结合、清洗、洗脱和扩增反应。MP-检测管预装有核酸纯化试剂、核酸洗脱试剂和交叉引物恒温扩增（CPA)试剂。上机前，只需加入MP-DNA提取液和待测样本，在适用仪器控制下就能自动完成样本中DNA的提纯，提纯后的DNA与扩增试剂被适用仪器混匀加热后进行扩增，同时荧光探针与引物扩增区域中间的一段DNA模板发生特异性结合并扩增而产生荧光信号。适用仪器采集荧光信号并自动判定检验结果。4性能特征4.1最低检出限：本试剂盒对人咽拭子样本中的肺炎支原体最低检出限为1000copies/mL。4.2对企业参考品检测的符合情况：4.2.1阴性参考品符合率：检测企业阴性参考品，检验结果均为阴性，符合要求。4.2.2阳性参考品符合率：检测企业阳性参考品，检验结果均为阳性，符合要求。4.2.3重复性参考品符合率：检测企业重复性参考品，检验结果均为阳性，符合要求。4.2.4最低检出限参考品：检测企业最低检出限参考品，S1、S2均为阳性，符合要求。5标本类型5.1咽拭子样本。5.2样本采集：用植绒拭子擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入含采样液的管中，尾部弃去，旋紧管盖。5.3样本储存：咽拭子样本应尽快进行检测。如果不能立即送检，应将样本置于采样液中，2℃～8℃冷藏不超过24小时，-20℃保存不超过7个月，-60℃保存不超过18个月，反复冻融不超过6次。6患者准备采样前2小时避免进食、喝水、吸烟、嚼口香糖等，以防影响结果。采样前可漱口，但不要使用漱口水或药物。7容器和添加剂类型选择具有病毒灭活功能如含胍盐（异硫氰酸胍或盐酸胍等）或表面活性剂的采样管，首选含胍盐的采样管。也可选择空的保存管，检测时在管中加1mL生理盐水。8仪器和试剂8.1仪器：杭州优思达生物技术有限公司UC0108、UC0102型核酸扩增检测分析仪。8.2试剂：杭州优思达生物技术有限公司UC0108、UC0102型核酸扩增检测分析仪配套试剂：肺炎支原体（MP)核酸检测试剂盒。8.2.1试剂盒组成及成分见下表：试剂盒组成及主要成分序号组分名称规格主要成分1MP-检测管1测试/管特异性引物和探针、脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、DNA聚合酶2MP-DNA提取液1mL/测试/管胍盐、磁珠3MP-阳性对照1.2mL/管含靶标片段4MP-阴性对照1.2mL/管不含靶标片段注：不同批号试剂盒中各组分不能互换混用。8.2.2试剂盒储存条件及有效期：2℃～8℃保存，有效期为12个月。8.2.3试剂盒运输条件：本试剂盒正面朝上放入AB瓦楞纸箱(外包装箱)中，在-25℃～37℃运输7天不会影响产品性能。8.2.4试剂盒生产日期及失效日期：见标签。8.2.5试剂盒适用仪器型号：UC0102、UC0108。8.3实验操作中需要但试剂盒中没提供的耗材：生理盐水、一次性采样拭子、保存管。9环境和安全控制咽拭子标本中存在潜在的生物危害因子，个人防护和废弃物处理详见《生物安全手册》（编号：XXSZXYY-SWAQ-AQSC06）。10操作步骤步骤操作图示1试剂准备：从试剂盒中取出对应样本数量的DNA提取液和检测管，震荡器充分混匀DNA提取液3秒～5秒后，将管内液体直接倒入检测管中。2加样：轻轻混匀拭子样本溶液后，吸取500μL加入检测管，并旋紧管盖。轻摇检测管混匀样本与磁珠提取液，上机检测。3仪器准备：打开仪器右侧电源开关，等待仪器自检结束后输入账号和密码，进入检测界面。4UC0108型核酸扩增检测分析仪共有8个检测模块，可点击显示屏任一模块位置，出现深蓝背景即为选中模块（如右图选中模块2）。5点击“扫描检测管二维码”处，再将检测管盖子上的二维码对准扫描口，识别成功后，屏幕显示“MP000”字样。6再将检测管盖子上的二维码对准扫描口；或点击屏幕上“扫描样本条形码”按钮，输入样本编号。7按压并打开模块2盖子，插入检测管（放入前左右摇晃检测管，使磁珠和样本充分混匀），塑料环朝左放置，最后按压合上模块2盖子。8点击“开始检测”按钮，模块2显示倒计时间。程序结束，仪器自动显示检测结果。11检验结果及其解释（见下表）检验结果解释阳性MPO0Ol和/或MP000r为阳性，样本中检测到肺炎支原体DNA。注:若病原体结果为阳性时，对应内标检测结果不做要求。阴性MPO00l和MP000r为阴性，且内标ICl和/或ICr为阳性，样本中未检测到肺炎支原体DNA。无效ICl和ICr为阴性，样本中未检测到内标基因，不确定样本中是否存在肺炎支原体DNA。无结果检测系统没有收集到足够的数据。11.1阳性判断值：检测程序运行结束后，仪器自动报告MP的阴/阳性，分别显示MP和IC的检测结果。仪器自动计算得到MP和IC的检测Tt值，并按照如下原则进行阴/阳性判断：（1）当MP的Tt为N/A时，MP为阴性；当MP的Tt≤40时，MP为阳性；（2）当IC的Tt为N/A时，IC为阴性；当IC的Tt≤40时，IC为阳性。11.2需要重新检测的情况：如果出现以下任一情况，则使用新的MP-检测管重新进行检测。（1）无效。例如：采样或样本处理不当、交叉引物恒温扩增试剂（CPA）被抑制或试剂盒失效。无效报告，需复检至该扩增区结果为“阳性”或“阴性”。如同一扩增区复检结果阴阳性不同，可能是由于样本中核酸浓度处于检测限附近，报告为阳性。（2）无结果。例如：实验操作者中途终止了测试。（3）外部质控（MP-阳性对照和MP-阴性对照）检验结果异常。例如：MP-阴性对照检测结果为阳性，可能存在污染。12质量控制12.1内部质控：本试剂盒的内部质控即内标系统用以监测采样、提取、纯化或扩增反应、适用仪器是否异常。检验结果为阳性时，对内标检测结果不做要求；检验结果为阴性时，内标检测结果须为阳性，否则检验结果为无效。12.2外部质控：试剂盒中的MP-阳性对照用于排除扩增试剂失效或适用仪器故障；MP-阴性对照用于监测试剂或环境是否被污染。MP-阳性对照的检验结果应为阳性，MP-阴性对照的检验结果应为阴性。12.3第三方质控：从冷藏冰箱中取出质控品，室温放置10min～15min后按常规样本检测。12.4质控规则：阳性质控品检测结果不能为阴性，阴性质控品检测结果不能为阳性。12.5失控时应采取的措施：失控时应停止签发检验报告，同时从检查质控品、试剂、仪器等原因入手，查找并记录失控原因；失控纠正后再行患者标本检测。13干扰和交叉反应分析13.1有关假阴性结果的可能性分析13.1.1不合理的样本采集、转运及处理、样本中肺炎支原体含量过低均有可能导致假阴性结果；13.1.2未经验证的其他干扰或扩增抑制因子，可能会导致假阴性结果；13.2有关假阳性结果的可能性分析13.2.1如果样本在运输、处理过程中发生交叉污染，则可能导致假阳性结果；13.2.2实验环境有扩增产物等气溶胶污染，则可能导致假阳性结果；13.2.3实验过程中使用的耗材、设备等受污染，则可能导致假阳性结果。14参考区间阴性15临床解释15.1本试剂盒的检验结果仅供临床参考，对患者的临床诊治应结合其症状、体征、病史、其他实验室检查及治疗效果等情况综合考虑。15.2阳性结果：表明患者感染肺炎支原体；阳性结果不能排除监测指标外病原体感染情况。15.3阴性结果：不能排除肺炎支原体感染，也不应作为治疗或制定其他患者管理决策的唯一依据。16检验结果报告方式序号项目结果参考区间灵敏度检测方法1肺炎支原体核酸检测阳性阴性1000拷贝/mL恒温扩增-实时荧光法17参考文献17.1儿童肺炎支原体肺炎诊疗指南（2025年版）。17.2尚红，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第4版.北京：人民卫生出版社，2015.17.3李金明.实时荧光PCR技术[M].第2版.北京：科学出版社，2016.XX中心医院文件编号：XXSZXYY-PCRCZCX（2-0）第二部分仪器与项目标准操作程序版本：第2版，第0次修改十二快速沙眼衣原体和淋球菌核酸检测标准操作程序生效日期：2026-08-01十二快速沙眼衣原体和淋球菌核酸检测标准操作程序1承担部门XX中心医院检验科PCR组。2检验目的用于辅助诊断是否感染沙眼衣原体和淋球菌。3原理和方法试剂盒中的检测管，管内设置多个疏水分隔层，将管内的裂解液、清洗液和反应液进行隔离。通过外部仪器的加热控制，提取液在高温下化学裂解检测样本并释放出核酸。通过外部仪器磁导作用，使得检测用的样本核酸分别穿过不同液体层，最后核酸在管腿中被洗脱下来，发生扩增反应，从而实现“一管式”的全自动核酸分析即在一个密闭检测管内完成裂解结合、清洗、洗脱和扩增反应。试剂采用交叉引物恒温扩增技术(CrossPrimingAmplification,CPA)检测沙眼衣原体或淋球菌特异性的保守序列。其反应体系通过特异性扩增引物、特异性荧光探针以及具有高活性的链置换特性的DNA聚合酶。在恒定温度条件下，一次性完成沙眼衣原体或淋球菌的特异扩增过程，荧光信号被适配仪器探测到并自动生成实时荧光曲线。试剂盒预装的试剂包括内标(简称IC)，由内标模板(预装入DNA-提取液中)和一套与其对应的交叉引物恒温扩增（CPA)系统组成，用以监测提取、纯化和扩增反应是否有效。上机前，只需加入CT+NG-DNA提取液(含内标)和待测样本，在适用仪器控制下就能自动完成样本中DNA的提纯，提纯后的DNA与CPA反应试剂被适用仪器混匀加热后进行恒温扩增，同时，荧光探针与引物扩增区域中的一段DNA模板发生特异性结合并扩增而产生荧光信号。适用仪器实时采集荧光信号并通过对荧光信号变化的分析实现自动判定检验结果。4性能特征4.1对“淋病PCR试剂盒参考品”(简称NG国家参考品)检测的符合情况（1）阴性参考品符合率：检测NG国家参考品中的10份阴性参考品(NG-N1～NG-N10)，检测结果中CT和NG均为阴性。（2）阳性参考品符合率：检测NG国家参考品中的10份阳性参考品(NG-P1～NG-P10)，检测结果中CT均为阴性，NG均为阳性。（3）最低检出限：检测NG国家参考品中的最低检出限参考品(NG-S)的S1和S2，检测结果中CT为阴性，NG为阳性。（4）重复性：检测NG国家参考品中的精密性参考品(NG-R)，平行检测10次，检测结果中CT均为阴性，NG均为阳性。4.2CT企业阴性、阳性参考品的检测符合情况（1）检测企业阴性参考品，8份参考品检测结果中CT和NG均为阴性。（2）检测CT企业阳性参考品，10份参考品检测结果中CT为阳性，NG为明性；（3）检测NG企业阳性参考品，10份参考品检测结果中CT为阴性，NG为阳性。4.3最低检出限本试剂盒中CT的最低检测限为400copies/mL，NG的最低检测限为400copies/mL4.4重复性检测企业弱阳性重复性参考品J1～J10，检测结果中CT和NG结果全部为阳性；检测企业中阳性重复性参考品K1～K10，检测结果中的CT和NG结果全部为阳性。5标本类型5.1男性尿道拭子、女性宫颈拭子样本、尿液。5.2样本采集（1）男性泌尿道拭子：①清洁尿道口，用无菌拭子伸入尿道2cm～4cm，旋转3s～5s取出分泌物，取出的分泌物应略带粘膜。采集后的无菌拭子置入无菌收集管中，密闭送检。（2）女性宫颈拭子：①清洁宫颈口过多的分泌物，用无菌拭子插入宫颈内2cm～3cm，旋转并停留10s～30s取出分泌物，取出的分泌物应略带粘膜。采集后的无菌拭子置入无菌收集管中，密闭送检。（3）尿液：收集约10mL左右的初段尿。5.3样本储存：标本应尽快送检，如果不能立即送检，应将标本置于2-8℃冷藏(不应超过7天)：-20±5℃保存不超过7个月，反复冻融不超过6次；-70℃及以下保存不超过13个月。5.4样本运输：采用冰壶加冰或泡沫箱加冰密封的方式进行运输。5.5样本处理：在无菌拭子样本收集管中加入1mL生理盐水(用作样本稀释液)，充分震荡混匀，吸取液体至1.5mL离心管中(如分泌物较多，只取0.5mL；棉拭子靠离心管壁挤干后丢弃)，作为待测样本备用。6患者准备病人在采样前2个小时不能排尿，采样前24小时禁止性生活。7容器和添加剂类型男性采用男性泌尿道试子采样管；女性采用女性宫颈拭子采样管。8仪器和试剂8.1仪器：杭州优思达生物技术有限公司UC0108、UC0102型核酸扩增检测分析仪。8.2试剂：杭州优思达生物技术有限公司UC0108、UC0102型核酸扩增检测分析仪配套试剂：沙眼衣原体（CT)和淋球菌（NG）核酸检测试剂盒。8.2.1试剂盒组成及成分见下表：试剂盒组成及主要成分序号组分名称规格主要成分1CT+NG-全自动检测管1测试/管含有一定浓度的特异性引物和探针、脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、DNA聚合酶2CT+NG-DNA提取液(含内标)1mL/测试/管胍盐、磁珠、内标3CT+NG-阳性对照500μL/管含有沙眼衣原体、淋球菌特异性片段的质粒4CT+NG-阴性对照500μL/管生理盐水注：不同批号试剂盒中各组分不能互换混用。8.2.2试剂盒储存条件及有效期：2℃～8℃保存，有效期为12个月。8.2.3试剂盒运输条件：本试剂盒正面朝上放入AB瓦楞纸箱(外包装箱)中，在-25℃～30℃运输7天不会影响产品性能。8.2.4试剂盒生产日期及失效日期：见标签。8.2.5试剂盒适用仪器型号：UC0102、UC0108。8.2.6使用稳定性：样本加入检测管后，放置于2℃～8℃条件下，在8小时内进行检测，不影响产品性能。9环境和安全控制咽拭子标本中存在潜在的生物危害因子，个人防护和废弃物处理详见《生物安全手册》（编号：XXSZXYY-SWAQ-AQSC06）。10操作步骤步骤操作图示1试剂准备：从试剂盒中取出对应样本数量的DNA提取液和检测管，震荡器充分混匀DNA提取液3秒～5秒后，将磁珠提取液直接倒入检测管中。2拭子样本：使拭子在Cbuffer缓冲液洗脱，再加洗脱液100μL到检测管中，并旋紧管盖。尿液：直接吸取100μL待检样本加入检测管，并旋紧管盖。轻摇检测管混匀样本与磁珠提取液，上机检测。3仪器准备：打开仪器右侧电源开关，等待仪器自检结束后输入账号和密码，进入检测界面。4UC0108型核酸扩增检测分析仪共有8个检测模块，可点击显示屏任一模块位置，出现深蓝背景即为选中模块（如右图选中模块2）。5点击“扫描检测管二维码”处，再将检测管盖子上的二维码对准扫描口，识别成功后，屏幕显示“CTNG0”字样。6再将检测管盖子上的二维码对准扫描口；或点击屏幕上“扫描样本条形码”按钮，输入样本编号。7按压并打开模块2盖子，插入检测管（放入前左右摇晃检测管，使磁珠和样本充分混匀），塑料环朝左放置，最后按压合上模块2盖子。8点击“开始检测”按钮，模块2显示倒计时间。程序结束，仪器自动显示检测结果。11检验结果及其解释（见下表）检验结果解释“CT阳性”“NG阳性”样本中检测到沙眼衣原体DNA和淋球菌DNA备注：若病原体结果为阳性时，对应内标检测结果不做要求。“CT阳性”“NG阴性”样本中检测到沙眼衣原体DNA；样本中未检测到淋球菌DNA，并且NG的内标检测满足接受标准。备注：若病原体结果为阳性时，对应内标检测结果不做要求。“CT阴性”“NG阳性”样本中未检测到沙眼衣原体DNA，并且CT的内标检测满足接受标准；样本中检测到淋球菌DNA。备注：若病原体结果为阳性时，对应内标检测结果不做要求。“CT阴性”“NG阴性”样本中未检测到沙眼衣原体DNA和淋球菌DNA，并且CT和NG的内标检测满足接受标准。“CT阳性”“NG无效”样本中检测到沙眼衣原体DNA；NG的内标检测不满足接受标准，不确定样本中是否存在淋球菌。备注：若病原体结果为阳性时，对应内标检测结果不做要求。“CT无效”“NG阳性”CT的内标检测不满足接受标准，不确定样本中是否存在沙眼衣原体；样本中检测到淋球菌DNA。备注：若病原体结果为阳性时，对应内标检测结果不做要求。“CT阴性”“NG无效”样本中未检测到沙眼衣原体DNA，并且CT的内标检测满足接受标准；NG的内标检测不满足接受标准，不确定样本中是否存在淋球菌。“CT无效”“NG阴性”CT的内标检测不满足接受标准，不确定样本中是否存在沙眼衣原体；样本中未检测到淋球菌DNA，并且NG的内标检测满足接受标准。“CT无效”“NG无效”CT的内标检测不满足接受标准，不确定样本中是否存在沙眼衣原体：NG的内标检测不满足接受标准，不确定样本中是否存在淋球菌。无结果检测系统没有收集到足够的数据。11.1阳性判断值：检测程序运行结束后，适用仪器自动报告阴阳性。阳性对照检测结果应为“CT阳性；NG阳性”，阴性对照检测结果应为“CT阴性；NG阴性”。检验结果分别显示CT/NG和IC的检测结果。CT/NG检测结果应呈现典型S型扩增曲线(包括未到平台期的S曲线)。当CT或NGTt≤30时，CT或NG为阳性；否则，CT或NG为阴性。IC检测结果应呈现典型S型扩增曲线(包括未到平台期的S曲线)。当ICTt≤30时，IC为阳性；否则，IC为阴性。11.2需要重新检测的情况：如果出现以下任一种情况，则使用新的CT+NG-全自动检测管及剩余样本重新进行检测。（1）无效。例如，样本处理不当或交叉引物恒温扩增（CPA)试剂被抑制。可进行适当的样本预处理，样本预处理步骤如下：使用样本稀释液将样本稀释10倍后，再取100μL进行检测。（2）无结果。例如，实验操作者中途终止了测试。（3）外部质控(CT+NG-阳性对照和CT+NG-阴性对照)检验结果异常。例如，CT+NG-阴性对照检验结果为阳性，可能存在污染。12质量控制12.1内部质控：试剂盒的内部质控即内标系统由非传染细胞(不含沙眼衣原体(CT)和淋球菌(NG)扩增靶序列)和一套完整的引物、特异性探针组成，用以监则是否发生样本处理失败、扩增试剂失效、适用仪器故障。检验结果为阳性时，不要求内标检测满足接受标准：检验结果为阴性时，内标检测结果质满足接受标准，否则检验结果为“无效”,12.2外部质控：试剂盒的外部质控包括CT+NG-阳性对照和CT+NG-阴性对照。（1）CT+NG-阳性对照是含有一定浓度的沙眼衣原体(CT)和淋球菌(NG)特异性片段的人工构建质粒溶液，用于排除扩增试剂失效或适用仪器故障；（2）CT+NG-阴性对照是生理盐水，用于监测试剂或环境是否被污染。（3）外部质控仅用于排除故障和实验室质量控制。CT+NG-阳性对照的检验结果应为“CT阳性”“NG阳性”，CT+NG-阴性对照的检验结果应为“CT阴性”“NG阴性”。12.3第三方质控：从冷藏冰箱中取出质控品，室温放置10min～15min后按常规样本检测。12.4质控规则：阳性质控品检测结果不能为阴性，阴性质控品检测结果不能为阳性。12.5失控时应采取的措施：失控时应停止签发检验报告，同时从检查质控品、试剂、仪器等原因入手，查找并记录失控原因；失控纠正后再行患者标本检测。13干扰和交叉反应分析13.1有关假阴性结果的可能性分析13.1.1不合理的样本采集、转运及处理、样本中沙眼衣原体或淋球菌含量过低均有可能导致假阴性结果；13.1.2待测靶核酸变异或其他原因导致的序列改变可能会导致假阴性结果。13.1.3未经验证的其他干扰或扩增抑制因子，可能会导致假阴性结果。13.1.4同一患者不同时间或者多次采集样本会降低假阴性结果的可能性。13.2有关假阳性结果的可能性分析13.2.1样本间发生交叉污染，则可能导致假阳性结果。13.2.2未经验证的其他交叉反应物质，则可能导致假阳性结果。14参考区间阴性15临床解释15.1本试剂盒的检验结果仅供临床参考，对患者的临床诊治应结合其症状、体征、病史、其他实验室检查及治疗效果等情况综合考虑。15.2阳性结果：表明患者感染沙眼衣原体或淋球菌；阳性结果不能排除监测指标外病原体感染情况。15.3阴性结果：不能排除沙眼衣原体或淋球菌感染，也不应作为治疗或制定其他患者管理决策的唯一依据。16检验结果报告方式序号项目结果参考区间灵敏度检测方法1沙眼衣原体核酸检测阳性阴性400拷贝/mL恒温扩增-实时荧光法2淋球菌核酸检测阳性阴性400拷贝/mL恒温扩增-实时荧光法17参考文献17.1尚红，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第4版.北京：人民卫生出版社，2015.17.2李金明.实时荧光PCR技术[M].第2版.北京：科学出版社，2016.18附件或附录18.1沙眼衣原体（CT）和淋球菌（NG）核酸检测试剂盒（恒温扩增-实时荧光法）说明书（此处省略）。XX中心医院文件编号：XXSZXYY-PCRCZCX（2-0）第二部分仪器与项目标准操作程序版本：第2版，第0次修改十三快速腺病毒/鼻病毒核酸检测标准操作程序生效日期：2026-08-01十三快速腺病毒/鼻病毒核酸检测标准操作程序1承担部门XX中心医院检验科PCR组。2检验目的用于辅助诊断是否感染腺病毒和/或鼻病毒。3原理和方法试剂盒中的AdHRV-检测管在管内设置多个疏水分隔层，将管内的核酸提取液，清洗液和反应液进行隔离，通过外部仪器的加热控制，提取液在高温下化学裂解检测样本并释放出核酸，通过外部仪器磁导作用，使得检测用的标本核酸分别穿过不同液体层，最后核酸在管腿中被洗脱下来，发生扩增反应，从而实现“一管式”的全自动核酸分析即在一个密闭检测管内完成裂解结合、清洗，洗脱和扩增反应。AdHRV-检测管预装有核酸纯化试剂、核酸洗脱试剂和交叉引物恒温扩增试剂。检测时，只需加入AdHRV-核酸提取液和样本，在适用仪器中完成核酸的提纯，提纯后的核酸与扩增检测试剂被适用仪器混匀加热后进行扩增，同时荧光探针与靶标发生特异性结合产生荧光信号。适用仪器采集荧光信号并自动判定检测结果。试剂通过内部质控（内标基因为β-actin和GAPDH）和外部质控（AdHRV-阳性对照和AdHRV-阴性对照）对检测过程进行全程质量控制。4性能特征4.1阳性参考品符合率：检测企业阳性参考品，结果均符合要求。4.2阴性参考品符合率：检测企业阴性参考品，结果均符合要求。4.3重复性参考品符合率：检测企业重复性参考品，结果均符合要求。4.4最低检测限：本试剂盒的最低检测限为400copies/mL。4.5重复性：对中阳性、弱阳性重复性参考品以及阴性样本，进行20天、2人、6批次试剂检测，批内、批间重复性；日内、日间重复性；操作者内、间重复性均良好，符合率100%。5标本类型5.1适用样本类型：咽拭子。5.2样本采集咽拭子：用聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后璧，将拭子头浸入含3mL采样液的管中，尾部弃去，旋紧管盖。5.3标本储存：咽拭子标本应尽快进行检测。如果不能立即送检，应将样本置于2-8℃保存不超过48小时。标本应避免反复冻融（最多不超过3次）。5.4运输：标本采集后应尽快送往实验室，如果需要长途运输标本，建议采用干冰等制冷方式进行保藏。6患者准备采样前2小时避免进食、喝水、吸烟、嚼口香糖等，以防影响结果。采样前可漱口，但不要使用漱口水或药物。7容器和添加剂类型选择具有病毒灭活功能如含胍盐（异硫氰酸胍或盐酸胍等）或表面活性剂的采样管。首选含胍盐的采样管。8仪器和试剂8.1仪器：杭州优思达生物技术有限公司UC0108、UC0102型核酸扩增检测分析仪。8.2试剂：杭州优思达生物技术有限公司UC0108、UC0102型核酸扩增检测分析仪配套试剂：腺病毒/鼻病毒核酸检测试剂盒。8.2.1试剂盒组成及成分见下表：试剂盒组成及主要成分序号组分名称规格主要成分1AdHRV-检测管1测试/管特异性引物和探针、脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、DNA聚合酶、逆转录酶等。2AdHRV-核酸提取液1mL/测试/管胍盐、磁珠3AdHRV-阳性对照1.2mL/管含HAdV靶标片段的质粒和HRV靶标片断的假病毒4AdHRV-阴性对照1.2mL/管含β-actin靶标片断的质粒和GAPDH靶标片断的假病毒注：不同批号试剂盒中各组分不能互换混用。8.2.2试剂盒储存条件及有效期：2℃～8℃保存，有效期为12个月。8.2.3试剂盒运输条件：本试剂盒正面朝上放入AB瓦楞纸箱(外包装箱)中，在-25℃～37℃运输7天不会影响产品性能。8.2.4试剂盒适用仪器型号：UC0102、UC0108。9环境和安全控制咽拭子和痰液标本中存在潜在的生物危害因子，个人防护和废弃物处理详见《生物安全手册》（编号：XXSZXYY-SWAQ-AQSC06）。10操作步骤步骤操作图示（参考新冠病毒核酸检测）1试剂准备：从试剂盒中取出对应样本数量的核酸提取液和检测管。震荡器充分混匀核酸提取液3-5秒后，将管内液体直接倒入检测管中。2加样：加500μL拭子样本溶液到检测管中，并旋紧管盖。轻摇检测管混匀样本与磁珠提取液，上机检测。3仪器准备：打开仪器右侧电源开关，等待仪器自检结束后输入账号和密码，进入检测界面。4UC0108型核酸扩增检测分析仪共有8个检测模块，可点击显示屏任一模块位置，出现深蓝背景即为选中模块（如右图选中模块2）。5点击“扫描检测管二维码”处，再将检测管盖子上的二维码对准扫描口，识别成功后，屏幕显示“AdHRV”字样。6再将检测管盖子上的二维码对准扫描口；或点击屏幕上“扫描样本条形码”按钮，输入样本编号。7按压并打开模块2盖子，插入检测管（放入前左右摇晃检测管，使磁珠和样本充分混匀），塑料环朝左放置，最后按压合上模块2盖子。8点击“开始检测”按钮，模块2显示倒计时间。程序结束，仪器自动显示检测结果。11检验结果及其解释（见下表）检验结果解释Ad阳性HRV阴性样本中检测到腺病毒靶标核酸；鼻病毒的内标检测满足接受标准，样本中未检测到鼻病毒靶标核酸。Ad阳性HRV阳性样本中检测到腺病毒靶标核酸和鼻病毒靶标核酸。Ad阴性HRV阳性腺病毒的内标检测满足接受标准，样本中未检测到腺病毒靶标核酸；样本中检测到鼻病毒靶标核酸。Ad阴性HRV阴性样本中未检测到腺病毒和鼻病毒的靶标核酸，且二者的内标检测均满足接受要求。Ad阳性HRV无效样本中检测到腺病毒靶标核酸；鼻病毒的内标检测不满足接受标准，不确定样本中是否存在。Ad阴性HRV无效腺病毒的内标检测满足接受标准，样本中未检测到腺病毒靶标核酸；鼻病毒的内标检测不满足接受标准，不确定样本中是否存在。Ad无效HRV阳性腺病毒的内标检测不满足接受标准，不确定样本中是否存在。样本中检测到鼻病毒靶标核酸。Ad无效HRV阴性腺病毒的内标检测不满足接受标准，不确定样本中是否存在。鼻病毒的内标检测满足接受标准，样本中未检测到鼻病毒靶标核酸。Ad无效HRV无效腺病毒的内标检测不满足接受标准，不确定样本中是否存在。鼻病毒的内标检测不满足接受标准，不确定样本中是否存在。11.1阳性判断值：检测程序运行结束后，适用仪器自动计算得到的检测Tt值，并按照如下原则自动进行腺病毒、鼻病毒的阴/阳性判断，腺病毒检测结果与鼻病毒检测结果独立分析及报告；（1）左扩增区FAM荧光报告腺病毒检测结果(ADl)；CY5荧光报告腺病毒内标检测结果（ICI)；（2）右扩增区FAM荧光报告鼻病毒检测结果(HRVr)；CY5荧光报告腺病毒内标检测结果（ICr)；（3）当ADl的Tt≤19时，报告为腺病毒阳性；当ADl的Tt值为N/A且ICI的Tt≤19时，报告为腺病毒阴性；（4）当HRVr的Tt≤19时，报告为鼻病毒阳性；当HRVr的Tt值为N/A且ICr的Tt≤19时，报告为鼻病毒阴性；（5）当ICI和ICr的Tt值为N/A时，IC为阴性；当IC的Tt≤19时，IC为阳性。12质量控制本试剂盒包括内部质控和外部质控。12.1内部质控本试剂盒的内部质控即内标系统用以监测是否发生采样、提取、纯化或扩增反应、适用仪器是否异常。腺病毒、鼻病毒检验结果为阳性时，对应内标检测结果不做要求；腺病毒、鼻病毒检验结果为阴性时，对应内标检测结果为阳性（IC的Tt≤19)，否则检验结果为无效。2.2外部质控试剂盒中的ADHRV阳性对照用于排除扩增试剂失效或适用仪器故障；ADHRV阴性对照用于监测试剂或环境是否被污染。ADHRV阳性对照的检测结果为应为“Ad阳性、HRV阳性”，ADHRV阴性对照“Ad阴性、HRV阴性”。14参考区间阴性15临床解释15.1本试剂盒的检验结果仅供临床参考，对患者的临床诊治应结合其症状、体征、病史、其他实验室检查及治疗效果等情况综合考虑。15.2阳性结果：表明患者感染腺病毒/鼻病毒；阳性结果不能排除监测指标外病原体感染情况。15.3阴性结果：不能排除腺病毒/鼻病毒感染，也不应作为治疗或制定其他患者管理决策的唯一依据。16检验结果报告方式序号项目结果参考区间灵敏度检测方法1腺病毒阳性（阴性）阴性400拷贝/mL恒温扩增-实时荧光法2鼻病毒阳性（阴性）阴性400拷贝/mL恒温扩增-实时荧光法17参考文献17.1尚红，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第4版.北京：人民卫生出版社，2015.17.2李金明.实时荧光PCR技术[M].第2版.北京：科学出版社，2016.18附件或附录18.1腺病毒/鼻病毒核酸检测试剂盒（恒温扩增-实时荧光法）说明书（此处省略）。XX中心医院文件编号：XXSZXYY-PCRCZCX（2-0）第二部分仪器与项目标准操作程序版本：第2版，第0次修改十四快速呼吸道合胞病毒核酸检测标准操作程序生效日期：2026-08-01十四快速呼吸道合胞病毒核酸检测标准操作程序1承担部门XX中心医院检验科PCR组。2检验目的用于辅助诊断是否感染呼吸道合胞病毒。3原理和方法试剂盒中的RSV-检测管，管内设置多个疏水分隔层，将管内的裂解液、清洗液和反应液进行隔离。通过外部仪器的加热控制，提取液在高温下化学裂解检测样本并释放出核酸。通过外部仪器磁导作用，使得检测用的样本核酸分别穿过不同液体层，最后核酸在管腿中被洗脱下来，发生扩增反应，从而实现“一管式”的全自动核酸分析即在一个密闭检测管内完成裂解结合、清洗、洗脱和扩增反应。RSV-检测管预装有核酸纯化试剂、核酸洗脱试剂和交叉引物恒温扩增（CPA)试剂。上机前，只需加入RSV-RNA提取液和待测样本，在适用仪器控制下就能自动完成样本中核酸的提纯，提纯后的核酸与扩增试剂被适用仪器混匀加热后进行扩增，同时荧光探针与靶标发生特异性结合并扩增而产生荧光信号。适用仪器采集荧光信号并自动判定检验结果。4性能特征4.1最低检出限：100copies/mL。4.2对国家参考品的检测：4.2.1检测国家阳性参考品，阳性符合率100%；4.2.2检测国家阴性参考品，阴性符合率100%；4.2.3检测国家重复性参考品，结果均符合要求；4.2.4检测国家最低检出限参考品，结果均符合相应要求。5标本类型5.1咽拭子样本。5.2样本采集：用植绒拭子擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入含采样液的管中，尾部弃去，旋紧管盖。5.3样本储存：咽拭子样本应尽快进行检测。如果不能立即送检，应将样本置于采样液中，2℃～8℃冷藏不超过24小时，-20℃保存不超过7个月，-60℃保存不超过18个月，反复冻融不超过6次。6患者准备采样前2小时避免进食、喝水、吸烟、嚼口香糖等，以防影响结果。采样前可漱口，但不要使用漱口水或药物。7容器和添加剂类型选择具有病毒灭活功能如含胍盐（异硫氰酸胍或盐酸胍等）或表面活性剂的采样管，首选含胍盐的采样管。8仪器和试剂8.1仪器：杭州优思达生物技术有限公司UC0108、UC0102型核酸扩增检测分析仪。8.2试剂：杭州优思达生物技术有限公司UC0108、UC0102型核酸扩增检测分析仪配套试剂：呼吸道合胞病毒核酸检测试剂盒。8.2.1试剂盒组成及成分见下表：试剂盒组成及主要成分序号组分名称规格主要成分1RSV-检测管1测试/管特异性引物和探针、脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、RNA聚合酶、逆转录酶2RSV-RNA提取液1mL/测试/管胍盐、磁珠3RSV-阳性对照1.2mL/管含靶标片段4RSV-阴性对照1.2mL/管不含靶标片段注：不同批号试剂盒中各组分不能互换混用。8.2.2试剂盒储存条件及有效期：2℃～8℃保存，有效期为12个月。8.2.3试剂盒运输条件：本试剂盒正面朝上放入AB瓦楞纸箱(外包装箱)中，在-25℃～37℃运输7天不会影响产品性能。8.2.4试剂盒生产日期及失效日期：见标签。8.2.5试剂盒适用仪器型号：UC0102、UC0108。9环境和安全控制咽拭子标本中存在潜在的生物危害因子，个人防护和废弃物处理详见《生物安全手册》（编号：XXSZXYY-SWAQ-AQSC06）。10操作步骤步骤操作图示（参照肺炎支原体核酸检测）1试剂准备：从试剂盒中取出对应样本数量的RNA提取液和检测管，震荡器充分混匀RNA提取液3秒～5秒后，将管内液体直接倒入检测管中。2加样：轻轻混匀拭子样本溶液后，吸取500μL加入检测管，并旋紧管盖。轻摇检测管混匀样本与磁珠提取液，上机检测。3仪器准备：打开仪器右侧电源开关，等待仪器自检结束后输入账号和密码，进入检测界面。4UC0108型核酸扩增检测分析仪共有8个检测模块，可点击显示屏任一模块位置，出现深蓝背景即为选中模块（如右图选中模块2）。5点击“扫描检测管二维码”处，再将检测管盖子上的二维码对准扫描口，识别成功后，屏幕显示“RSV000”字样。6再将检测管盖子上的二维码对准扫描口；或点击屏幕上“扫描样本条形码”按钮，输入样本编号。7按压并打开模块2盖子，插入检测管（放入前左右摇晃检测管，使磁珠和样本充分混匀），塑料环朝左放置，最后按压合上模块2盖子。8点击“开始检测”按钮，模块2显示倒计时间。程序结束，仪器自动显示检测结果。11检验结果及其解释（见下表）检验结果解释阳性RSV0Ol和/或RSV00r检测结果为阳性，样本中检测到RSV病毒RNA。注:若病原体结果为阳性时，对应内标检测结果不做要求。阴性RSV0Ol和/或RSV00r检测结果为阴性，且内标ICl和/或ICr为阳性，样本中未检测到RSV病毒RNA。无效RSV0Ol和/或RSV00r检测结果为阴性，且内标ICl和/或ICr为阴性，不确定样本中是否存在RSV病毒RNA。无结果检测系统没有收集到足够的数据。11.1阳性判断值：检测程序运行结束后，仪器自动计算得到Tt值，并按照如下原则进行阴/阳性判断：（1）扩增区FAM荧光报告RSV检测结果(RSV0Ol/RSV00r)；CY5荧光报告IC检测结果（ICI/ICr)；（2）当RSV的Tt为N/A时，RSV为阴性；当RSV的Tt≤24时，RSV为阳性；（3）当IC的Tt为N/A时，IC为阴性；当IC的Tt≤24时，IC为阳性。11.2需要重新检测的情况：如果出现以下任一情况，则使用新的RSV-检测管重新进行检测。（1）无效。例如：采样或样本处理不当、交叉引物恒温扩增试剂（CPA）被抑制或试剂盒失效。无效报告，需复检至该扩增区结果为“阳性”或“阴性”。如同一扩增区复检结果阴阳性不同，可能是由于样本中核酸浓度处于检测限附近，报告为阳性。（2）无结果。例如：实验操作者中途终止了测试。（3）外部质控（RSV-检测管阳性对照和RSV-检测管阴性对照）检验结果异常。例如：RSV-检测管阴性对照检测结果为阳性，可能存在污染。12质量控制12.1内部质控：本试剂盒的内部质控即内标系统用以监测采样、提取、纯化或扩增反应、适用仪器是否异常。RSV检验结果为阳性时，对内标检测结果不做要求；RSV检验结果为阴性时，内标检测结果须为阳性，否则检验结果为无效。12.2外部质控：试剂盒中的RSV-检测管阳性对照用于排除扩增试剂失效或适用仪器故障；RSV-检测管阴性对照用于监测试剂或环境是否被污染。RSV-检测管阳性对照的检验结果应为阳性，RSV-检测管阴性对照的检验结果应为阴性。12.3第三方质控：从冷藏冰箱中取出质控品，室温放置10min～15min后按常规样本检测。12.4质控规则：阳性质控品检测结果不能为阴性，阴性质控品检测结果不能为阳性。12.5失控时应采取的措施：失控时应停止签发检验报告，同时从检查质控品、试剂、仪器等原因入手，查找并记录失控原因；失控纠正后再行患者标本检测。13干扰和交叉反应分析13.1有关假阴性结果的可能性分析13.1.1不合理的样本采集、转运及处理、样本中呼吸道合胞病毒含量过低均有可能导致假阴性结果；13.1.2未经验证的其他干扰或扩增抑制因子，可能会导致假阴性结果；13.2有关假阳性结果的可能性分析13.2.1如果样本在运输、处理过程中发生交叉污染，则可能导致假阳性结果；13.2.2实验环境有扩增产物等气溶胶污染，则可能导致假阳性结果；13.2.3实验过程中使用的耗材、设备等受污染，则可能导致假阳性结果。14参考区间阴性15临床解释15.1本试剂盒的检验结果仅供临床参考，对患者的临床诊治应结合其症状、体征、病史、其他实验室检查及治疗效果等情况综合考虑。15.2阳性结果：表明患者感染呼吸道合胞病毒；阳性结果不能排除监测指标外病原体感染情况。15.3阴性结果：不能排除呼吸道合胞病毒感染，也不应作为治疗或制定患者其他管理决策的唯一依据。16检验结果报告方式序号项目结果参考区间灵敏度检测方法1呼吸道合胞病毒核酸检测阳性（阴性）阴性100拷贝/mL恒温扩增-实时荧光法17参考文献17.1儿童肺炎支原体肺炎诊疗指南（2025年版）。17.2尚红，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第4版.北京：人民卫生出版社，2015.17.3李金明.实时荧光PCR技术[M].第2版.北京：科学出版社，2016.XX中心医院文件编号：XXSZXYY-PCRCZCX（2-0）第二部分仪器与项目标准操作程序版本：第2版，第0次修改十五登革病毒核酸检测标准操作程序生效日期：2026-08-01十五登革病毒核酸检测标准操作程序1承担部门XX中心医院检验科PCR组。2检验目的用于辅助诊断是否感染登革病毒。3原理和方法以登革病毒基因编码区的高度保守区为靶区域，设计特异性引物和荧光探针，利用试剂盒指定的核酸提取试剂对临床样本进行核酸提取，再将提取后的核酸加入PCR反应体系中，通过荧光定量PCR仪对登革病毒RNA进行一步法RT-PCR扩增，随着RNA的富集，荧光强度逐渐增强，通过荧光定量PCR仪检测荧光信号，绘制实时扩增曲线，根据域循环值（Ct值）实现对登革病毒RNA的定性检测。本试剂盒带有内标物质，可以监控整个核酸提取和核酸扩增过程，减少假阴性结果的出现。4性能特征4.1本试剂盒性能特征详见对应批次的试剂盒说明书。4.2最低检出限:500copies/mL。5标本类型5.1血清样本。5.2样本采集：用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2mL，注入无菌的干燥试管，室温（22～25℃）放置30～60min，血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500g离心5min；吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。5.3样本储存：所采集的标本可立即用于测试，或保存于-20℃待测，保存期为6个月，标本应避免反复冻融。标本运送采用0℃冰壶或加冰并以泡沫箱密封，低温运输时间不应超过8h，长途运输建议采用干冰以保持低温。6患者准备无需特殊准备。静脉采血前应避免剧烈运动，保持安静状态。7容器和添加剂类型使用一次性无菌注射器及无菌干燥玻璃管，或使用无菌真空采血管（不含抗凝剂）采集静脉血。禁止使用含抗凝剂的采血管。8仪器和试剂8.1仪器：ABI7500，Gentier96E。8.2试剂：本试剂盒为登革病毒核酸检测试剂盒，货号DA0310~DA0312，方法学为荧光探针PCR，用于对人血清样本中的登革病毒RNA进行定性检测。9环境和安全控制血清标本中存在潜在的生物危害因子，个人防护和废弃物处理详见《生物安全手册》（编号：XXSZXYY-SWAQ-AQSC06）。所有临床样本及质控品均应按具有传染性的物质进行处理，操作应在生物安全柜中进行。10操作步骤10.1PCR试剂准备（试剂准备区）取出登革病毒PCR反应液A、登革病毒PCR反应液B，室温融化后振荡混匀，8,000rpm离心数秒后使用。按待测样品数（样品数=临床样本数+阴性质控品+登革病毒临界阳性质控品+登革病毒阳性质控品），取用相应量的PCR反应液A和反应液B，即PCR反应液A17µL/份+PCR反应液B3µL/份，充分混匀后短时离心，按20µL/管分装至仪器适用的PCR反应空管中，备用。10.2核酸提取（样本制备区）10.2.1试剂盒没有配备核酸提取试剂，推荐采用广州达安基因股份有限公司生产的核酸提取试剂盒，具体操作步骤请按照试剂盒说明书指引进行。10.2.2试剂盒中的内标溶液参与提取过程，所以须配套提取试剂使用。待测样本与阴性质控品、登革病毒阳性质控品、登革病毒临界阳性质控品进行同步核酸提取处理，用于对环境进行监控和PCR检测试剂的质控。10.2.3取处理后的待测样本、阴性质控品、登革病毒阳性质控品、登革病毒临界阳性质控品各5µL分别加入PCR反应管中，盖紧管盖，8,000rpm离心数秒后转移至扩增检测区。10.3PCR扩增（扩增区）将各反应管放入PCR仪，根据仪器设置反应条件进行扩增（不同型号荧光定量PCR仪器的操作步骤详见说明书或仪器标准操作流程）。ABI7500/Gentier96E仪器PCR扩增反应条件编号循环数温度（℃）恒温时间荧光采集反应体系115000:15:00/25µL219500:15:00/3459400:00:15/5500:00:45√11检验结果及其解释11.1结果保存反应结束后，荧光定量PCR仪器软件系统自动保存结果。用户也可以分析图像后，根据实际情况自行调整Baseline的Start值、End值以及Threshold值，使荧光曲线尽量平滑11.2质量控制观察阴性质控品和阳性质控品的实验结果，需要在同一实验中满足下表中的要求再进行结果判读，否则实验视为无效。质量控制表编号样品FAM通道VIC通道（内标）1阴性质控品无扩增曲线或无Ct值Ct值≤432DV阳性质控品有扩增曲线且Ct值≤28有或无扩增曲线3DV临界阳性质控品有扩增曲线且Ct值≤36有或无扩增曲线11.3结果判读在满足11.2质量控制要求的前提下，按照下表进行结果判读（本试剂盒的阳性判断值为Ct=43。FAM检测通道为阳性时，由于体系的竞争关系，VIC通道结果可能为阴性）。结果判读表编号FAM通道VIC通道（内标）结果1有扩增曲线且Ct值≥43有扩增曲线阴性2无扩增曲线有扩增曲线阴性3有扩增曲线且Ct值<43有或无扩增曲线样品为登革病毒阳性11.4阳性判断值本试剂盒的阳性判断值为Ct=43。FAM检测通道Ct值<43为阳性，Ct值≥43或无扩增曲线为阴性。11.5需要重新检测的情况如果出现以下情况，需重新进行检测：（1）质控品检测结果不符合11.2质量控制要求时；（2）检测系统出现故障或操作失误时；（3）结果处于临界值附近，建议重新采样检测。12质量控制12.1内部质控：本试剂盒带有内标物质（VIC通道），可以监控整个核酸提取和核酸扩增过程。当FAM通道检测结果为阴性时，VIC通道内标须为阳性（Ct值≤43），否则检验结果为无效，需重新检测。12.2外部质控：每批实验需同时检测阴性质控品、阳性质控品。阴性质控品FAM通道应无扩增曲线或无Ct值，VIC通道应有扩增曲线且Ct值≤43；DV阳性质控品FAM通道应有扩增曲线且Ct值≤35。12.3质控规则：阳性质控品检测结果不能为阴性，阴性质控品检测结果不能为阳性。12.4失控时应采取的措施：失控时应停止签发检验报告，同时从检查质控品、试剂、仪器等原因入手，查找并记录失控原因；失控纠正后再行患者标本检测。13干和交叉反应分析13.1有关假阴性结果的可能性分析13.1.1不合理的样本采集、转运及处理、样本中登革病毒含量过低均有可能导致假阴性结果；13.1.2未经验证的其他干扰或扩增抑制因子，可能会导致假阴性结果；13.1.3核酸提取效率低下可能导致假阴性结果。13.2

有关假阳性结果的可能性分析13.2.1如果样本在运输、处理过程中发生交叉污染，则可能导致假阳性结果；13.2.2实验环境有扩增产物等气溶胶污染，则可能导致假阳性结果；13.2.3实验过程中使用的耗材、设备等受污染，则可能导致假阳性结果。14参考区间阴性15临床解释15.1检验结果仅供临床参考，对患者的临床诊治应结合其症状、体征、病史、其他实验室检查及治疗效果等情况综合考虑。15.2阳性结果：表明患者可能存在登革病毒感染。登革热主要表现为发热，肌肉痛和骨、关节酸痛，伴有皮疹或轻微的皮肤出血点；登革出血热和登革休克综合征病情较重，伴有明显出血症状和循环衰竭等。15.3阴性结果：不能排除登革病毒感染，也不应作为治疗或制定其他患者管理决策的唯一依据。阴性结果可能因样本中病毒载量低于检测限所致。16检验结果报告方式序号项目结果参考区间检测方法1登革病毒核酸检测阳性（或阴性）阴性荧光探针PCR法17参考文献17.1登革病毒核酸检测试剂盒说明书（广州达安基因股份有限公司）。17.2尚红，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第4版.北京：人民卫生出版社，2015.17.3李金明.实时荧光PCR技术[M].第2版.北京：科学出版社，2016.17.4登革热诊疗指南（相关版本）。XX中心医院文件编号：XXSZXYY-PCRCZCX（2-0）第二部分仪器与项目标准操作程序版本：第2版，第0次修改十六基孔肯雅病毒核酸检测标准操作程序生效日期：2026-08-01十六基孔肯雅病毒核酸检测标准操作程序1承担部门XX中心医院检验科PCR组2检验目的用于体外定性检测基孔肯雅热病疑似病例、其他需要进行基孔肯雅热感染诊断或鉴别诊断者的血清样本中基孔肯雅热病毒核酸。有关“疑似病例”等人群的定义参照《基孔肯雅热防控技术指南》等文件执行。3原理和方法本试剂盒采用实时荧光PCR技术，选取基孔肯雅病毒基因编码区的高度保守区为靶区域，设计特异性引物及荧光探针，进行PCR扩增，用于标本中基孔肯雅病毒RNA的定性检测。另外，本试剂盒带有内标物质，用于对核酸提取过程及PCR扩增过程的监控，可减少假阴性结果的出现。本试剂盒同时添加了防污染组分（尿嘧啶糖基化酶，即UDG酶），其作用机理是选择性水解断裂含有dU的双链或者单链DNA中的尿嘧啶糖苷键，形成的有缺失碱基的DNA链，在碱性介质以及高温下会进一步水解断裂，从而被消除。4性能特征4.1本试剂盒性能特征详见对应批次的试剂盒说明书。4.2最低检出限:200copies/mL。5标本类型5.1血清样本。5.2样本采集：用不含抗凝剂的采血管采集受检者3～5mL静脉血，室温（10℃～30℃）放置30～60分钟，血样本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500rpm离心15分钟，上层即为血清。5.3样本储存：所采集的样本应尽快进行检测，如不立即检测可置于2～8℃保存48小时；样本应避免反复冻融，冻融次数不超过5次。经提取后的样本核酸应尽快检测，应避免反复冻融，冻融次数不超过5次。6患者准备无需特殊准备。静脉采血前应避免剧烈运动，保持安静状态。7容器和添加剂类型使用不含抗凝剂的采血管采集静脉血。禁止使用含抗凝剂的采血管。8仪器和试剂8.1仪器：ABI7500，Gentier96E。8.2试剂：本试剂盒为基孔肯雅热病毒核酸检测试剂盒，方法学为实时荧光PCR，用于对人血清样本中的基孔肯雅病毒RNA进行定性检测。9环境和安全控制血清标本中存在潜在的生物危害因子，个人防护和废弃物处理详见《生物安全手册》（编号：XXSZXYY-SWAQ-AQSC06）。所有临床样本及质控品均应按具有传染性的物质进行处理，操作应在生物安全柜中进行。开展基孔肯雅病毒核酸检测，应符合《基孔肯雅热防控技术指南》等的要求，做好生物安全工作。10操作步骤10.1PCR试剂准备（试剂准备区）10.1.1从试剂盒中取出CHIKVPCR反应液A、CHIKVPCR反应液B，室温融化后振荡混匀，瞬时离心数秒后使用。10.1.2按待测样品数（样品数=临床样本数+阴性质控品+CHIKV阳性质控品），取用相应量的PCR反应液A和反应液B，即PCR反应液A17µL/份+PCR反应液B3µL/份，充分混匀后短时离心，按20µL/管分装至仪器适用的PCR反应空管中，备用。10.2.1核酸提取（样本制备区）10.2取200µL样本，采用达安公司生产的核酸提取或纯化试剂（粤穗械备20170583号）进行核酸提取，洗脱体积100µL。请按照试剂盒说明书进行操作。本试剂盒中的CHIKV阴性质控品和CHIKV阳性质控品均参与提取，用于对环境进行监控和PCR检测试剂的质控。取出磁珠提取板，20µL蛋白酶K，200µL样本依次加到提取板第1、7列，上机提取，提取完成后，核酸在第6、12列。10.3加样（样本制备区）取提取后的待测样本、阴性质控品、阳性质控品各5µL分别加入PCR反应管中，盖紧管盖，8,000rpm离心数秒后转移至扩增检测区。10.4PCR扩增将各反应管放入PCR仪，按照下表设置反应条件进行扩增（不同型号荧光定量PCR仪器的操作步骤详见说明书或仪器标准操作流程）。ABI7500仪器PCR扩增反应条件编号循环数温度（℃）恒温时间采集荧光反应体系115000:02:00/30µL219500:02:00/3429500:00:05/6000:00:30√11检验结果及其解释11.1结果保存反应结束后，荧光定量PCR仪器软件系统自动保存结果。用户也可以分析图像后，根据实际情况自行调整Baseline的Start值、End值以及Threshold值（阈值），使荧光曲线尽量平滑（Start值可以在3～15、End值可设在5～20，在Log图谱窗口设置Threshold的Value值，使阈值线位于扩增曲线指数期，调整阴性质控品的扩增曲线平直或低于阈值线）。点击Analysis自动获得分析结果（具体操作详见对应荧光定量PCR仪器SOP）。11.2质量控制观察阴性质控品、阳性质控品的实验结果，需要在同一实验中满足下表中的要求再进行结果判读，否则实验视为无效。质量控制表编号样品FAM通道VIC通道1阴性质控品无扩增曲线有扩增曲线，且Ct值≤352阳性质控品有扩增曲线，且Ct值≤35有扩增曲线，且Ct值≤3511.3结果判读在满足11.2质量控制要求的前提下，按照下表进行结果判读（本试剂盒的阳性判断值为Ct=40）。结果判读表编号FAM通道VIC通道（内标）结果1Ct值≤40有或无扩增曲线基孔肯雅阳性2Ct值＞40或无Ct值Ct值≤36基孔肯雅阴性3Ct值＞40或无Ct值Ct值＞36或无扩增曲线建议重新取样进行检测11.4阳性判断值本试剂盒的阳性判断值为Ct=40。FAM检测通道Ct值≤40为阳性，Ct值＞40或无扩增曲线为阴性。11.5要重新检测的情况：

（1）质控品检测结果不符合11.2质量控制要求时；

（2）结果判读为“建议重新取样进行检测”时；

（3）检测系统出现故障或操作失误时。12质量控制12.1内部质控：本试剂盒带有内标物质（VIC通道），用于对核酸提取过程及PCR扩增过程的监控。当FAM通道检测结果为阴性时，VIC通道内标须为阳性（Ct值≤36），否则结果为“建议重新取样进行检测”；当FAM通道检测结果为阳性时，对内标检测结果不做要求。12.2外部质控：每批实验需同时检测阴性质控品和阳性质控品。阴性质控品FAM通道应无扩增曲线，VIC通道应有扩增曲线且Ct值≤35；阳性质控品FAM通道和VIC通道均应有扩增曲线且Ct值≤35。12.3第三方质控：从冷藏冰箱中取出质控品，室温放置10min～15min后按常规样本检测。12.4质控规则：阳性质控品检测结果不能为阴性，阴性质控品检测结果不能为阳性。12.5失控时应采取的措施：失控时应停止签发检验报告，同时从检查质控品、试剂、仪器等原因入手，查找并记录失控原因；失控纠正后再行患者标本检测。13干扰和交叉反应分析13.1有关假阴性结果的可能性分析

13.1.1不合理的样本采集、转运及处理、样本中基孔肯雅病毒含量过低均有可能导致假阴性结果；

13.1.2未经验证的其他干扰或扩增抑制因子，可能会导致假阴性结果；

13.1.3核酸提取效率低下可能导致假阴性结果。13.2有关假阳性结果的可能性分析

13.2.1如果样本在运输、处理过程中发生交叉污染，则可能导致假阳性结果；

13.2.2实验环境有扩增产物等气溶胶污染，则可能导致假阳性结果；

13.2.3实验过程中使用的耗材、设备等受污染，则可能导致假阳性结果。14参考区间阴性15临床解释15.1本检验结果仅供临床参考，对患者的临床诊治应结合其症状、体征、病史、其他实验室检查及治疗效果等情况综合考虑。

15.2阳性结果：表明患者可能存在基孔肯雅病毒感染。基孔肯雅热主要表现为发热、皮疹、关节痛等症状。

15.3阴性结果：不能排除基孔肯雅病毒感染，也不应作为治疗或制定其他患者管理决策的唯一依据。阴性结果可能因样本中病毒载量低于检测限所致。16检验结果报告方式序号项目结果参考区间检测方法1基孔肯雅病毒核酸检测阳性（或阴性）阴性实时荧光PCR法17参考文献17.1基孔肯雅热病毒核酸检测试剂盒说明书。

17.2《基孔肯雅热防控技术指南》。

17.3尚红，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第4版.北京：人民卫生出版社，2015.

17.4李金明.实时荧光PCR技术[M].第2版.北京：科学出版社，2016.XX中心医院文件编号：XXSZXYY-PCRCZCX（2-0）第二部分仪器与项目标准操作程序版本：第2版，第0次修改十七布尼亚病毒核酸检测标准操作程序（达安）生效日期：2026-08-01十七布尼亚病毒核酸检测标准操作程序1承担部门XX中心医院检验科PCR组。2检验目的用于定量检测血清标本中发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒（SFTSV）RNA，为SFTSV感染的诊断和治疗提供临床参考。本检测不能单独作为确诊或排除病例的根据，建议结合患者临床表现和其他实验室检测对病情进行综合分析。3原理和方法针对SFTSV基因组高度保守区域设计特异性引物和荧光探针，提取核酸后，以试剂盒中提供的PCR检测试剂配制成PCR反应管，再将提取后的核酸加入PCR反应管中，通过荧光定量PCR仪对SFTSVRNA进行一步法RT-PCR扩增，随着SFTSVRNA的富集，荧光强度逐渐增强，通过荧光定量PCR仪检测荧光信号，绘制实时扩增曲线，根据域循环值（Ct值）实现对SFTSVRNA的定量检测。另外，本试剂盒还带有内标物质，用于对核酸提取整个过程进行监控，减少假阴性结果的出现。4性能特征4.1本试剂盒（达安布尼亚）性能特征详见对应批次的试剂盒说明书。4.2最低检出限:500copies/mL。5标本类型5.1血清样本。5.2样本采集：用无菌真空管，采集患者急性期（发病2周内）和恢复期（发病4周左右）非抗凝血5mL，及时分离血清，分装保存于带螺旋盖、内有垫圈的冻存管内，做好标记。采集病人标本时可进行一般性防护（穿戴口罩、手套和长袖工作服）。5.3样本储存：处理后的样本可立即用于测试，也可标记清楚后保存于-70℃冰箱（一周内可保存在-20℃冰箱）；标本运送应以干冰保持低温环境。同时注意生物安全规范和遵照有关传染性标本的运送法规。6患者准备无需特殊准备。静脉采血前应避免剧烈运动，保持安静状态。7容器和添加剂类型使用无菌真空管（不含抗凝剂）采集静脉血。禁止使用含抗凝剂的采血管。8仪器和试剂8.1仪器：ABI7500，Gentier96E。8.2试剂：达安基基发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒核酸检测试剂盒，货号DA0340，方法学为荧光探针PCR，适用于定量检测血清标本中发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒（SFTSV）RNA。9环境和安全控制血清标本中存在潜在的生物危害因子，个人防护和废弃物处理详见《生物安全手册》（编号：XXSZXYY-SWAQ-AQSC06）。所有临床样本及质控品均应按具有传染性的物质进行处理，操作应在生物安全柜中进行。10操作步骤10.1PCR试剂准备（试剂准备区）按比例（SFTSVPCR反应液A17µL/人份+SFTSVPCR反应液B3µL/人份）取相应量的PCR反应液A和PCR反应液B，充分混匀后按20µL/管分装至单个PCR反应管中，备用。10.2核酸提取（样本制备区）10.2.1样本处理和核酸提取可采用广州达安基因股份有限公司生产的核酸提取或纯化试剂（推荐产品备案号：粤穗械备20170583号），本试剂盒中的内标溶液参与提取过程，若提取试剂盒中无说明内标的使用方法，则可按照样本体积：内标溶液体积=50:1的比例在样本中加入内标溶液后进行核酸提取。具体操作：先加4µL内标溶液，再加20µL蛋白酶K，200µL样本到提取板的第1/7列，再上提取仪提取。10.2.2取待测样本、阴性质控品、SFTSV弱阳性质控品【Ct：30-35】分别加入SFTSV反应管中，盖紧管盖，8,000rpm离心数秒后转移至仪器样品槽中。10.3PCR扩增（扩增区）将各反应管放入PCR仪，按照下表设置反应条件进行扩增（不同型号荧光定量PCR仪器的操作步骤详见说明书或仪器标准操作流程）。ABI7500，Gentier96E扩增反应条件编号循环数温度（℃）恒温时间收集荧光反应体系115000:15:00/25µL219500:15:00/3459400:00:15/5500:00:45√11检验结果及其解释11.1结果保存反应结束后，荧光定量PCR仪器软件系统保存结果。用户也可以分析图像后，根据实际情况自行调整Baseline的Start值、End值以及Threshold值，使荧光曲线尽量平滑（Start值可以在3～15、End值可设在5～20）。点击Analysis自动获得分析结果，记录未知样本数值（具体操作详见对应荧光定量PCR仪器SOP）。11.2质量控制观察阴性质控品和阳性质控品的实验结果，需要在同一实验中满足下表中的要求再进行结果判读，否则实验视为无效。质量控制表编号样品FAM通道VIC通道（内标）1阴性质控品扩增曲线无对数增长期扩增曲线有对数增长期2SFTSV临界阳性质控品扩增曲线有明显对数增长期，呈S型曲线且定值范围在1.0×10¹～1.0×10³TCID50/mL扩增曲线有对数增长期3SFTSV强阳性质控品扩增曲线有明显对数增长期，呈S型曲线且定值范围在1.0×10⁴～4.0×10⁵TCID50/mL扩增曲线有对数增长期11.3结果判读在满足11.2质量控制要求的前提下，进行结果判读。本试剂盒的阳性判断值为Ct=35。FAM检测通道为阳性时，由于体系的竞争关系，VIC通道结果可能为阴性。11.3.1阴性判读：如果检测样品的反应体系扩增曲线在FAM检测通道无对数增长期或Ct值＞35，且在VIC检测通道有对数增长期，可判样品为发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒浓度低于检测灵敏度。11.3.2阳性判读：如果FAM荧光信号增幅明显，扩增曲线有明显对数增长期，呈典型S型曲线，且Ct值≤35，则为阳性。11.4需要重新检测的情况如果出现以下情况，需重新进行检测：（1）质控品检测结果不符合11.2质量控制要求时；（2）检测系统出现故障或操作失误时；（3）结果处于临界值附近时。12质量控制12.1内部质控：本试剂盒带有内标物质（VIC通道），用于对核酸提取整个过程进行监控。当FAM通道检测结果为阴性时，VIC通道内标须为阳性（有对数增长期），否则检验结果为无效；当FAM通道检测结果为阳性时，对内标检测结果不做要求。12.2外部质控：每批实验需同时检测阴性质控品、弱阳性质控品。阴性质控品FAM通道应无对数增长期，VIC通道应有对数增长期；弱阳性质控品有明显对数增长期且呈S型曲线，定值范围分别符合相应要求，VIC通道应有对数增长期。12.3第三方质控：从冷藏冰箱中取出质控品，室温放置10min～15min后按常规样本检测。12.4质控规则：阳性质控品检测结果不能为阴性，阴性质控品检测结果不能为阳性。12.5失控时应采取的措施：失控时应停止签发检验报告，同时从检查质控品、试剂、仪器等原因入手，查找并记录失控原因；失控纠正后再行患者标本检测。13干扰和交叉反应分析13.1有关假阴性结果的可能性分析13.1.1不合理的样本采集、转运及处理、样本中发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒含量过低均有可能导致假阴性结果；13.1.2未经验证的其他干扰或扩增抑制因子，可能会导致假阴性结果；13.1.3核酸提取效率低下可能导致假阴性结果。13.2有关假阳性结果的可能性分析13.2.1如果样本在运输、处理过程中发生交叉污染，则可能导致假阳性结果；13.2.2实验环境有扩增产物等气溶胶污染，则可能导致假阳性结果；13.2.3实验过程中使用的耗材、设备等受污染，则可能导致假阳性结果。14参考区间阴性15临床解释15.1本试剂盒的检验结果仅供临床参考，对患者的临床诊治应结合其症状、体征、病史、其他实验室检查及治疗效果等情况综合考虑。不能单独作为确诊或排除病例的根据。15.2阳性结果：表明患者可能存在发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒感染。SFTSV感染临床潜伏期约为1～2周，感染者急性起病，主要临床表现为发热，体温多在38℃以上，重者持续高热，可达40℃以上，伴乏力、明显纳差、恶心、呕吐、腹泻等消化道症状，可有单侧浅表淋巴结肿大。临床上常见血小板和白细胞减少，大多数患者很快出现多器官功能受损。15.3阴性结果：不能排除发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒感染，也不应作为治疗或制定其他患者管理决策的唯一依据。阴性结果可能因样本中病毒载量低于检测限所致。16检验结果报告方式序号项目结果参考区间检测方法1发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒核酸检测阳性（或阴性）阴性荧光探针PCR法17参考文献17.1发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒核酸检测试剂盒说明书（广州达安基因股份有限公司）。17.2尚红，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第4版.北京：人民卫生出版社，2015.17.3李金明.实时荧光PCR技术[M].第2版.北京：科学出版社，2016.17.4发热伴血小板减少综合征防治指南（相关版本）。XX中心医院文件编号：XXSZXYY-PCRCZCX（2-0）第二部分仪器与项目标准操作程序版本：第2版，第0次修改十八大别班达核酸检测标准操作程序生效日期：2026-08-01十八大别班达病毒核酸检测标准操作程序1承担部门XX中心医院检验科PCR组。2检验目的用于对人血清样本中的大别班达病毒（DabieBandavirus，DBV）RNA进行定性或定量检测，为发热伴血小板减少综合征（SFTS）的诊断和治疗提供临床参考。不得作为临床诊断的唯一标准。建议结合患者临床表现和其他实验室检测对病情进行综合分析。3原理和方法采用实时荧光RT-PCR技术，以大别班达病毒基因编码区的高度保守区为靶区域，设计特异性引物和荧光探针，利用试剂盒指定的核酸提取试剂对临床样本进行核酸提取，再将提取后的核酸加入PCR反应体系中，通过荧光定量PCR仪对大别班达病毒RNA进行一步法RT-PCR扩增。随着RNA的富集，荧光强度逐渐增强，通过荧光定量PCR仪检测荧光信号，绘制实时扩增曲线，根据域循环值（Ct值）实现对DBVRNA的定性或定量检测。4性能特征4.1本试剂盒性