临床微生物SOP真菌标本标准操作规程

SOP标准操作规程临床微生物实验室真菌标本标准操作规程采集·处理·镜检·培养·鉴定·质控汇报人检验科微生物室·2026年10月课程导览01标准与总则明确目的范围，锚定最新行业标准依据02标本采集规范分类型讲清部位、时机、采集量与送检要求03接收与处理交接核对、编号登记与标本拒收标准04镜检与培养直接镜检技术、培养基选择与培养条件05鉴定与药敏菌种鉴定路径与非培养检测方法06安全与质控生物安全防护与全过程质量控制标准与总则明确SOP目的、适用范围与最新标准依据01SOP目的与适用范围规范真菌检验全流程，保障结果准确与生物安全规范真菌标本采集、接收、处理、培养鉴定全流程，确保检验结果准确、可靠、及时目的与范围规范采集、接收、处理、培养鉴定全流程，确保检验结果准确、可靠、及时保障实验室生物安全痰尿粪脓液脑脊液血液拭子皮屑甲屑组织职责分工微生物室组长SOP制定、修订、培训与监督执行标本接收人员核对、登记、分类、编号与合格性判断检验技术人员前处理、涂片、接种、培养与初步观察生物安全员监督生物安全防护措施落实标准依据与最新动态以最新行业标准为纲，锚定操作依据核心编制依据5项WS/T497-2026《侵袭性真菌病实验诊断标准》WS/T640-2026《临床微生物学检验标本的采集和转运标准》WS/T805-2022《临床微生物检验基本技术标准》WS/T442《临床实验室生物安全指南》CLSIM54《临床标本中真菌检测的原理与程序》标本采集规范标本质量决定检出成败分类型讲清采集部位、时机、量与送检要求02标本采集总原则标本采集与运送是培养成功最关键的环节把握

采集时机、严守无菌原则、规范送检保存，是提高真菌检出率的核心01第一步采集时机尽可能在抗真菌药物使用前采集真菌血症宜在寒战或发热初起时采集深部真菌病建议同步采集多部位标本以提高检出率02第二步无菌原则深部标本严格无菌操作，避免皮肤定植菌污染组织标本置于无菌平皿中立即送检采集前用75%酒精消毒取材部位，待挥发后再取材03第三步送检与保存采集后立即送检，室温暂存，勿放冰箱脑脊液等无菌体液需立即送检，防止真菌死亡组织标本应在2小时内送检血液与脑脊液标本采集采血量与采集套数直接影响病原菌检出率正确采集送检，确保病原菌检出率与检验质量01标本类型血液标本成人每瓶采集8-10ml，每套含需氧瓶和厌氧瓶至少采集2套，且来自不同穿刺部位严禁仅采集单瓶需氧瓶皮肤消毒范围直径≥5cm，待消毒剂干燥后再穿刺02标本类型脑脊液标本无菌试管采集，真菌检测量需≥2ml采集后立即送检，避免病原体自溶离心沉淀后作墨汁涂片镜检和培养标本≥1ml时离心，1500g离心15分钟03标本类型骨髓标本用肝素化注射器或溶解离心管采集成人0.5-3ml送检皮肤毛发甲等标本采集取材到位是浅部真菌检出率的关键>取材到位是浅部真菌检出率的关键浅部标本皮肤：鳞屑性皮损用钝手术刀刮取至稍见点状出血；水疱用无菌注射器抽疱液。毛发：消毒镊子拔取折断、失去光泽、有白色菌鞘的异常病发，取

5-10根。甲屑：剪取靠近甲床的病变碎屑，或用指甲锉磨粉收集，不能及时送检时

4℃保存。其他标本尿液：早晨中段尿

10ml，离心取沉淀

1ml

作涂片及培养。痰液：晨起清水漱口后深咳留取，挑取黏液、脓血病理部分。分泌物：口腔、咽喉、外耳道、阴道、直肠粘膜标本置含

1-2ml

无菌蒸馏水试管送检。接收与处理把好标本入口第一关交接核对、编号登记与标本拒收标准03标本接收与信息核对把好标本入口第一关标本接收是质量第一关，数量、信息、编号三项核对环环相扣，缺一不可。标本交接核对标本数量与送检单数量是否一致。检查三层包装完整性与生物危害标识是否清晰。双方在交接登记本签字确认，记录交接时间。信息核对核对患者姓名、性别、年龄、住院号或门诊号。核对标本类型、采集部位、采集日期和时间。核对检验项目、临床诊断、抗菌药物使用情况。信息不全立即联系送检科室补充确认。编号与登记唯一编号规则：年份后两位+月份+日期+流水号，如。编号同步标注标本容器与申请单，确保一一对应。急诊标本加盖“急诊”标识。标本拒收标准及处理明确拒收边界，守住检验质量底线绝对拒收情形无唯一性标识或标识错误、模糊不清无法辨认标本类型与申请检验项目不符容器破损、严重泄漏或表面被大量污染使用非无菌容器采集无菌体液标本痰液标本鳞状上皮细胞数≥10个/低倍视野采集部位、转运容器及条件严重不符且无法补救相对拒收情形标本量不足但仍能完成部分检验项目转运超时但未超过2倍时限保存温度不符但微生物未完全死亡处理方式拒收标本及时通知临床并说明原因，记录拒收信息相对拒收经实验室负责人批准后检验，报告中注明问题及影响镜检与培养镜检快筛，培养确认直接镜检技术、培养基选择与培养条件04直接镜检技术快速初筛，30分钟

内完成形态学判断“标本经

KOH处理/直接涂片/离心沉淀

等不同路径制备后，按标准流程镜检。”标本处理皮肤、毛发、甲标本滴加

1–2滴10%–20%

氢氧化钾，微加热使组织溶解透明血液、脑脊液等液体标本直接涂片，自然干燥后甲醇固定痰液、尿液离心后取沉淀物涂片隐球菌感染用墨汁染色观察荚膜，组织标本可作PAS或六胺银染色镜检方法低倍镜（10×）先寻找菌丝、孢子等结构高倍镜（40×）确认形态、大小、数量、分隔情况见到典型菌丝、孢子或菌鞘为阳性，报告“真菌直接镜检阳性”镜检敏感性约

30%–50%，阴性不能排除感染，需结合培养或血清学氢氧化钾溶液定期更换，避免假阳性和假阴性结果真菌培养基选择选对培养基是分离成功的前提常用培养基沙氏葡萄糖琼脂（SDA）：最常用广谱培养基，酸性环境抑制细菌促进真菌生长。科玛嘉念珠菌显色培养基：快速区分念珠菌属。马铃薯葡萄糖琼脂：适于丝状真菌分离。脑心浸液琼脂：用于双相真菌培养。米粉吐温琼脂、察氏琼脂、咖啡酸琼脂等按需选用。选择性添加氯霉素：抑制革兰氏阴性菌。放线菌酮：抑制腐生真菌（对隐球菌无效）。甲屑分别接种含与不含放线菌酮的SDA平皿。培养基质控每批次37℃培养48小时无微生物生长方可使用。以白色念珠菌ATCC标准菌株验证合格性。培养条件与结果观察温度与时限决定菌落能否如期呈现温度与时限是菌落呈现的关键：选对培养条件，才能按预期观察结果。01培养策略温度条件与培养时限浅部真菌如皮肤癣菌采用

22-28℃

培养。深部真菌如白色念珠菌结合

37℃

血琼脂同步培养。脑脊液接种

2管SDA斜面，分别置

25℃

及

37℃

孵育。痰、粪标本置

37℃

培养

48小时。甲屑在

25-28℃

培养

3周。菌落通常

1-2周

内形成，每周检查至少

两次。结果报告液体标本

37℃

孵育

48小时

无生长可报告“无真菌生长”。观察菌落颜色、质地、高度、边缘形态及渗出物。长期保存可用矿物油覆盖法或冷冻干燥。鉴定与药敏从形态到分子精准鉴定菌种鉴定路径与非培养检测方法05菌种鉴定路径从形态学到质谱的鉴定升级🔬从形态学到质谱的鉴定升级——分酵母菌与丝状真菌两类，讲清鉴定方法升级路径酵母菌鉴定3步初步鉴定基于菌落形态、镜下形态、芽管形成试验首选方法推荐首选

MALDI-TOFMS

或自动化生化鉴定系统基因测序常用

ITS区、核糖体大亚基D1/D2区、IGS区丝状真菌与芽管试验4项鉴定依据菌落形态与生长特性，结合乳酸酚棉蓝染色或小培养镜检鉴定水平通常可鉴定到属，常见曲霉可鉴定到复合群MALDI-TOFMS对部分常见丝状真菌可鉴定到种水平芽管形成试验接种于人或动物血清，37℃孵育2-3小时；设阳性对照白念珠菌与阴性对照热带念珠菌非培养检测与药敏试验非培养技术弥补培养灵敏度不足非培养技术弥补培养灵敏度不足，血清学与分子检测实现快速精准诊断血清学检测3项G试验检测1,3-β-D葡聚糖，适用于侵袭性念珠菌、曲霉感染GM试验检测曲霉半乳甘露聚糖抗原，用于侵袭性曲霉病早期诊断隐球菌荚膜多糖抗原乳胶凝集试验隐球菌脑膜炎诊断金标准分子生物学检测2项PCR、宏基因组测序可检测难以培养的真菌耐药基因分析如烟曲霉CYP51A突变药敏试验2项耐药率较高菌株需进行药敏试验如光滑念珠菌、耳念珠菌等参照CLSI和EUCAST标准折点指导个体化治疗安全与质控安全为底，质控为魂生物安全防护与全过程质量控制06生物安全防护安全是操作的底线生物安全防护贯穿实验全程，标本分级、操作防护与废弃物处置三者缺一不可实验室要求2项Ⅱ级生物安全防护能力适用于具备该能力的实验室BSL-3疑似高致病性真菌如组织胞浆菌需在此操作个人防护3项N95口罩、护目镜及连体防护服按要求穿戴齐全生物安全柜处理孢子态真菌需在此进行密封离心管离心避免气溶胶泄漏废弃物处理2项121℃高压灭菌30分钟污染器材高压灭菌处理次氯酸钠浸泡后再焚烧培养皿经浸泡后焚烧，防止环境播散质量控制与持续改进质控贯穿检验全过程质控贯穿检验全过程，按分析前、中、后三阶段收束全课质控贯穿检验全过程，保障结果可靠与患者安全分析前质控3项标本采集管理规范标本采集、保存与运送条件标本适用性评估评估标本是否适于特定检验项目不合格标本处理拒收不合格标本并及时与临床沟通分析中质控3项培养基