CN119490950A 一种直接从ips诱导类器官的方法及应用 （昆明理工大学）

本发明公开一种直接从IPS诱导生成类器官基于人IPS直接快速生成目标类器官的方法，得一性好，RNA_seq结果表明类器官中出现血管相究疾病的发病机制和后续药物开发提供了重要2S3用预冷的浓度大于70%的基质胶将S2得到的细胞悬液定容为mTeSRPlus培养基和3.根据权利要求1所述的直接从IPS诱导类4.根据权利要求3所述的直接从IPS诱导类器官的方5.根据权利要求1所述的直接从IPS诱导类器6.根据权利要求5所述的直接从IPS诱导类器官的方法S13将类器官_基质胶悬液种板在37℃预热的培养板上，置于37℃培养箱孵育5min后，7.根据权利要求1_6任一权利要求所述的方法培养的类器官在相关疾病研究或药物开3条件下更加真实地模拟人类器官的复杂结构及功能,可用于开展对人生长发育过程和生养条件来模拟细胞在体内的微环境。3D支架给细胞的生长与细胞类别的自我组织及空等因子，IPS通过逐步分化形成DE，这是形成肺类器官的第一步。诱导形成前肠内胚层FGF4等因子，IPS进一步分化形成AFE。诱导形成肺前体细胞（LungProgenitor4专利公开号为CN117887654A公开了一种基于人多能干细胞的肺类器官构建方案方法及[0009]经检索，现有技术还未有公开无须分层诱导直接从IPS诱导类器官的方法的文献[1]TiwariSK,RanaTM.Generationof3Dlungorganoidsfromhumaninducedpluripotentstemcellsformodelingoflungdevelopmentandviralj.heliyon.2023.e19601.[2]CuiK,ChenT,ZhuY,ShiY,GuoY,QinJ.Engineeringplacenta_likeorganoidscontainingendogenousvascularcellsfromhuman_inducedpluripotentstemcells.BioengTranslMed.2022Sep23;8(1):e10390.DOI:10.1002/btm2.10390.vesselorganoidsfromhumanpluripotentstemcells[J].NatureProtocol,2019,5S3用预冷的浓度大于70%的基质胶将S2得到的细胞悬液定容为mTeSRPlus培养[0017]本发明还保护使用本发明方法培养的类器官在相关疾病研究或药物开发及评价本发明的类器官最大能长到400μm，说明本发明培养方法能自发诱导部分血管相关基因表6图8为本发明类器官冷冻复苏计数以及活率统计图；其中图8A为肺类器官细胞冷图9为肺类器官中MUC5AC表达的四参数拟合曲线图；其中X值是浓度，单位为ng/[0022]下面结合附图和具体实施例对本发明作进一三种类器官培养基为：1.模基生物气道类器官培养基HumanAirwayOrganoidKitPlus货号MA_0817H004LP；2.科珞捷人滋养层(绒毛)类器官分离培养试剂盒/培养基Human7的枪头取用；取含有5w个细胞的细胞悬液使用基质胶定容为50μL培养基和基质胶混合液，官为胎盘类器官时，胎盘类器官培养基为：人滋养层(绒毛)类器官分离培养试剂盒/培养Medium作比较。结果发现：自配制的血管类培养基较购买的STEMdiff™BloodVesselSTEMdiff™BloodVesselOrganoidMaturationMedium是专门用于扩增和培养成熟血8[0031]图4A显示了本发明培养的肺类器官中细胞核的分布和形态；图4B展示了肺类器官中Clara细胞的位置和分布，这对于研究肺类器官中特定细胞类型的发育和功能至关重[0032]图5A显示了胎盘类器官中细胞核的分布。图5B中显示了胎盘类器官中滋养层细层细胞上特异性表达的免疫调节分子。图5D展示胎盘类器官中不同细胞类型和结构的综[0033]图6A显示了血管类器官中细胞核的分布。图6B显示了血管类器官中存在CD31的周围细胞的一种标记物。图6D展示血管类器官中不同细胞类型和结构的综合分布。图6表℃预冷的PBS，于4℃孵育10min；300g离心3min；去上清，加入4℃预冷的类器官冻存液9bioGenousTMOrganoidCryopreservationMedium（SerumFree按需要的冻存数量来分本发明使用Elisa的方法鉴定类器官中特定蛋白的表达，来说明该类器官中特定过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色；用酶标仪在450nm波长处测OD值，官的基因表达更专注于母胎免疫平衡、激素调节和支持胎儿发育等功能。高表达基因如CRH和HLA_G突出了胎盘作为内分泌和利，目前的血管化类器官需要将分支肺类器官与血管祖细胞球混合来实现，不能自发诱导