高致病性真菌菌株保藏、转运、灭活与处置专家共识总结2026

高致病性真菌菌株保藏、转运、灭活与处置专家共识总结2026高致病性真菌包括皮炎芽生菌、粗球孢子菌、波萨达斯球孢子菌、荚膜组织胞浆菌、组织胞浆菌属其他致病种、巴西副球孢子菌及副球孢子菌属其他致病种，为《人间传染的病原微生物目录》中第二类病原微生物。所有涉及上述第二类病原微生物活菌保藏、复苏、产生气溶胶的培养与操作，以及灭活前的处置等高风险操作，均须在生物安全防护等级3级(biologicalsafetylevel3，BSL-3)实验室中进行。在本共识中，这些真菌统称为高致病性真菌。该类真菌在生物学分类上均属于双相真菌，即在环境温度下可呈菌丝相并产孢，在宿主体内或37℃培养时转化为酵母相。为便于表述，全文统一使用“高致病性真菌”，仅在强调形态转化特征及其带来的特殊生物安全风险时，使用“双相真菌”一词。在临床诊断实践中，此类感染常因临床表现缺乏特异性、流行病学暴露史不明确而发生延迟识别，其病原学诊断往往需要结合组织病理、真菌培养、血清学、质谱鉴定及分子检测等多种证据。其中，真菌培养和菌种复核不仅是诊断、鉴别诊断和质量控制的重要依据，也会产生阳性培养物、疑似分离株及后续复核材料等需要规范管理的感染性材料。近年来，随着临床对此类疾病认识的提高、高通量测序等诊断技术的推广应用，以及国内外交流的增加，我国高致病性真菌感染病例明显增多，对实验室菌株保藏、转运、灭活及退出等管理环节提出了迫切要求。高致病性真菌的生物安全风险并非仅限于活菌培养物，临床感染样本及受病原污染的环境样本、动物组织与实验废物亦构成重要暴露风险。上述真菌在环境相或丝状相培养时均可产生2~5μm的微小孢子，极易经气溶胶途径导致吸入暴露；其污染的材料可长期保持培养活性，环境存活周期较长，不宜按短期污染进行管控。加之富含有机物的厚层培养物或感染组织块热量及消毒剂穿透受限，灭活难度显著高于普通生物材料。这些产孢特性、环境存活能力及材料复杂性，决定了高致病性真菌菌株保藏、转运、灭活及退出等管理环节具有特殊性，难以直接套用现行通用性要求。我国现行法规与标准已对高致病性病原微生物的保藏、运输、实验室活动及医疗废物处置作出原则性规定，《人间传染的病原微生物目录》(2023版)《病原微生物实验室生物安全管理条例》《可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样本运输管理规定》《医疗废物管理条例》等构成了基本管理框架。然而，此类原则性规定尚未针对高致病性真菌的产孢特性、环境存活能力及材料复杂性作出细化，相关机构在材料分区、容器管理、转运包装、灭活验证、泄漏处置及菌株退出管理等环节缺乏具体实施方案。因此，本共识聚焦菌株保藏、转运、灭活及退出等管理环节，对上述关键环节提出操作性技术建议，以填补真菌专属管理细则的空白。本共识适用于依法具备相应资质并在高致病性真菌病原学诊断、菌种复核、菌株保藏、复苏、领用、院内转运、跨单位运输、灭活及废物处置等环节中接触相关活菌株或感染性材料的实验室或保藏平台。一、方法学1．共识发起与组织本共识由中华医学会皮肤性病学分会真菌学组牵头，联合真菌学、感染病学、临床微生物学、医院感染管理、疾病预防控制、病原微生物实验室生物安全和重症医学等领域专家共同制定。编写组负责确定共识范围，检索法规、标准和文献，起草推荐意见初稿，组织专家咨询并完成统稿。2．文献检索与证据收集编写组检索国内外法规、技术标准、官方指南和学术文献。中文资料包括中华人民共和国国家卫生健康委员会、中华人民共和国生态环境部、中国国家标准化管理委员会公布的法律法规、国家文件及标准文件，以及中国知网、万方数据库等文献数据库；检索词包括“高致病性真菌”“烈性真菌”“菌株保藏”“病原微生物运输”“生物安全”“灭活”“医疗废物”“职业暴露”等。英文资料包括PubMed、WebofScience和各国官方生物安全文件；检索词包括“dimorphicfungi”“Histoplasma”“Coccidioides”“Blastomyces”“Paracoccidioides”“strainpreservation”“transport”“inactivation”“decontamination”“biosafety”“BSL-3”“riskgroup3fungi”等。重点参考文件包括《人间传染的病原微生物目录》(2023年版)《病原微生物实验室生物安全管理条例》《可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样本运输管理规定》《GB19489-2008实验室生物安全通用要求》(以下简称“GB19489-2008”)《WS589-2018病原微生物实验室生物安全标识》(以下简称“WS589-2018”)《WS/T852-2025感染性物质运输标准》(以下简称“WS/T852-2025”)WHO《实验室生物安全手册》(第6版)美国CDC/NIH《微生物学与生物医学实验室生物安全》(第6版，以下简称“CDC/NIHBMBL”第6版)加拿大PHAC/CFIA《第三风险组真菌生物安全指令》(2023)和《医疗废物分类目录》(2021年版)感染性物质运输标准。检索截止日期为2026年3月31日。3．预调研与条款修订编写组完成推荐意见初稿后，邀请12位资深真菌学、感染病学、临床微生物学、医院感染管理及病原微生物实验室生物安全领域专家进行预调研。专家以函审或会议形式对初稿条款的必要性、适用性、完整性及表述准确性进行评价，并提出合并、删除、增补和修订意见。编写组根据预调研结果对条款进行整理和完善，形成用于正式德尔菲法咨询的候选条款池。4．德尔菲专家咨询本共识采用改良德尔菲专家咨询法形成推荐意见。该方法学参考Barrett等提出的改良德尔菲流程：条款池通过前期文献梳理、核心组讨论及预调研形成，首轮采用封闭式问卷，目的在于评价既定条款的适用性与可操作性，并促成意见收敛，而非从零生成新条目。鉴于推荐意见系对现行法规与技术规范的操作化细化，前期已通过法规梳理、核心组讨论及预调研形成候选条款池，专家咨询旨在评价既定条款的适用性与可操作性并促成意见收敛，故首轮采用封闭式问卷。专家以5级利克特(Likert)量表对每条推荐意见的赞同度评分，共识形成须同时满足以下4项标准：(1)评分为4~5分(赞同/很赞同)的专家比例≥75%；(2)评分为1~2分(很不赞同/不赞同)的专家比例<10%；(3)评分为3分(中立)的专家比例<20%；(4)评分中位数≥4。若上述4项标准全部满足，视为达成共识；若第(1)(2)项满足但第(3)项或第(4)项未满足，视为达成基本共识但存在显著分歧，编写组应根据专家修改意见对条款进行修订，并开展第二轮咨询；若第(1)项或第(2)项未满足，视为未达成共识，该条款应退回编写组重新拟定或予以删除。第一轮专家函询共发放问卷84份，回收有效问卷84份，专家积极系数为100%。15条推荐意见的评分均值为4.810~4.952分，变异系数为0.043~0.123，均<0.25；满分率为83.3%~95.2%，均>80%；Cronbach′sα系数为0.909，内部一致性优秀。依据上述指标，15条推荐意见均达成共识。鉴于首轮全部意见已达共识标准，且专家文字建议多为表述细化与参数补充，不涉及条款存废分歧，故未再行第二轮函询，由编写组整合修订后凝练为9条推荐意见，经核心组审议后定稿。证据来源等级与推荐强度本共识参照牛津循证医学中心(OxfordCentreforEvidence-BasedMedicine，OCEBM)证据等级标准，对每条推荐意见标注证据等级(1~5)及推荐强度(A、B、C、D)。A级系一致的1级证据；B级系一致的2级或3级证据，或基于1级证据的外推(指将数据应用于与原始研究情况存在潜在重要差异的情境)；C级系4级证据，或基于2级或3级证据的外推；D级系5级证据，或任何级别中不一致、不充分的研究。鉴于菌株生物安全管理属于操作规范类议题，其证据来源与临床诊疗指南存在本质差异，核心依据多为国家法规、国际技术标准、实验室感染事件回顾及长期保藏实践经验，而非随机对照临床试验。为保证证据等级标注的一致性与可解释性，编写组对非临床来源证据作如下分类映射：(1)国家法律法规及强制性国家标准(如《病原微生物实验室生物安全管理条例》、GB19489-2008)，具有法律或技术强制力，视为高质量规范性证据，对应1级；(2)国际权威技术标准与官方监管指令(如WHO《实验室生物安全手册》(第6版)、CDC/NIHBMBL第6版、加拿大PHAC/CFIA《第三风险组真菌生物安全指令》(2023)，系基于全球实验室感染事件回顾及多中心实践归纳形成的系统性技术指南，对应1~2级；(3)行业技术标准、菌种保藏操作规程及专家组实践经验，对应2~3级；(4)个案报告或理论推导，对应4~5级。当同一条款同时涉及多级证据来源时，采用“就高原则”与“核心参数原则”相结合的复合定级方法：若条款整体框架由法规或强制性标准支撑，则整体证据等级不低于该法规等级；若条款中的核心技术参数(如具体时限、浓度、温度、操作细则等)超出法规原文范围，且主要依据国际指南、行业标准或专家经验制定，则以支撑该核心参数的最高等级证据作为该条款的最终定级依据。上述分类及复合定级规则经本共识德尔菲专家咨询会讨论通过，作为OCEBM标准在菌株生物安全管理领域的适用性补充。最终推荐强度由专家组依据OCEBM推荐标准，结合我国实验室生物安全管理实际独立判定；编写组已在每条推荐意见的“依据”中分别标注各级来源及其对应等级，确保定级可追溯、可复核。为便于全文表述，本共识对菌株移动场景作如下术语界定：同一法人单位内部或同一建筑单元内的移动称为转运；跨法人单位或跨地区的移动称为运输。本共识适用于依法具备相应资质并开展高致病性真菌活菌株保藏、复苏、领用、转运、运输、灭活及废物处置的实验室或保藏平台。二、共识推荐意见高致病性真菌菌株的管理贯穿从入库保藏到最终退出的全生命周期，涉及保藏、转运、实验操作、灭活处置、应急处置及退出管理等多个相互衔接的环节，并以法规标准、BSL-3设施、人员培训及质量追溯作为基础保障，见图1。一、总则与前提从事高致病性真菌活菌株保藏、转运及灭活处置的实验室，须具备符合国家标准的BSL-3防护设施，并经单位生物安全委员会及属地卫生健康主管部门备案并审批。保藏活动应在合规的生物安全防护区内进行，涉及活菌株的复苏、转管、开启等操作须在负压B2级生物安全柜内完成，操作区域与常规医学真菌实验区须实现物理隔断隔离。保藏设备应具备应对地震、台风等自然灾害及断电的防护条件，关键设备须配备不间断电源或备用制冷系统。参与保藏、转运及灭活处置的人员须具备相应岗位资质，严禁个人私自保藏高致病性真菌菌株。二、保藏管理菌株保藏是诊断后病原复核、结果追溯、质量控制及后续研究的重要基础，也是菌株全周期管理的起点和泄漏风险最集中的环节。高致病性真菌在保藏期间并非静态休眠，其对温度波动的独特耐受性意味着一旦设备故障或断电，菌株可在较宽温度范围内恢复代谢活性；而双相真菌的形态转化特性，又使得复苏验证过程中可能出现意料之外的产孢风险。因此，保藏管理须从分区隔离、容器条件、标识设备、台账追溯和周期清理5个维度建立闭环。高致病性真菌相关材料按存放要求分为两类：(1)活菌材料：菌株、活菌培养物及待验证菌悬液，须存放于专用独立冰箱(活菌保藏区)；(2)非活性材料及已灭活材料：DNA提取物、甲醛固定标本、石蜡包埋组织等经固定或提取处理已丧失培养活性的材料，以及经培养法验证确认无活菌残留或经高压蒸汽灭菌及化学灭活处置后的材料，须与活菌材料物理隔离，存放于另一台独立冰箱或灭活材料专区，严禁进入活菌保藏区。来源不明或未经充分验证者，须补行高压蒸汽灭菌或化学灭活。存放高致病性真菌的冰箱、保藏柜或液氮罐须按GB19489-2008及WS589-2018要求张贴醒目的生物危害警示标识，实行专用管理，双人双锁，置于独立房间。禁止存放试剂、食品、个人物品及其他非相关标本。推荐意见1：高致病性真菌活菌株保藏容器与条件高致病性真菌菌株保藏首选－80℃超低温冻存(15%~30%甘油肉汤)；具备液氮保藏条件时，可采用液氮罐保藏；冻干保藏须在BSL-3实验室内进行，不作为日常首选。保藏容器须采用外旋螺口冻存管或硼硅酸盐冻干安瓿，并置于二次密封的防水、耐压、耐低温塑料盒中。(证据等级：2A)【说明】双相真菌在－80℃甘油冻存条件下可维持活力5年以上，甘油作为冷冻保护剂可减轻冰晶对细胞壁的损伤。具备液氮保藏条件时，可采用液氮罐保藏。冻存管宜采用外旋螺口、带O型圈密封的款式，翻盖或按压盖冻存管因密封可靠性不足，不推荐用于长期保藏。冻存管标签宜采用－80℃或液氮罐专用标签纸打印，并辅以手动书写标签作为备份。双相真菌在保藏期间对温度波动具有独特耐受性；若保藏设备发生长期故障，内部温度回升后菌株可逐渐恢复代谢活性，粗球孢子菌关节孢子甚至可在－15℃~37℃及广泛湿度范围内保持活力，增加后续开启时的暴露风险。二次密封盒是防止主容器破裂后交叉污染的必要但非充分条件，保藏安全须依托BSL-3设施、专用独立设备、分区管理及双人双锁制度共同构成闭环，不可因使用二次密封盒而降低其他层级防护要求。二次密封盒的开启、菌株复苏及转管操作均须在生物安全柜内进行。冻干保藏属易产生气溶胶的高风险操作，须在BSL-3实验室内进行。冻干安瓿为真空环境，开启时内外压差可导致孢子气溶胶化外泄；抽冻干粉亦须在严格负压环境下完成。鉴于冻干过程存在熔封失败、安瓿爆裂等损耗风险，日常保藏宜选用－80℃可重复冻存管；确需冻干者，应确保菌株处于非产孢、非菌丝相状态，菌量充足且具备备份。【依据】加拿大PHAC/CFIA《第三风险组真菌生物安全指令》(2023)明确要求“所有冷冻库存须具备二次密封容器”。CDC/NIHBMBL第6版推荐真菌长期保藏采用“超低温冷冻配合冷冻保护剂或冻干法”。《WS315-2025人间传染的病原微生物菌(毒)种保藏机构设置技术标准》将冻干法列为合法保藏方法之一，但规定冻干操作应在相应生物安全等级的实验室内进行。推荐意见2：菌株出入库双人核对与全周期追溯制度建立菌株出入库双人核对制度：入库时须核对菌种名称、编号、数量(管数)、保藏日期、保藏方式及操作人签名；出库时须核对领用人BSL-3操作资质、用途符合伦理批件范围，并记录领用人、预计归还日期及审批人签名；分装使用时须记录分装管数、每管标识及剩余母液处理方式(继续保藏或销毁)；归还时须核验菌株完整性及数量，记录归还日期及核验人签名。电子台账与纸质台账须双备份并定期交叉核对。(证据等级：1A)【说明】高致病性真菌在菌丝相时的宏观培养特征与常见环境霉菌(如曲霉属、青霉属)相似，实验室通常依赖标签而非肉眼形态学进行菌株鉴定。反复冻融后标签容易丢失，实验人员难以凭肉眼将高致病性真菌与普通环境霉菌快速区分，误开误取风险显著高于可通过革兰染色等快速方法初筛的细菌类病原体。双人核对须落实为A岗操作与B岗复核的并联流程：入库时A岗录入台账，B岗逐项核对实物(菌种名称、编号、数量/管数、保藏日期、保藏方式)，确认无误后双人签字；出库时A岗核验领用人资质及伦理批件范围，B岗核对实物与台账一致性，双人签字后方可放行；分装及归还环节需同步更新台账状态。电子台账与纸质台账交叉核对周期不超过1个月。保藏机构应建立菌株档案，永久留存入库菌株的原始来源、研究用途及关键表型/基因型数据。对来源于临床诊断的阳性培养物、疑似分离株，应建立与原始样本或检测记录的关联信息，并在复核确认后纳入相应的保藏、移交或灭活处置流程，确保菌株来源、鉴定结果和后续处置可追溯、可核查。【依据】《病原微生物实验室生物安全管理条例》要求保藏机构“制定严格的安全保管制度，做好病原微生物菌(毒)种和样本进出和储存的记录，建立档案制度，并指定专人负责”。《人间传染的病原微生物菌(毒)种保藏机构管理办法》进一步明确保藏机构应“做好菌(毒)种或样本的出入库、储存和销毁等原始记录”。《WS233-2017病原微生物实验室生物安全通用准则》规定高致病性病原微生物菌(毒)种及感染性样本的保存应实行双人双锁，入库、出库及销毁应记录并存档。推荐意见3：定期核查与超期菌株处置持有菌株的实验室应每季度对高致病性真菌保藏清单进行核对，确保账物相符；对珍贵或唯一的菌株，宜每1~2年抽检复苏1次，复苏后须进行菌种鉴定复核，并再次冻存备份，以验证保藏效果。本共识基于风险管理实践，设定5年为保藏周期合理上限。对超过保藏期限(本共识建议上限为5年)或研究价值有限、来源不明的菌株，应及时进行灭活处置并记录。(证据等级：2A)【说明】季度核对应由实验室负责人与生物安全员协同实施，重点核对台账与实物库存的一致性、容器标签完整性及保藏设备运行状态。发现温度异常或设备报警时，应将受影响菌株优先复苏验证，不可仅凭外观判断存活。对来源不明但具有潜在研究价值的菌株，建议先完善信息(如测序鉴定)后按规定继续保藏或评估后处置。超期菌株的复苏验证须全程在生物安全柜内进行；长期冻存后菌株活力下降，复苏培养过程中其形态转化具有不可预测性，原本登记为酵母相的菌株可能在培养中出现菌丝相转化并产孢，操作人员不可因“仅验证活力”而降低防护等级。实验室对不再需要的菌株进行灭活处置时，应严格按照本共识推荐意见6~7的标准规范及标准操作规程执行，经实验室负责人与生物安全员双人在场确认灭活效果后方可移交医疗废物处置流程。【依据】《病原微生物实验室生物安全管理条例》明确实验室在相关实验活动结束后，应当依照规定及时将病原微生物菌(毒)种和样本就地销毁或者送交保藏机构保管；第四十二条要求实验室设立单位定期检查病原微生物菌(毒)种和样本保存与使用规章制度的实施情况。《人间传染的病原微生物菌(毒)种保藏机构管理办法》规定保藏机构应做好菌(毒)种或样本出入库、储存和销毁等原始记录。WHO《实验室生物安全手册》(第4版)强调库存控制与定期审计。三、转运管理菌株移动是连接保藏、病原学诊断复核、质量控制及后续实验使用的关键环节，也是全周期管理中泄漏风险最高的场景之一。根据移动范围不同，可分为单位内转运与跨单位运输两个场景，二者在包装层级、审批要求和风险管控上存在显著差异。跨单位运输须遵循WS/T852-2025、《可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样本运输管理规定》，采用符合A类感染性物质标准的三层包装系统。具体包装性能参数、标识要求及审批程序见推荐意见5。夏季高温时段运输，建议使用温度记录仪全程监控，避免菌株长时间暴露于25℃以上环境。运输前应由实验室生物安全员进行包装完整性自检：主容器浸入含染料液体中10min，确认无渗漏后方可装箱。推荐意见4：菌株单位内转运规范菌株在同一法人单位内部(或同一建筑单元内)转运，须使用密封主容器(外旋螺口冻存管)、防水辅助容器(密封袋或密封盒)及防穿刺、防破损的坚固外包装(塑料或金属转运盒)。外包装应符合生物安全要求，专用、密闭，并张贴生物安全标识。主、辅助容器之间填充足量吸附材料(如棉花、吸水纸)，吸附材料须能吸收全部内装物。转运路线应书面确定并固定，优先利用气锁传递窗或专用物流通道，人工转运时应避开人员密集的公共区域。转运人员须具备相应岗位资质，熟悉转运菌株的生物学特性，能正确处理转运过程中出现的泄漏，佩戴双层手套，随身携带应急处理包(含吸附垫、消毒剂及生物危害垃圾袋)，不得交由未经培训、不具备相应岗位资质的人员转运。(证据等级：2B)【说明】真菌孢子空气动力学特性使其在微量泄漏时可随建筑通风系统长距离扩散。粗球孢子菌关节孢子可在干燥环境下长期悬浮，转运途中若发生包装破损，孢子可随气流扩散至非实验区域，污染范围远超液滴型病原体。单位内转运的三层包装须达到防破损、防泄漏目标，与运输A类包装的核心要求一致；外包装应采用气密性优于普通塑料盒的硬质密封箱，具备耐压、防跌落性能，并建议使用具备低温冷藏环境及温度显示功能的病原体专用转运箱。转运路线应选择人流量少、固定的路线，避开人员密集的公共区域。【依据】《病原微生物实验室生物安全管理条例》要求运输高致病性病原微生物菌(毒)种或样本的容器应当密封，容器或者包装材料还应当符合防水、防破损、防外泄、耐高(低)温、耐高压的要求。WS/T852-2025对感染性物质运输的包装系统、容器性能及标识作出明确规定。GB19489-2008要求样本以防止污染工作人员或环境的方式运送，并置于本质安全、防泄漏的容器中运输。加拿大PHAC/CFIA《第三风险组真菌生物安全指令》(2023)要求在生物安全防护区内或不同防护区之间移动真菌培养物时，须将主容器置于封闭的二次容器中以提供额外物理屏障，转运包装须在生物安全柜内完成，且二次容器在从生物安全柜移出前需对其表面进行消毒。推荐意见5：跨单位运输审批与禁止性规定高致病性真菌活菌株运输须按A类感染性物质标准包装；省内运输须经省级卫生健康行政部门审批；跨省运输须报国家卫生健康行政部门审批，取得《可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样本准运证书》；严禁通过普通快递、物流托运或科研人员随身携带运输。(证据等级：1A)【说明】根据《人间传染的病原微生物目录》(2023版)，上述真菌列为第二类病原微生物。依据《可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样本运输管理规定》及WS/T852-2025，第二类高致病性病原微生物的运输须按A类感染性物质管理。A类感染性物质应使用符合标准的硬质包装，包装从内到外分为主容器、辅助容器和外包装三层系统。主容器和辅助容器之间应填充足量吸附材料，易碎主容器应单独包裹放入辅助容器内，或以避免相互接触的方式放置。辅助容器与外包装之间应有足够衬垫材料，防止辅助容器在运输过程中移动，并应放置感染性物质运输清单。主容器或辅助容器应具备在－40℃~55℃范围内耐受内外95kPa压差并保持5min不渗漏的性能；且应具备通过9m自由跌落试验的性能。外包装须标明A类感染性物质标记、运输专用名称(感染性物质，可感染人的)、托运人与收货人姓名和地址、净数量、运输工作负责人姓名和电话号码；并粘贴感染性物质标签(联合国危险货物分类第6.2项，最小尺寸100mm×100mm)。若为液体菌株，装入容量不宜过满，以主容器总容量的2/3为宜。双相真菌的运输风险在于：若运输材料本身为菌丝相培养物，已具备即时气溶胶释放条件；若为酵母相冻存材料，在运输途中温控失效后长期滞留室温环境(数周)，仍存在产孢风险；粗球孢子菌关节孢子对干燥及理化因素抵抗力较强。一旦在运输途中发生包装破损，泄漏处置须使用足量消毒剂并确保充分作用时间，不可按普通细菌性泄漏的处置标准执行。接收单位在签收时须核对准运证书编号、包装完整性及温度记录，确认全程处于受控低温状态。【依据】WS/T852-2025规定了感染性物质运输的分类、管理要求、包装要求(三层包装系统、标记和标签)、运输实施要求、意外事故应急处置要求及A类感染性物质的具体包装标识与容器性能要求；《病原微生物实验室生物安全管理条例》规定“运输高致病性病原微生物菌(毒)种或者样本，应当经省级以上人民政府卫生主管部门批准”；《可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样本运输管理规定》明确运输须经省级以上卫生行政部门批准；《人间传染的病原微生物目录》(2023版)将上述真菌列为第二类，运输须按A类感染性物质管理。四、灭活与废物处置灭活是菌株全周期管理的终端防线，也是真菌生物学特性最为突出的环节之一。高致病性真菌的菌丝可穿透琼脂基质生长，厚层培养物内部的孢子有机物屏障，消毒剂难以充分接触孢子；动物组织的高蛋白含量又会快速消耗游离氯，导致表面喷洒消毒难以确保杀灭效果。因此，灭活处置不仅是生物安全管理的终端环节，也是防止诊断相关阳性培养物、疑似分离株及剩余感染性材料造成交叉污染的重要措施，可降低假阳性检测、菌种复核偏差及诊断结果追溯错误的风险。灭活方案必须针对材料性状和真菌生物学特征进行差异化设计，并在BSL-3防护区内完成闭环处置，严禁将未灭活材料转移至防护区外。高致病性真菌感染性废物须在产生地点立即弃置于专用黄色医疗废物包装袋，袋外醒目标注“感染性废物(高致病性病原微生物)”及产生日期；暂存时限不超过48h，建议条件允许时当天高压处理，暂存区域实行上锁管理。黄色医疗废物袋须为加厚防刺穿材质，盛装量不超过袋容量的3/4，采用鹅颈结或扎带密封确保袋口密闭。污染针头、破碎玻璃器皿、解剖器械、载玻片等损伤性废物须直接弃置于符合标准的利器盒，建议每次实验完成后及时灭菌处置，而非待盛装量达限后统一灭菌，利器盒盛装量达到3/4时封闭，整体作为感染性废物就地高压蒸汽灭菌后按医疗废物处置，禁止徒手清洗、分拣或折断污染玻璃器皿。涉及高致病性真菌的所有废物应遵循闭环管理原则：严禁直接丢弃未灭活材料入垃圾桶或下水道；优先在BSL-3防护区内完成就地高压蒸汽灭菌或化学灭活处置后，方可按感染性废物规范转出；若确需直接移交医疗废物集中处置单位，须确保已充分灭活并双层密封包装，粘贴生物危害标签，交有资质医疗废物处置单位集中处理。所有保藏及操作部位均应实行双人双锁管理。推荐意见6：液体培养物与菌悬液的高压蒸汽灭菌液体培养物、菌悬液及液体标本须在BSL-3防护区内的生物安全型高压灭菌器中就地灭菌，灭菌参数为121℃、压力0.1MPa(表压)、持续时间≥30min、湿热饱和蒸汽；若为产孢丰富或含大量菌丝固形物的菌株，宜适当延长灭菌时间或提高灭菌温度，以确保热穿透效果。灭菌效果须以化学指示卡或嗜热脂肪芽孢杆菌生物指示剂验证。(证据等级：2B)【说明】高压蒸汽灭菌是灭活真菌繁殖体、分生孢子及菌丝片段的最可靠方法。GB19489-2008附录C推荐121℃、不少于15min作为标准灭菌程序，该参数系针对常规细菌负载的理想条件。文献证实121℃、15min的湿热灭菌对粗球孢子菌有效；本共识在此基础上推荐延长至30min，主要考虑实验室实际负载差异：液体培养物体积、容器装量及真菌菌丝/孢子团块分布不均匀可导致热量穿透延迟，延长作用时间可覆盖不同负载条件并确保安全余量。验证为必需环节，不得省略：固体灭菌包的化学指示卡应置于包内最难穿透处并完全变色；液体负载应在容器外壁或灭菌器内放置化学指示条。BSL-3实验室灭菌器应为双扉跨壁安置，灭菌操作须在防护区侧完成。生物指示剂(嗜热脂肪地芽孢杆菌ATCC7953)培养48h阴性方可确认灭菌成功。灭菌操作须由实验室负责人与生物安全员双人记录时间、温度、方法及操作者；应随机抽取灭菌后培养物进行复苏培养验证，以进一步确认灭菌效果。所有高致病性真菌液体培养物必须在BSL-3防护区内的生物安全型高压灭菌器中就地处置，严禁转移至防护区外或普通灭菌设备处理。【依据】GB19489-2008要求“在实验室防护区内设置生物安全型高压蒸汽灭菌器”；附录C推荐高压蒸汽灭菌(121℃，不少于15min)作为标准灭菌程序；CDC/NIHBMBL第6版将高压蒸汽灭菌列为生物材料灭活方法。推荐意见7：固体培养物、动物组织及病理标本的灭活固体培养物(琼脂平板、斜面培养物)、培养基、耗材、手套等固体物品、感染动物组织及病理标本可采用高压蒸汽灭菌或化学灭活。化学灭活推荐0.5%次氯酸钠(有效氯浓度约5000mg/L)作用≥30min；对产孢丰富、菌丝密集或有机物含量高的材料，可提高至1.0%次氯酸钠(有效氯浓度约10000mg/L)；或采用0.5%过氧乙酸作用≥1h。对于整只动物尸体或大块组织(>2cm厚度)，建议先进行高压蒸汽灭菌，或采用解剖剪碎后以0.5%过氧乙酸浸泡过夜(12~24h)；灭活后按感染性废物移交有资质医疗废物处置单位集中处置。(证据等级：2A)【说明】固体培养物因含琼脂，高压蒸汽灭菌时易融化溢出，建议置于耐高压的金属或硬质塑料盒内。若采用化学灭活，须确保培养物完全浸没，不可仅喷洒表面；真菌菌丝穿透琼脂基质生长，厚层琼脂或斜面培养物的内部菌丝及孢子可能因接触时间不足而存活，须先切碎，再完全浸没，或直接以足量消毒液完全浸没整块培养物，以确保内部菌丝及孢子充分接触消毒剂。动物组织因含有机物较多，可消耗消毒剂，应增加消毒液用量(组织体积的5~10倍)或延长作用时间至1h；病理标本(如甲醛固定后的组织块)固定效果受浓度、时间、组织厚度及穿透性影响，为稳妥起见，建议在丢弃前再经次氯酸钠浸泡30min。鉴于高致病性真菌孢子对化学消毒剂耐受性较强，且有机物可快速消耗游离氯，常规材料推荐0.5%次氯酸钠；对厚层培养物、产孢丰富的菌株或大块动物组织等穿透困难、有机物含量高的材料，应提高浓度至1.0%以保证消毒剂充分渗透并维持有效浓度。【依据】WS/T367-2012《医疗机构消毒技术规范》规定对经血传播病原体、分枝杆菌和细菌芽孢污染物品的消毒应使用含有效氯2000~5000mg/L的消毒液，浸泡>30min；WHO《实验室生物安全手册》(第4版)将含氯消毒剂列为实验室常用消毒剂；加拿大PHAC/CFIA《第三风险组真菌生物安全指令》(2023)推荐0.5%~1.0%次氯酸钠作为高致病真菌工作区的高水平消毒剂，并明确泄漏处置使用0.5%次氯酸钠。五、应急处置与暴露管理应急处置核心在于快速控制污染扩散、保障人员安全，并为后续医学干预争取时间。高致病性真菌泄漏后的处置复杂度远高于普通细菌：孢子可在干燥环境中长期悬浮，常规擦拭消毒可能因接触时间不足而失效，且泄漏区域的气溶胶清除需要更长的通风时间。因此，应急预案必须针对真菌的空气动力学特性和环境存活能力进行专门设计，而非简单套用通用溢洒处理流程。推荐意见8：设备故障、停电及菌株泄漏应急处置保藏设备故障、停电可能导致菌株失活或发生菌株泄漏时，应立即启动应急预案，其内容至少包括负责人、组织、应急处置内容、报告内容、报告程序、个体防护和应对措施、应急设备、污染源隔离和消毒、运输箱及其箱内物品处置、现场隔离和控制、风险沟通等。现场人员须穿戴与BSL-3防护级别相匹配的个人防护装备，确保人员安全；实行区域隔离，未经允许其他人员不得靠近；对于设备故障或停电导致菌株保存受到影响时，应立即将菌株转移至备用设备或备用保藏区域，转移过程中使用干冰或液氮临时维持低温，并按照单位内部菌株转运规范执行。对于发生菌株泄漏的情况，应立即启动完整应急预案，包括负责人组织、个体防护、区域隔离、污染源消毒及上报程序等。泄漏区域以0.5%次氯酸钠覆盖消毒，作用≥30min；或以0.5%过氧乙酸覆盖消毒，作用≥1h。事件须立即报告实验室负责人及生物安全管理部门，重大事件须按规定报告属地卫生健康主管部门，并填写《生物安全意外事件报告表》。(证据等级：2A)【说明】设备故障时，若备用设备距离较远，应使用预先准备的干冰或液氮临时维持低温，转移过程按单位内转运规范执行。泄漏处置应遵循“由外向内”的消毒原则：先以吸水纸覆盖泄漏液体，再倾倒消毒剂，达到规定消毒时限后收集于生物危害垃圾袋。泄漏处置应在原防护区内完成，脱卸个人防护装备后，应对人员手部及暴露部位再次消毒。若泄漏发生在生物安全柜内，应保持柜体持续运行30min以清除气溶胶，再清理台面。真菌孢子可在环境中长期存活，泄漏后的消毒处置须确保消毒剂完全浸润并达到规定作用时间，不可按普通细菌性泄漏的处置标准执行。在专业人员评估或证实污染已消除、对人员不会造成感染且邻近区域未受污染后，方可解除隔离。【依据】GB19489-2008规定“发生危险材料溢洒时，应启用应急处理程序”；WHO《实验室生物安全手册》(第4版)要求实验室建立溢洒处理与应急响应程序。推荐意见9：实验人员意外暴露后的医学处置实验人员发生皮肤刺伤、切割伤或黏膜暴露后，应立即以流动水及皂液冲洗≥15min，从近心端向远心端轻轻挤压(禁止用力挤压或吸吮)，再以碘伏消毒；黏膜暴露者以无菌生理盐水冲洗。若发生气溶胶呼吸道暴露，暴露人员应立即撤离至安全区域，监测呼吸道症状并留取基线血清，必要时进行胸部影像学检查。球孢子菌暴露者应在暴露后24h内启动预防性抗真菌治疗(伊曲康唑或氟康唑400mg/d，疗程6周)，并配合基线及随访血清学检测。副球孢子菌暴露者建议给予伊曲康唑200mg/d口服30d作为暴露后预防，并监测抗体转换。组织胞浆菌及芽生菌暴露者目前尚无明确暴露后预防用药推荐，以医学观察与血清学监测为主。所有暴露人员均须留取基线血清，启动医学观察期不少于6周，并报告实验室负责人及生物安全管理部门。(证据等级：2A)【说明】不同高致病性真菌暴露后潜伏期存在差异。美国感染病学会(InfectionDiseasesSocietyofAmericaClinicalPracticeGuidelines，IDSA)指南(2016)建议球孢子菌实验室暴露后预防性治疗及血清学随访6周。巴西指南建议副球孢子菌实验室暴露后给予伊曲